鲢鱼卵中两种高分子半胱氨酸蛋白酶抑制因子的纯化与鉴定

doi:10.7506/spkx1002-6630-201523002

食品科学

鲢鱼卵中两种高分子半胱氨酸蛋白酶抑制因子的纯化与鉴定

李树红，蒋然然，杨娟，刘玲，钟海霞，陈志光，李美良，李冉

四川农业大学食品学院，四川雅安 625014

出版日期:2015-12-15 发布日期:2015-12-24

Purification and Characterization of Two High-Molecular-Weight Cystine Proteinase Inhibitors (CPIs) from Silver Carp Eggs

LI Shuhong, JIANG Ranran, YANG Juan, LIU Ling, ZHONG Haixia, CHEN Zhiguang, LI Meiliang, LI Ran

College of Food Science, Sichuan Agricultural University, Ya’an 625014, China

Online:2015-12-15 Published:2015-12-24

摘要/Abstract

摘要：

以鲢鱼卵为材料，通过匀浆、酸处理和超滤制备半胱氨酸蛋白酶抑制因子（cystine proteinase inhibitors，CPIs）粗提液，进而经Sephacryl S-100分子筛层析、Blue Sepharose 6 Fast Flow染料亲和层析、SP-SepharoseFast Flow阳离子交换层析、ConA Sepharose 4B亲和层析，获得两种纯化的高分子CPIs，即ConA不吸附部分a-1和吸附部分的糖蛋白a-2。二者分别被纯化了102.62 倍和274.28 倍，酶活回收率分别为2.02%和1.42%。通过TSK G2000 SWXL凝胶过滤高效液相色谱结合十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳及其反相酶谱法分析，表明a-2及再次经高效液相色谱法回收的a-1在电泳图上均呈单一带，a-2为单一峰，且a-1的分子质量为139 ku，a-2的分子质量为92 ku。二者均能抑制半胱氨酸蛋白酶（木瓜蛋白酶和鲢鱼组织蛋白酶L）但不抑制丝氨酸蛋白酶（胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶）。根据a-1和a-2的分子质量及抑制活性特征和糖蛋白特性，推测二者可能为鲢鱼卵Kininogens的不同形式。

关键词: 鲢鱼卵, 半胱氨酸蛋白酶抑制因子, Kininogen, 纯化, 鉴定

Abstract:

In this study, crude extract rich in cystine proteinase inhibitors (CPIs) from silver carp eggs was prepared by
homogenization, acidification and ultrafiltration. After purification by an array of chromatography on Sephacryl S-100,
SP-Sepharose Fast Flow, Blue Sepharose 6 Fast Flow and ConA Sepharose 4B, two high-molecular-weight (HMW) CPIs, a-2
and a-1 with or without absorption on ConA, were obtained. They were purified by 102.62 and 274.28 folds, with recoveries
of 2.02% and 1.42% respectively. Through analysis by TSK G2000 SWXL gel filtration HPLC and identification by
SDS-PAGE and reverse zymography, both part of a-1 recovered by HPLC and a-2 showed a single band on electrophoresis
with molecular weight of 139 and 92 ku, respectively. Both of them could inhibit cysteine protease (papain and silver carp
cathepsin L) but not serine protease (trypsin and chymotrypsin). From the characteristics, inhibitory activity and glycoprotein
features, a-1 and a-2 may be the different forms of kininogens in silver carp eggs.

Key words: silver carp egg, cysteine protease inhibitors, kininogen, purification, identification

中图分类号:

TS254.1

李树红，蒋然然，杨娟，刘玲，钟海霞，陈志光，李美良，李冉. 鲢鱼卵中两种高分子半胱氨酸蛋白酶抑制因子的纯化与鉴定[J]. 食品科学, doi: 10.7506/spkx1002-6630-201523002.

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鲢鱼卵中两种高分子半胱氨酸蛋白酶抑制因子的纯化与鉴定

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