一种新的等温扩增技术检测阪崎肠杆菌

食品科学 ›› 2013, Vol. 34 ›› Issue (2): 187-190.

一种新的等温扩增技术检测阪崎肠杆菌

张霞

天津出入境检验检疫局

收稿日期:2011-10-25 修回日期:2012-12-07 出版日期:2013-01-25 发布日期:2013-01-15
通讯作者: 张霞 E-mail:zhangxia_75@126.com
基金资助:
国家质检总局《食源性致病菌恒温扩增结合免疫金标检测技术的研究》

A new isothermal amplification detection of Enterobacter sakazakii

Received:2011-10-25 Revised:2012-12-07 Online:2013-01-25 Published:2013-01-15

摘要/Abstract

摘要：

目的建立一种新型阪崎肠杆菌快速筛选检测方法——交叉引物恒温扩增结合免疫金标检测方法。方法针对阪崎肠杆菌16S-23S rDNA间区序列设计特异性引物及探针，建立交叉引物等温扩增法，利用免疫金标试纸条对结果进行检测。用18株阪崎肠杆菌，36株近源菌进行特异性试验；通过定量DNA、纯菌液计数、添加干扰菌检测进行灵敏度验证。结果建立方法具有很好的特异性；增菌液检测灵敏度为101 cfu/mL，DNA检测灵敏度为100fg/test。结论建立的交叉引物恒温扩增结合免疫金标检测方法特异性好、灵敏度高，不需要复杂仪器，对口岸快速筛查、基层或偏远经济不发达地区顺利开展检测具有实际意义。

Abstract:

Objective To establish a new rapid screening method for detection of E.sakazakii—cross-primer amplification combined with immuno-blotting analysis. Method On the basis of sequence analysis of the E. sakazakii 16S-23S rDNA internal transcribed spacer,specific primers and probe were designed, we developed cross-primer isothermal amplification method, using the immuno-gold standard test strip to test results. The specificity of the method was evaluated by 18 strains of E.sakazakii and 36 negative strains of Enterobacteriaceae.The sensitivity of the method was evaluated by testing the quantitative DNA,pure bacteria counted and the sample of adding other bacterial. Result The method established in this article is highly specific and sensitive. The limit of decetion is 100fg/test for the genomic DNA, 101 cfu/mL for pure bacterial culture. Conclusion The method is highly sensitive,specific, easy to operate and does not require any complex equipment. It is very useful for detection of E. sakazakii in the port or underdeveloped areas.

中图分类号:

张霞. 一种新的等温扩增技术检测阪崎肠杆菌[J]. 食品科学, 2013, 34(2): 187-190.

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