食品科学 ›› 2009, Vol. 30 ›› Issue (19): 244-247.doi: 10.7506/spkx1002-6630-200919056
吴熙然1 , 2,胡红华1 , 2,张相年2,赵树进2
WU Xi-ran1,2,HU Hong-hua1,2,ZHANG Xiang-nian2,ZHAO Shu-jin2
摘要:
目的:以蒜氨酸酶竞争性抑制剂S-烷基-L-半胱氨酸为配基,制备亲和层析胶分离纯化蒜氨酸酶。方法:以1,4-丁二醇二缩水甘油醚为活化剂,在碱性条件下,活化载体Sepharose CL-4B,偶联半胱氨酸,作为蒜氨酸酶的亲和层析胶。低温粉碎大蒜所得的大蒜液,经25% PEG-5000沉淀,得到粗酶。用制得的亲和胶分离纯化,并利用SDS-PAGE对酶纯度进行检验。结果:Sepharose CL-4B经过1,4-丁二醇二缩水甘油醚活化后,可以偶联上半胱氨酸,形成S-烷基-L-半胱氨酸。大蒜液用25% PEG-5000沉淀可以较简便地分离出粗酶,经制得的亲和胶层析,层析蒜氨酸酶产率为0.1296mg•g-1大蒜 ,活力回收达到68.42%,比活力为9.493U•mg-1,纯化倍数达到22.28倍。提纯的蒜氨酸酶为电泳纯,亚基约为52kD。纯酶的最适温度为35℃,最适pH为6.23,Km=9.845 mmol•L-1,Vmax=24.93 U•mg-1。结论:以S-烷基-L-半胱氨酸为配基制得适合于蒜氨酸酶分离纯化的亲和载体。
中图分类号: