阪崎克罗诺杆菌单克隆抗体的制备及其间接竞争-ELISA检测方法

doi:10.7506/spkx1002-6630-201720039

食品科学 ›› 2017, Vol. 38 ›› Issue (20): 268-272.doi: 10.7506/spkx1002-6630-201720039

阪崎克罗诺杆菌单克隆抗体的制备及其间接竞争-ELISA检测方法

翟绪昭，曾海娟，王广彬，董庆利，谢曼曼，丁承超，刘武康，王淑娟，李杰，刘箐

（1.上海理工大学医疗器械与食品学院，上海 200093；2.徐州绿健乳品饮料有限公司，江苏?徐州 221006）

出版日期:2017-10-25 发布日期:2017-09-29
基金资助:
上海市科委“科技创新行动计划”长三角科技联合攻关领域项目（15395810900）；徐州绿健乳品饮料有限公司“乳制品生产体系致病菌快速检测”项目（3A15308006）

Preparation of Monoclonal Antibodies against Cronobacter sakazakii and Development of an Indirect Competitive ELISA for detection of this bacterium

ZHAI Xuzhao, ZENG Haijuan, WANG Guangbin, DONG Qingli, XIE Manman, DING Chengchao, LIU Wukang, WANG Shujuan, LI Jie, LIU Qing

(1. School of Medical Instrument and Food Engineering, University of Shanghai for Science and Technology, Shanghai 200093, China; 2. Xuzhou Lüjian-Dairy Beverage Co. Ltd., Xuzhou 221006, China)

Online:2017-10-25 Published:2017-09-29

摘要/Abstract

摘要： 以阪崎克罗诺杆菌标准菌株ATCC 29004免疫BALB/c小鼠，采用杂交瘤细胞技术，经过两次细胞融合共制备出7 株分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株（1E9、2A7、2D10、3E5、5B10、6E3、12A2）。其中2A7、2D10、3E5、12A2的效价达到了1∶256?000，6E3的效价为1∶128?000，5B10的效价为1∶64?000，1E9的效价为1∶32?000。亚型鉴定结果显示1E9的亚型为IgG1，6E3的亚型为IgG2b，其余抗体2A7、2D10、3E5、5B10、12A2的亚型均为IgG2a。对7?株抗体进行特异性检测结果显示，2A7能与3?株阪崎克罗诺杆菌（ATCC?29004、ATCC?29544、ATCC?12868）都结合，1E9能与其中两株（ATCC?29004、ATCC?12868）结合，且与其他11?株类似菌和常见致病菌交叉反应结果显示7?个抗体均有良好的特异性。用2A7建立的间接竞争酶联免疫吸附测定法对阪崎克罗诺杆菌的检测灵敏度可达到106?CFU/mL。

关键词: 阪崎克罗诺杆菌, 单克隆抗体, 间接竞争ELISA

Abstract: BALB/c mice were immunized with Cronobacter sakazakii type strain ATCC 29004. Seven strains (1E9, 2A7, 2D10, 3E5, 5B10, 6E3, and 12A2) of hybridoma cell lines that secreted monoclonal antibodies were prepared by two cycles of cell fusion using hybridoma technique. The titers of 2A7, 2D10, 3E5 and 12A2 reached 1:256 000, the titer of 6E3 was 1:128 000, the titer of 5B10 was 1:64 000 and the titer of 1E9 was 1:32 000. The results of subtype identification showed that the subtype of 1E9 was IgG1, the subtype of 6E3 was IgG2b, and the subtypes of the other antibodies 2A7, 2D10, 3E5, 5B10 and 12A2 were all IgG2a. 2A7 could specifically bind to 3 strains of Cronobacter sakazakii (ATCC 29004, ATCC 29544, and ATCC 12868), and 1E9 could specifically bind to two of them (ATCC 29004 and ATCC 12868). The results of cross-reaction with 11 other similar pathogens showed that 7 antibodies had good specificity. The sensitivity of indirect competitive enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) using 2A7 reached 106 CFU/mL for the detection of Cronobacter sakazakii.

Key words: Cronobacter sakazakii, monoclonal antibodies, indirect competitive enzyme linked immunosorbent assay (ELISA)

中图分类号:

TS207.4

翟绪昭，曾海娟，王广彬，董庆利，谢曼曼，丁承超，刘武康，王淑娟，李杰，刘箐. 阪崎克罗诺杆菌单克隆抗体的制备及其间接竞争-ELISA检测方法[J]. 食品科学, 2017, 38(20): 268-272.

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阪崎克罗诺杆菌单克隆抗体的制备及其间接竞争-ELISA检测方法

Preparation of Monoclonal Antibodies against Cronobacter sakazakii and Development of an Indirect Competitive ELISA for detection of this bacterium

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