EMA-LAMP方法快速检测死/活的食源性沙门氏菌

doi:10.7506/spkx1002-6300-200922077

食品科学 ›› 2009, Vol. 30 ›› Issue (22): 324-327.doi: 10.7506/spkx1002-6300-200922077

EMA-LAMP方法快速检测死/活的食源性沙门氏菌

鲁玉侠，郭祀远，石磊* ，李琳

华南理工大学轻工与食品学院

收稿日期:2008-12-16 出版日期:2009-11-15 发布日期:2010-12-29
通讯作者: 石磊 E-mail:leishi88@hotmail.com
基金资助:
教育部科学技术司高等学校科技创新工程重大项目培育资金项目(706046)；国家自然科学基金项目(20877028)

Rapid Detection of Live/Dead Salmonella via EMA-LAMP Method

LU Yu-xia，GUO Si-yuan，SHI Lei*，LI Lin

College of Light Industry and Food Sciences, South China University of Technology, Guangzhou 510640, China

Received:2008-12-16 Online:2009-11-15 Published:2010-12-29
Contact: SHI Lei E-mail:leishi88@hotmail.com

摘要/Abstract

摘要：

建立应用叠氮溴化乙锭(ethidium monoazide，EMA)与环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification，LAMP)相结合检测沙门氏死/ 活菌的方法。该方法具有快速、方便和灵敏度高等优点，以SYBR Green I 为显色剂、恒温65℃、反应1h 便可得出检测结果。该检测系统中，得到241bp 的目标片段和类似于梯子状的系列条带。该方法的检测限为10-10g DNA/ 管，是EMA-PCR 方法的1%。本方法实用性强，具有普遍的应用意义。

关键词: 沙门氏菌, 快速检测, EMA-LAMP

Abstract:

A combinatorial method, designated as ethidium monoazide (EMA)-loop-mediated isothermal amplification (LAMP) method, was established to detect live/dead Salmonella due to the selective penetration of EMA into dead cells in the presence of live cells. DNA covalently bound to EMA can not be amplified by LAMP. In this detect system, a series of primers were specially designed to recognize six distinct sequences on target invA gene in Salmonella. Totally 241 bp target DNA was amplified and visualized as ladder-like bands on agarose gel within 60 min under isothermal condition of 65 ℃. This detection method was rapid, convenient and highly sensitive. The detection limit of this LAMP assay was 10-10 g DNA/tube, which exhibited 100- fold higher sensitivity than EMA-PCR method. This novel EMA-LAMP method for detecting live/dead bacteria will have great potential.

Key words: Salmonella, rapid detection, EMA-LAMP

中图分类号:

TS207.4

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