副溶血性弧菌单克隆抗体的制备及特性鉴定

doi:10.7506/spkx1002-6630-201708011

食品科学 ›› 2017, Vol. 38 ›› Issue (8): 63-68.doi: 10.7506/spkx1002-6630-201708011

副溶血性弧菌单克隆抗体的制备及特性鉴定

谢曼曼，李建武，王广彬，曾海娟，翟绪昭，丁承超，刘武康，刘箐

1.上海理工大学医疗器械与食品学院，上海 200093；2.徐州绿健乳品饮料有限公司，江苏徐州 221006

出版日期:2017-04-25 发布日期:2017-04-24
基金资助:
上海市科委“科技创新行动计划”长三角科技联合攻关领域项目（15395810900）；徐州绿健乳品饮料有限公司“乳制品生产体系致病菌快速检测”项目（3A15308006）；上海理工大学研究生创新基金项目

Preparation and Immunological Characteristics of Monoclonal Antibodies against Vibrio parahaemolyticus

XIE Manman, LI Jianwu, WANG Guangbin, ZENG Haijuan, ZHAI Xuzhao, DING Chengchao, LIU Wukang, LIU Qing

1. School of Medical Instrument and Food Engineering, University of Shanghai for Science and Technology, Shanghai 200093, China; 2. Xuzhou Lüjian-Dairy Beverage Co. Ltd., Xuzhou 221006, China

Online:2017-04-25 Published:2017-04-24

摘要/Abstract

摘要： 为制备特异性强的副溶血性弧菌的单克隆抗体，解决单克隆抗体对免疫学检测产品研发的制约，以副溶血性弧菌（Vibrio parahaemolyticus）ATCC 17802标准菌株免疫Balb/c小鼠，经细胞融合、间接酶联免疫吸附测定法筛选，获得稳定分泌抗副溶血性弧菌（ATCC 17802）菌株的单克隆杂交瘤细胞株3F7D7E8C4，通过体内诱生腹水大量制备抗体，用亚类试剂盒测定抗体亚类为IgG1；采用辛酸硫酸铵沉淀法以及亲和层析柱对腹水进行纯化，聚丙烯酰胺凝胶电泳实验鉴定单克隆抗体的纯度。制备得到腹水抗体效价为1∶16 000，纯化后抗体效价为1∶8 000，抗体敏感性IC50达到106 CFU/mL。纯化后的抗体与12 株副溶血性弧菌均能特异性结合，与其他9 种非副溶血性弧菌的食源性致病菌均无交叉反应。

关键词: 副溶血性弧菌, 单克隆抗体, 酶联免疫吸附测定

Abstract: This study aimed to prepare a highly specific monoclonal antibody (mAb) against Vibrio parahaemolyticus for the purpose of solving the constraints on the development of immunological assays for this pathogenic microorganism. We injected Balb/c mice with V. parahaemolyticus ATCC 17802. The hybridoma cell line 3F7D7E8C4, which could stably secret mAb against ATCC 17802, was obtained after cell fusion and screening by indirect ELISA. By using a commercial kit, the mAb was identified to belong to the IgG1 subclass. The antibody titer of the ascites was 1:16 000. After purification with saturated ammonium sulfate precipitation and protein G affinity chromatography and purity analysis by sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE), the titer of the antibody was 1:8 000 and the sensitivity (IC50) was 106 CFU/mL. The purified antibody could specifically bind to 12 V. parahaemolyticus strains, and had no cross-reaction with 9 non-V. parahaemolyticus foodborne pathogens.

Key words: Vibrio parahaemolyticus, monoclonal antibody (mAb), enzyme linked immunosorbent assay (ELISA)

中图分类号:

TS207.4

谢曼曼，李建武，王广彬，曾海娟，翟绪昭，丁承超，刘武康，刘箐. 副溶血性弧菌单克隆抗体的制备及特性鉴定[J]. 食品科学, 2017, 38(8): 63-68.

XIE Manman, LI Jianwu, WANG Guangbin, ZENG Haijuan, ZHAI Xuzhao, DING Chengchao, LIU Wukang, LIU Qing. Preparation and Immunological Characteristics of Monoclonal Antibodies against Vibrio parahaemolyticus[J]. FOOD SCIENCE, 2017, 38(8): 63-68.

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副溶血性弧菌单克隆抗体的制备及特性鉴定

Preparation and Immunological Characteristics of Monoclonal Antibodies against Vibrio parahaemolyticus

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