食品科学 ›› 2017, Vol. 38 ›› Issue (16): 71-78.doi: 10.7506/spkx1002-6630-201716011
杨菊梅,马建忠,王永刚,邓子兵,魏艳,潘博,李印武
YANG Jumei, MA Jianzhong, WANG Yonggang, DENG Zibing, WEI Yan, PAN Bo, LI Yinwu
摘要: 应用IEDB、DNAStar、DNAMAN和SnapGene等生物信息学工具对草莓轻型黄边病毒外壳蛋白的氨基酸残 基序列进行分析。选择一段抗原性较强的肽段(位于外壳蛋白27~38氨基酸残基处),依据大肠杆菌(Escherichia coli)的密码子偏好性化学合成了该肽段的DNA编码序列(AE)。AE片段克隆至E. coli表达载体pET32a(+) 的EcoRⅠ和XhoⅠ位点,获得重组质粒pET32a(+)-AE。含AE片段的开放阅读框长561 bp,编码了一个187氨 基酸残基的重组融合蛋白,理论分子质量为20.29 kD。重组质粒pET32a(+)-AE分别在E. coli BL21(DE3)和 E. coli Rosetta中进行了诱导表达和条件优化。重组融合蛋白在E. coli Rosetta中的最佳表达条件为1.5 mmol/L异丙 基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl β-D-1-thiogalactopyranoside,IPTG)、35 ℃诱导表达2 h,产率为13.22 mg/L;在 E. coli BL21(DE3)中的最佳表达条件是为0.5 mmol/L IPTG、30 ℃诱导表达2 h,产率为9.55 mg/L。重组融合蛋白 经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离、质谱鉴定表明,其含有所预测的草莓轻型黄边病毒外壳蛋白抗原表 位肽段AE。AE重组融合蛋白经Ni2+亲和色谱纯化、EK酶切、分子筛除去融合蛋白标签后,免疫产蛋鸡。从免疫鸡 所产鸡蛋中提取鸡卵黄免疫球蛋白(immunoglobulin of yolk,IgY),Dot-Blot检测抗体结合活性。结果表明,所提 取的IgY可特异性识别AE肽段和SMYEV外壳蛋白。这一结果表明所预测的AE肽段具有较好的免疫原性。
中图分类号: