孔雀石绿单克隆抗体的制备及直接竞争ELISA方法的建立

doi:10.7506/spkx1002-6630-200924061

食品科学 ›› 2009, Vol. 30 ›› Issue (24 ): 283-286.doi: 10.7506/spkx1002-6630-200924061

孔雀石绿单克隆抗体的制备及直接竞争ELISA方法的建立

李晓丽¹，陈雪岚²，刘春梅³，熊勇华^{1 ,*}

1.南昌大学食品科学与技术国家重点实验室 2.江西师范大学生命科学学院 3.无锡中德伯尔生物技术有限公司

收稿日期:2009-08-21 出版日期:2009-12-15 发布日期:2010-12-29
通讯作者: 熊勇华1 ,* E-mail:yhxiongchen@163.com

Preparation of Monoclonal Antibody of Malachite Green and Establishment of Direct Competitive ELISA

LI Xiao-li1，CHEN Xue-lan2，LIU Chun-mei3，XIONG Yong-hua1,*

1. State Key Laboratory of Food Science and Technology, Nanchang University, Nanchang 330047, China；2. College of Life
Science, Jiangxi Normal University, Nanchang 330022, China ；3. Wuxi Zodolabs Biotech Co. Ltd., Wuxi 214174, China

Received:2009-08-21 Online:2009-12-15 Published:2010-12-29
Contact: XIONG Yong-hua1,* E-mail:yhxiongchen@163.com

摘要/Abstract

摘要：

通过合成羧基化孔雀石绿，采用活泼酯法制备孔雀石绿免疫抗原CMG-BSA、检测抗原CMG-OVA。采用CMG-BSA 免疫 BALB/c 小鼠，经融合、筛选和克隆化获得了一株稳定的抗孔雀石绿单克隆抗体，并建立了检测孔雀石绿的直接竞争ELISA 方法。ELISA 方法的最佳操作参数：孔雀石绿抗体稀释倍数1:16000(1mg/ml)，酶标抗原(CMG-HRP)使用质量浓度0.2μg/ml。该方法具有良好的灵敏度和特异性，IC50 值0.3ng/ml，最低检测灵敏度达到0.05ng/ml，标准曲线方程为y ＝－ 20.888x ＋ 81.423(R2 ＝ 0.9813)。

关键词: 孔雀石绿, 单克隆抗体, 直接竞争ELISA

Abstract:

Carboxyl-malachite green (CMG) was synthesized and immunogen was prepared by coupling CMG with carrier protein BSA through an ester activation method. BALB/c mice were subjected to injection of CMG-BSA and a hybridoma cell line secreting monoclonal antibody against MG was constructed after fusion, screening and cloning experiments. A direct competitive ELISA for detection MG was established with 0.2 μg/ml CMG-HRP and 1:16000 of antibody dilution ratio. This method exhibited high sensitivity and excellent specificity for detecting MG. The standard regression equation of this method was y ＝－20.888x ＋81.423 (R2＝ 0.9813) with a detection limit for MG at the level of 0.05 ng/ml and IC50 was 0.3 ng/ml.

Key words: malachite green, monoclonal antibody, direct competitive ELISA

中图分类号:

李晓丽1，陈雪岚2，刘春梅3，熊勇华1,*. 孔雀石绿单克隆抗体的制备及直接竞争ELISA方法的建立[J]. 食品科学, 2009, 30(24 ): 283-286.

LI Xiao-li1，CHEN Xue-lan2，LIU Chun-mei3，XIONG Yong-hua1,*. Preparation of Monoclonal Antibody of Malachite Green and Establishment of Direct Competitive ELISA[J]. FOOD SCIENCE, 2009, 30(24 ): 283-286.

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