粗壮脉纹孢菌原生质体的制备、再生及转化的条件

doi:10.7506/spkx1002-6630-201517032

食品科学

粗壮脉纹孢菌原生质体的制备、再生及转化的条件

杨建远1,2，李静1，范亚苇1，张炳火2，邓泽元1,*

1.南昌大学食品科学与技术国家重点实验室，江西南昌 330047；2.九江学院药学与生命科学学院，江西九江 332000

出版日期:2015-09-15 发布日期:2015-09-11

Protoplast Production, Regeneration and Transformation of Neurospora crassa

YANG Jianyuan1,2, LI Jing1, FAN Yawei1, ZHANG Binghuo2, DENG Zeyuan1,*

1. State Key Laboratory of Food Science and Technology, Nanchang University, Nanchang 330047, China;
2. College of Pharmaceutical and Life Sciences, Jiujiang University, Jiujiang 332000, China

Online:2015-09-15 Published:2015-09-11

摘要/Abstract

摘要：

为建立原生质体介导的粗壮脉纹孢菌遗传转化系统，本研究主要考察了复合酶解液、菌龄及酶解时间对粗壮脉纹胞菌原生质体生成及再生的影响。结果表明，粗壮脉纹胞菌孢子悬液接种在马铃薯葡萄糖琼脂（potatodextrose agar，PDA）液体培养基中，30 ℃条件下摇床培养10 h的菌丝，采用0.5 g/100 mL蜗牛酶＋0.5 g/100 mL溶壁酶＋1 g/100 mL纤维素酶的复合酶解液、30 ℃条件下酶解10 h，粗壮脉纹胞菌原生质体生成及再生最为适合。在此条件下，原生质体生成数可达4.53×106 个，38#再生培养基中的再生数可达1.41×106 个，再生率达31.71%，聚乙二醇介导PAKHB载体转化NC原生质体，每微克质粒可获得8 个以上的转化子。

关键词: 粗壮脉纹孢菌, 原生质体, 制备, 再生, 转化

Abstract:

This study aimed to establish protoplast-mediated genetic transformation system of Neurospora crassa. Several
major factors influencing the production and regeneration of N. crassa protoplast, such as mycelium incubation time,
macerozyme and digestion time, were investigated. The results showed that mycelium incubation in liquid PDA medium at
30 ℃ for 10 h, and enzymatic hydrolysis at 30 ℃ for 10 h with a macerozyme solution containing 0.5 g/100 mL snailase,
0.5 g/100 mL lyticase and 1.0 g/100 mL cellulase were optimal for the production and regeneration of N. crassa protoplast. Under
these conditions, the number of production and regeneration in 38# regeneration medium of Neurospora crassa protoplast were
4.53 × 106 and 1.41 × 106, respectively, and the regeneration rate was 31.71%. Transformation efficiency with PAKHB
plasmid by PEG-mediated was more than 8 transformants per μg of plasmid DNA.

Key words: Neurospora crassa, protoplasts, production, regeneration, transformation

中图分类号:

TS201

杨建远，李静，范亚苇，张炳火，邓泽元. 粗壮脉纹孢菌原生质体的制备、再生及转化的条件[J]. 食品科学, doi: 10.7506/spkx1002-6630-201517032.

YANG Jianyuan, LI Jing, FAN Yawei, ZHANG Binghuo, DENG Zeyuan. Protoplast Production, Regeneration and Transformation of Neurospora crassa[J]. FOOD SCIENCE, doi: 10.7506/spkx1002-6630-201517032.

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Protoplast Production, Regeneration and Transformation of Neurospora crassa

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