不同来源胆盐水解酶基因在大肠杆菌中的表达

doi:10.7506/spkx1002-6630-201307030

食品科学 ›› 2013, Vol. 34 ›› Issue (7): 144-147.doi: 10.7506/spkx1002-6630-201307030

不同来源胆盐水解酶基因在大肠杆菌中的表达

杨士芹1，满朝新2，曲行光1，李彬1，谢鲲昊1，姜毓君1,2,*

1.东北农业大学乳品科学教育部重点实验室，黑龙江哈尔滨 150030； 2.国家乳品工程技术研究中心，黑龙江哈尔滨 150086

收稿日期:2011-12-26 修回日期:2013-02-02 出版日期:2013-04-15 发布日期:2013-03-20
通讯作者: 姜毓君 E-mail:yujun_jiang@163.com
基金资助:
国家自然科学基金;国家863课题;国家科技支撑计划课题：传统优势特产资源生态高值利用技术研究与产品开发;黑龙江省教育厅科学技术研究重点项目

Expression of Bile Salt Hydrolase Genes from Two Different Origins in Escherichia coli Rosetta

YANG Shi-qin1，MAN Chao-xin2，QU Xing-guang1，LI Bin1，XIE Kun-hao1，JIANG Yu-jun1,2,*

1. Key Dairy Science Laboratory, Ministry of Education, Northeast Agricultural University, Harbin 150030, China； 2. National Dairy Engineering and Technical Research Center, Harbin 150086, China

Received:2011-12-26 Revised:2013-02-02 Online:2013-04-15 Published:2013-03-20
Contact: JIANG Yu-jun E-mail:yujun_jiang@163.com

摘要/Abstract

摘要： 根据GenBank上报道的两歧双歧杆菌ATCC 29521的胆盐水解酶基因(BSH)序列和嗜酸乳杆菌NCFM的胆盐水解酶基因(BSHA和BSHB)序列，设计引物通过PCR扩增获得BSH基因，将其连接到表达载体pET28a(+)，构建pETBSH表达质粒，经IPTG诱导表达后，聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测表明在分子质量大小约40、43、45kD处有预期条带出现，初步表明蛋白表达成功。重组菌产生的胆盐水解酶水解甘氨胆酸钠产生的甘氨酸经茚三酮比色法分析，表明该重组的胆盐水解酶具有水解活性。

关键词: 胆盐水解酶, 克隆表达, 活性测定

Abstract: Bile salt hydrolase (BSH) gene of Bifidobacterium bifidum ATCC 29521 and Lactobacillus acidophilus NCFM was amplified by gradient PCR using genome DNA as template and cloned into pET28a (+) expression vector. The expression vector was then transfected into E. coli Rosetta and expression of BSH was induced by IPTG. SDS-PAGE analysis showed the presence of three target proteins estimated to be 40, 43 kD and 45 kD, respectively. Ninhydrin analysis revealed that the recombinant BSH hydrolyzed sodium glycocholate to glycine, showing its hydrolysis activity on conjugated bile salts.

Key words: bile salt hydrolase, cloning and expression, activity analysis

中图分类号:

TS252

杨士芹1，满朝新2，曲行光1，李彬1，谢鲲昊1，姜毓君1,2,*. 不同来源胆盐水解酶基因在大肠杆菌中的表达[J]. 食品科学, 2013, 34(7): 144-147.

YANG Shi-qin1，MAN Chao-xin2，QU Xing-guang1，LI Bin1，XIE Kun-hao1，JIANG Yu-jun1,2,*. Expression of Bile Salt Hydrolase Genes from Two Different Origins in Escherichia coli Rosetta[J]. FOOD SCIENCE, 2013, 34(7): 144-147.

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