一种米曲霉耐盐蛋白酶的纯化及酶学性质分析

doi:10.7506/spkx1002-6630-201824013

食品科学 ›› 2018, Vol. 39 ›› Issue (24): 78-84.doi: 10.7506/spkx1002-6630-201824013

一种米曲霉耐盐蛋白酶的纯化及酶学性质分析

毛丙永1，刘艳凤1，赵国忠2，崔树茂1，赵建新1,*

（1.江南大学食品学院，江苏?无锡 214122；2.天津科技大学食品工程与生物技术学院，天津 300457）

出版日期:2018-12-25 发布日期:2018-12-17
基金资助:
国家自然科学基金青年科学基金项目（31401682）；国家自然科学基金面上项目（31471721）

Purification and Characterization of a Salt-Tolerant Protease from Aspergillus oryzae 3.042

MAO Bingyong1, LIU Yanfeng1, ZHAO Guozhong2, CUI Shumao1, ZHAO Jianxin1,*

(1. School of Food Science and Technology, Jiangnan University, Wuxi 214122, China; 2. College of Food Engineering and Biotechnology, Tianjin University of Science & Technology, Tianjin 300457, China)

Online:2018-12-25 Published:2018-12-17

摘要/Abstract

摘要： 采用硫酸铵沉淀、Q-HP阴离子交换柱和Superdux 75凝胶柱等技术，从酱油大曲中纯化得到一种耐盐蛋白酶，经飞行时间质谱鉴定为钙蛋白酶RIM13，属于一种半胱氨酸蛋白酶。该蛋白酶的最适温度为50?℃；最适pH值为6.5；稳定温度为40?℃；稳定pH值为7.0；Mn2＋促进蛋白酶活力，Fe3＋、Fe2＋、Cu2＋、Ca2＋、K＋、Na＋抑制蛋白酶活力，以上金属离子对蛋白酶二级结构也产生不同程度的影响；米氏常数Km为2.43?g/L，最大反应速率Vm为103.09?mg/（L·min）。在5、10?g/100?mL和15?g/100?mL的NaCl质量浓度条件下，蛋白酶保留的酶活力分别为77.22%、54.39%以及41.15%。该蛋白酶在高盐度环境下保持较高的酶活力，因此具有潜在的工业应用价值。

关键词: 米曲霉, 蛋白酶, 纯化, 酶学性质?

Abstract: In this study, protease was purified consecutively by ammonium sulfate precipitation, Q-HP anion-exchange chromatography and Superdux 75 gel chromatography. Matrix-assisted laser desorption/ionization-time of flight/time of flight (MALDI-TOF/TOF) mass spectrometry analysis suggested that the protease was highly similar to calpain RIM13, a cysteine protease from Aspergillus oryzae. The optimal temperature was 50 ℃ and the optimal pH was 6.5. The enzyme was stable at 40 ℃ and pH 7.0. It was activated by Mn2+, but inhibited by Fe3+, Fe2+, Cu2+, Ca2+, K+ and Na+. The metal ions affected its secondary structure. The Km and Vm values of the protease for casein were 2.43 g/L and 103.09 mg/(L·min), respectively. At NaCl concentrations of 5, 10 and 15 g/100 mL, the protease retained 77.22%, 54.39% and 41.15% of its initial activity, respectively. Consequently, the protease has potential industrial applications.

Key words: Aspergillus oryzae, protease, purification, enzymatic properties

中图分类号:

Q936

毛丙永，刘艳凤，赵国忠，崔树茂，赵建新. 一种米曲霉耐盐蛋白酶的纯化及酶学性质分析[J]. 食品科学, 2018, 39(24): 78-84.

MAO Bingyong, LIU Yanfeng, ZHAO Guozhong, CUI Shumao, ZHAO Jianxin. Purification and Characterization of a Salt-Tolerant Protease from Aspergillus oryzae 3.042[J]. FOOD SCIENCE, 2018, 39(24): 78-84.

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一种米曲霉耐盐蛋白酶的纯化及酶学性质分析

Purification and Characterization of a Salt-Tolerant Protease from Aspergillus oryzae 3.042

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