食品科学 ›› 2017, Vol. 38 ›› Issue (24): 40-46.doi: 10.7506/spkx1002-6630-201724007
刘骥,杨帆,田万帆,龙虎,孙思雨,周玉珊,赵燕英,唐俊妮
LIU Ji, YANG Fan, TIAN Wanfan, LONG Hu, SUN Siyu, ZHOU Yushan, ZHAO Yanying, TANG Junni
摘要: 葡萄球菌肠毒素M是由金黄色葡萄球菌νSa基因岛编码的分泌型超抗原。本研究将截去N端信号肽的金黄色葡萄球菌M型肠毒素(staphylococcal enterotoxin M,SEM)蛋白编码基因亚克隆至原核表达载体pET-28a(+),构建重组表达质粒pET-28a(+)-ΔNspsem;随后转化感受态E. coli Rosetta(DE3)并探讨融合蛋白最佳表达条件;利用Ni2+-Sepharose 4 Fast Flow亲合层析纯化出His-ΔNspSEM融合蛋白;经质谱鉴定,纯化的融合蛋白对SEM的氨基酸覆盖率达96.3%;凝血酶切除6×His标签肽后,圆二色谱分析表明ΔNspSEM重组蛋白富含β-折叠(35%)和β-转角(21%)以及较少α-螺旋(16%)等二级结构;荧光发射谱揭示ΔNspSEM在278?nm和295?nm波长处激发时具有相同的Trp发射峰(341?nm);十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰氨凝胶电泳分析表明ΔNspSEM重组蛋白表现出较高的热稳定性。研究结果表明重组蛋白SEM表达成功,纯化的ΔNspSEM重组蛋白溶液构象紧密并具有接近天然状态的结构,这为深入研究SEM蛋白的结构与功能提供理论支持。
中图分类号: