蜡样芽孢杆菌Bacillus cereus LJ01中亚硝酸盐还原酶的基因克隆、表达和纯化

doi:10.7506/spkx1002-6630-201806012

食品科学 ›› 2018, Vol. 39 ›› Issue (6): 69-74.doi: 10.7506/spkx1002-6630-201806012

蜡样芽孢杆菌Bacillus cereus LJ01中亚硝酸盐还原酶的基因克隆、表达和纯化

陈思敏，罗彤晖，费永涛，吴健锋，刘冬梅*

（华南理工大学食品科学与工程学院，广东?广州 510640）

出版日期:2018-03-25 发布日期:2018-03-14
基金资助:
国家自然科学基金青年科学基金项目（31101254）；广东省自然科学基金项目（S2011010005679）；广东省科技攻关项目（2014A020208019；2013B020312002）

Cloning, Expression and Purification of the Nitrite Reductase Gene from Bacillus cereus LJ01

CHEN Simin, LUO Tonghui, FEI Yongtao, WU Jianfeng, LIU Dongmei*

(School of Food Science and Engineering, South China University of Technology, Guangzhou 510640, China)

Online:2018-03-25 Published:2018-03-14

摘要/Abstract

摘要： 利用克隆表达技术，对一种蜡样芽孢杆菌Bacillus cereus LJ01的亚硝酸盐还原酶（nitrite reductase，NiR）基因进行克隆、原核表达，利用Ni柱亲和层析和DEAE Sepharose Fast Flow交换层析对表达的重组NiR进行纯化，分析重组酶的性质。研究结果显示，该NiR含有一个1?623?bp的开放阅读框，编码540?个氨基酸序列，重组NiR的分子质量约为67?ku；该酶中同时存在铁离子和铜离子，且含量分别为51.0?mg/kg和184.5?mg/kg；圆二色谱结果显示α-螺旋结构在重组NiR中所占比例最大。

关键词: 亚硝酸盐还原酶, 蜡样芽孢杆菌, 基因克隆, 蛋白表达, 工程菌

Abstract: A nitrite reductase (NiR) gene was cloned from Bacillus cereus LJ01 and expressed in Escherichia coli. The recombinant enzyme was purified by His-Tag nickel affinity chromatography (Ni Sepharose 6 Fast Flow) and DEAE Sepharose Fast Flow ion exchange chromatography for characterization. The results showed that the recombinant NiR gene contained a 1 623 bp-length ORF encoding 540 amino acids, and the molecular weight was about 67 ku. Iron and copper ions were simultaneously present in the enzyme and their contents were 51.0 and 184.5 mg/kg, respectively. The results of circular dichroism showed that the helix structure accounted for the largest proportion of the recombinant NiR.

Key words: nitrite reductase, Bacillus cereus, gene cloning, protein expression, engineered strain

中图分类号:

Q939.97

陈思敏，罗彤晖，费永涛，吴健锋，刘冬梅. 蜡样芽孢杆菌Bacillus cereus LJ01中亚硝酸盐还原酶的基因克隆、表达和纯化[J]. 食品科学, 2018, 39(6): 69-74.

CHEN Simin, LUO Tonghui, FEI Yongtao, WU Jianfeng, LIU Dongmei. Cloning, Expression and Purification of the Nitrite Reductase Gene from Bacillus cereus LJ01[J]. FOOD SCIENCE, 2018, 39(6): 69-74.

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蜡样芽孢杆菌Bacillus cereus LJ01中亚硝酸盐还原酶的基因克隆、表达和纯化

Cloning, Expression and Purification of the Nitrite Reductase Gene from Bacillus cereus LJ01

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