食品科学 ›› 2017, Vol. 38 ›› Issue (14): 1-8.doi: 10.7506/spkx1002-6630-201714001
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崔青,钱炳俊,姚晓敏,季顺利,鲁飞凤,吴静,张建华
CUI Qing, QIAN Bingjun, YAO Xiaomin, JI Shunli, LU Feifeng, WU Jing, ZHANG Jianhua
摘要: 纳豆激酶由纳豆芽孢杆菌(Bacillus subtilis natto)的aprN基因编码,在体内外具有很强的溶解纤维蛋白活性。利用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)技术扩增B. subtilis natto的aprN基因,并依据B. subtilis的密码子偏好性优化了起始30 个氨基酸的密码子,构建了重组表达质粒pHT01-aprN。经限制性酶酶切、PCR扩增和测序验证了其编码的正确性。通过电击法将含有强启动子的pHT01-aprN导入B. subtilis,利用氯霉素抗性筛选获得B.s 168/pHT01-aprN工程菌。经IPTG诱导表达,摇瓶发酵培养最高酶活力为(289.00±3.42) U/mL,是野生菌的3.9 倍,酶活力表达稳定性良好。
中图分类号: