沙门氏菌DNA提取及PCR反应条件的优化

食品科学 ›› 2007, Vol. 28 ›› Issue (7): 331-334.

沙门氏菌DNA提取及PCR反应条件的优化

邵碧英, 陈彬, 汤敏英, 吴谦, 张体银

福建出入境检验检疫局技术中心；福建出入境检验检疫局技术中心福建福州350001；福建福州350001；

出版日期:2007-07-15 发布日期:2011-10-24

Optimization of DNA Extraction from Salmonella and PCR Reaction Condition

SHAO Bi-Ying, CHEN Bin, TANG Min-Ying, WU Qian, ZHANG Ti-Yin

Fujian Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau, Fuzhou 350001, China

Online:2007-07-15 Published:2011-10-24

摘要/Abstract

摘要： 分别采用煮沸法和CTAB/NaCl法提取沙门氏菌及对照菌株的基因组DNA,紫外测定和电泳结果表明CTAB/NaCl法提取到的DNA的浓度和纯度较煮沸法理想。合成分别扩增沙门氏菌属特异基因hut基因(495bp)、hilA基因(490bp)、invA基因(284bp)和hns基因(152bp)的引物,对PCR反应条件进行了优化。结果表明可同时用于这四种基因检测的PCR反应条件为:94℃预变性5min;94℃变性40s,60℃退火40s,72℃延伸50s,40个循环;72℃延伸5min。

关键词: 沙门氏菌, 基因组DNA, PCR, 优化

Abstract: The genome DNAs of Salmonella and some control bacteria were extracted by boiling and CTAB/NaCl method, respectively. The concentration and purity of the DNAs isolated were estimated by spectrophotometric method and gel electrophoresis, and the results showed that the DNAs isolated by CTAB/NaCl method were better. Four pairs of primes were synthesized to amplify Salmonella genus special genes such as hut gene(495 bp), hilA gene(490 bp), invA gene(284 bp) and hns gene(152 bp) of Salmonella, respectively. The PCR reaction condition was optimized. The optimizing results showed that the PCR reaction condition fitting to amplify simultaneity the four genes of Salmonella was 94 ℃ initial denaturation 5 min; 94 ℃ denaturation 40 s, 60 ℃ annealing 40 s, 72 ℃ extension 50 s, 40 cycles; 72 ℃ final extension 5 min.

Key words: Salmonella, genome DNA, PCR, optimization

邵碧英, 陈彬, 汤敏英, 吴谦, 张体银. 沙门氏菌DNA提取及PCR反应条件的优化[J]. 食品科学, 2007, 28(7): 331-334.

SHAO Bi-Ying, CHEN Bin, TANG Min-Ying, WU Qian, ZHANG Ti-Yin. Optimization of DNA Extraction from Salmonella and PCR Reaction Condition[J]. FOOD SCIENCE, 2007, 28(7): 331-334.

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