食品科学 ›› 2017, Vol. 38 ›› Issue (8): 17-23.doi: 10.7506/spkx1002-6630-201708004
何凤平,潘永贵,张伟敏
HE Fengping, PAN Yonggui, ZHANG Weimin
摘要: 以鲜切荸荠为材料,通过pH 7.5 Tris-HCl缓冲液浸提得到类黄酮3’-羟化酶(flavonoid 3′-hydroxylase,F3’H)粗酶液,然后采用硫酸铵分级沉淀、透析、二乙氨乙基(dicthylaminoethyl,DEAE)-纤维素离子交换层析及Sephadex G-100凝胶过滤层析进行分离纯化,最终所得纯化酶的纯化倍数达到14.01,比活力提高到478.49 U/mg,回收率为6.38%。通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamidegel electrophoresis,SDS-PAGE)进行纯度鉴定,已达到电泳纯,测定得到其分子质量约为53.09 kD。纯化酶F3′H的最适温度为30 ℃,最适pH值为7.5;以柚皮素作为底物,测得该酶的米氏常数(Km)为1.08 mmol/L,最大反应速率(vmax)为416.67 U/(min·mL);对于酶活性,高浓度的Na+表现出微弱的抑制作用,Ca2+和柠檬酸具有强烈的抑制作用,而Fe2+、Mg2+、NADPH和VC却表现出强烈的激活作用。
中图分类号: