嗜热芽孢杆菌蛋白酶HS08的分离纯化研究

食品科学 ›› 2007, Vol. 28 ›› Issue (4): 179-182.

嗜热芽孢杆菌蛋白酶HS08的分离纯化研究

黄光荣, 应铁进, 戴德慧, 活泼, 蒋家新

浙江大学生物系统工程与食品科学学院；浙江科技学院生物与化学工程学院；中国计量学院生命科学学院浙江杭州 310027 浙江科技学院生物与化学工程学院；浙江杭州 310012；浙江杭州 310027；浙江杭州 310018；

出版日期:2007-04-15 发布日期:2011-12-31

Study on Isolation and Purification of HS08 Protease from Thermophilic Bacillus Strain

HUANG Guang-Rong, YING Tie-Jin, DAI De-Hui, HUO Po, JIANG Jia-Xin

1.College of Biosystem Engineering and Food Science,Zhejiang University,Hangzhou 310027,China; 2.School of Biological and Chemical Engineering,Zhejiang University of Science and Technology,Hangzhou 310012,Cina; 3.CoUege of Life Science,China Jiliang University,Hangzhou 310018,China

Online:2007-04-15 Published:2011-12-31

摘要/Abstract

摘要： 从高温土壤中分离得到的一株产耐热中性蛋白酶的嗜热芽孢杆菌,该菌分泌的胞外蛋白酶粗酶液经80%饱和度硫酸铵沉淀、DEAE-Sepharose Fast Flow阴离子交换层析和Superdax75凝胶层析分离纯化后,纯化倍数提高4．36倍,得率为5．3%,经SDS-PAGE电泳测得其分子量为30．6kDa。酶的最适温度与pH实验表明,该酶最适温度为65℃、最适pH为7．5,并且该酶在50℃时表现出1h以上的稳定性。该蛋白酶的活性受到丝氨酸族蛋白酶专一性抑制PMSF和金属离子螯合剂EDTA强烈抑制,Zn2+能提高酶活性,因此该蛋白酶为Zn2+激活的丝氨酸族蛋白酶。

关键词: 中性蛋白酶, 纯化, 特性, 嗜热芽孢杆菌, 丝氨酸族蛋白酶

Abstract: A Thermophilic Bacillus strain for secreting thermostable neutral protease was isolated from high temperature soil sample.The purification steps included 80% saturated ammonium sulfate sedimentation first,then with DEAE-Sepharose fast flow anion exchange chromatogram and Superdax 75 gel filtration on AKTA purification 100 protein liquid chromatogram system,and the final purification-fold 4.36 and recovery rate 5.31% were obtained.The molecular mass 30.6kDa was estimated by SDS-PAGE.The optimal pH and the protease temperature were 7.5 and 65℃,respectively.The protease was stable at 50"C during for 1 h incubation.The protease was inhibited markedly by serine protease inhibitor PMSF（phenylmethylsulfonyl fluoride）and metal ion chelator EDTA（ethylene diamine tetraacetic acid）.Andalso the protease activily is enhanced by Zn2+.So the protease belongs to Zn2+activated serine protease.

Key words: neutral protease, purification, characteristic, Thermophilic Bacillus, serine protease

黄光荣, 应铁进, 戴德慧, 活泼, 蒋家新. 嗜热芽孢杆菌蛋白酶HS08的分离纯化研究[J]. 食品科学, 2007, 28(4): 179-182.

HUANG Guang-Rong, YING Tie-Jin, DAI De-Hui, HUO Po, JIANG Jia-Xin. Study on Isolation and Purification of HS08 Protease from Thermophilic Bacillus Strain[J]. FOOD SCIENCE, 2007, 28(4): 179-182.

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