反相高效液相色谱法测定5种藏羌五加菜中金丝桃苷的含量

摘要/Abstract

摘要： 目的：建立5种藏羌五加菜中金丝桃苷的反相高效液相色谱法含量测定方法，并比较其金丝桃苷的含量差异。方法：采用液相色谱-质谱定性鉴别红毛五加、糙叶藤五加和蜀五加中金丝桃苷。金丝桃苷提取物通过60%乙醇溶液回流提取105min制得；Kromasil C18柱(4.6mm×250mm，5μm)、柱温30℃，流动相甲醇(A)-0.5%磷酸溶液(B)，梯度洗脱；检测波长355nm，流速1mL/min。结果：金丝桃苷在0.17～2.55mg范围内峰面积与进样量具有良好的线性关系，回归方程Y＝2×106X＋1.94883×106(r＝0.9990，n＝6)。平均回收率100.31%，RSD为0.95%(n＝9)。结论：本法简便、准确、重复性好，可用于五加菜质量的控制方法研究。四川阿坝藏族羌族自治州、四川甘孜藏族自治州的五加属植物中金丝桃苷含量：老叶远低于嫩叶；糙叶藤五加嫩叶(低温烘干品)≈蜀五加嫩叶(低温烘干品)＞红毛五加嫩叶(低温烘干品)＞无梗五加嫩叶(低温烘干品)；糙叶藤五加的不同加工工艺：阴干＞茶叶＞烘干＞热烫≈微波干燥≈晒干＞＞盐渍＞冻藏1个月≈热烫后冻藏1个月。

关键词: 藏羌五加菜, 金丝桃苷, 反相高效液相色谱, 液相色谱-质谱, 含量

Abstract: Objective: To establish a reversed-phase high-performance liquid chromatography (RP-HPLC) method for the determination of hyperoside in Tibetan Acanthopanax leaves from 5 different species. Methods: Hyperoside was identified by liquid chromatography-mass spectrometry (LC-MS). Hyperoside in samples were extracted by refluxing with 60% ethanol for 105 min. The chromatographic separation was achieved on a Kromasil C18 column at 30 ℃ through gradient elution using methanol as mobile phase A and 0.5% phosphoric acid at a flow rate of 1 mL/min. The detection wavelength was set at 355 nm. Results: A calibration curve equation describing the relationship between hyperoside concentration (Y) and peak area (X) was established as follows: Y＝2 × 106X ＋ 1.94883 (r＝0.990, n＝6). The calibration curve was linear over the concentration range of 0.17－2.55. The average spike recovery rate of hyperoside was 100.31% with a RSD of 0.95% (n＝9). Conclusion: A simple, accurate and repeatable method to determine hyperoside in Tibetan Acanthopanax leaves has been developed. Tender leaves of Tibetan Acanthopanax from the same species grown in Tibetan and Qiang Autonomous Prefecture and Ganzi Tibetan Autonomous Prefecture, Sichuan Province were found to be much richer in hyperoside than old ones. Low-temperature dried tender leaves of A. leucorrhizus (Oliv.) Harms var. fulvescens Harms & Rehd and A. setchuenensis Harms ex Diels had approximately equal hyperoside levels followed by tender leaves of A. giraldii Harms; tender leaves of A. sessiliforus Rupr had the lowest hyperoside level. Different drying methods were ranked in descending order from the highest to the lowest hyperoside content in dried A. leucorrhizus (Oliv.) Harms var. fulvescens Harms & Rehd as follows: shade drying ＞ processing into tea ＞ oven drying ＞ blanching ≈ microwave drying ≈ sun drying >> salting ＞ 1-month frozen storage ≈ 1-month frozen storage after blanching.

Key words: Tibetan Acanthopanax, hyperoside, RP-HPLC, LC-MS, content

李艳丹，黄艳菲，丁玲，左旭，刘圆*. 反相高效液相色谱法测定5种藏羌五加菜中金丝桃苷的含量[J]. 食品科学, 2012, 33(16): 106-110.

参考文献

[1] 楼之岑，秦波.常用中药材品种整理和质量研究．北方编．第二册[M]．北京：北京医科大学、北京大学医学出版社，1995：672-675.
[2] 张育松, 刺五加及刺五加茶的保健功效与加工工艺[J]. 亚热带农业研究, 2009, 5(1)：56-59．
[3] 刘玉平, 刺五加茶[P]. 中国专利：A23F3/34;A61K35/78;A61P37/02，2001-10-24．
[4] 张育松.刺五加及刺五加茶的保健功效与加工工艺[J]．亚热带农业研究.2009，5 （1）：56～59
[5] 谢德圣，谢春阳．名贵山珍——刺嫩芽罐头的研制[J]．特产研究，1990,3：26～27，50．
[6] 将忠良，朱胄远，伍越环，等．金丝桃甙的合成研究．药学学报，1994，29（11）：874．
[7] 李庆林，桂新，陈志武，等．金丝桃苷对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用．中国药学杂志，2002，37（11）：829-832．
[8] 彭国平，魏尔清，葛求富，等．金丝桃苷对离体缺氧/缺糖再灌注脑损伤的保护作用．中国药学杂志，2005，4（6）：434-437．
[9] YANG Y. Studies on the effect of Hypercium Chinese on anti1ipidperoxidaton[J].Acta Univ Med, 2001, 6(3): 211.
[10] MAREK O B, LYDIA I, HOLKOV A, et al. Anti1ipoxygenase activity of compounds from Hypericum perforatum[J]. Section Celluar Molecular Biology, 2006, 61(3): 331-332.
[11] WU L L, YANG X B, HUANG Z M, et al. In vivo and in vitro antiviral activity of hypezoside extrated from Abelmoschus manihot(L) medik[J].Acta Pharmacol Sin, 2007, 28(1): 404-409.
[12] 袁立春，刘斌，石任兵．HPLC法测定不同市售荷叶材料中金丝桃苷和异槲皮苷的含量[J]．药物分析杂志，2010，30（1）：41.
[13] 冯颖，孟宪军，王建国．无梗五加果金丝桃昔的分离制备和鉴定[J]．食品科学，2007,28（5）：285-300．
[14]刘圆，李厚聪，孟庆艳．HPLC法测定川产红毛五加不同药用部位和不同产地茎皮中紫丁香苷[J].中草药，2008，39（4）：612-613．
[15]孟庆艳，李莹，刘圆，等.共有峰率和变异峰率双指标序列法分析藏药材红毛五加与濒危药材刺五加的亲缘相似性[J]. 西南民族大学学报，2008，34（2）：290-293．
[16]孟庆艳，刘圆，彭镰心，等.正交试验法筛选藏药红毛五加多糖的提取分离工艺[J]. 西南民族大学学报，2007，29（1）：122-125．
[17]刘永恒，李莹，刘圆，等.藏羌药材红毛五加水分、灰分和浸出物的含量测定[J].时珍国医国药，2011，22（2）：337-339．
[18]孙卓然，刘圆，孟庆艳, 等.RP-HPLC测定四川产红毛五加药材茎皮及叶中不同采收期绿原酸的含量[J].中国实验方剂学杂志，2009，15（2）：15-17．
[19]刘圆，孟庆艳，彭镰心，等.共有峰率和变异峰率双指标序列法分析藏药材红毛五加特定（指纹）图谱[J].药物分析杂志，2007，27（8）：1182-1185．
[20]刘圆，孟庆艳，任朝琴．(高效液相色谱法测定川产藏药材红毛五加不同药用部位中腺苷的含量[J].中国药学杂志，2008，43（7）：538-540．
[21]任朝琴，刘圆，孟庆艳．紫外-可见分光光度法测定四川产红毛五加药材中不同采收期总皂苷的含量[J]．西南民族大学学报，2008，34（4）：708-710．
[22]刘圆，孟庆艳，任朝琴．RP-HPLC法测定川产藏药不同产地红毛五加茎皮中腺苷的含量[J].药物分析杂志，2007，27（10）：1586-1588．
[23]任朝琴，刘圆，孟庆艳，等.川产藏药红毛五加不同药用部位中多糖的含量比较[J].华西药学杂志，2008, 23(5)：602~603．
[24]李厚聪，李莹，孟庆艳，等.川产藏药材红毛五加不同采收期中多糖的含量测定[J].西南民族大学学报，2008，34（3）：511-513．
[25]李莹，刘圆，袁玮，等.RP－HPLC测定红毛五加中的异嗪皮啶[J].华西药学杂志，2010，25(3)∶339～341．
[26]李莹，袁玮，刘超，等.反相高效液相色谱法测定藏药材红毛五加中金丝桃苷的含量[J].时珍国医国药，2009，20（7）：1617-1619．
[27]吴莉莉，孟庆艳，刘圆，等.红毛五加茎皮中总皂苷超声提取工艺研究[J].西南民族大学学报，2007，33（3）：535-537．
[28]曾友志，刘圆，孙卓然，等.2RP-HPLC测定3种五加皮中的绿原酸[J].华西药学杂志，2008, 23(2): 193~194．
[29]刘圆，孟庆艳，彭镰心，等.川产藏药材不同产地红毛五加多糖的比较[J].中草药，2007，38（2）：283-284．
[30]刘圆，孟庆艳，孙卓然，等.RP-HPLC测定不同产地藏药材红毛五加中绿原酸的含量[J].中国中药杂志，2007， 32（15）：1585-1586．
[31]孟庆艳，刘圆，李厚聪，等.川产藏药材红毛五加中总皂苷提取工艺研究[J].中成药，2008，30（4）：610-612．
[32]夏清，刘圆，孟庆艳，等. 藏药材红毛五加不同药用部位和不同产地茎皮中总皂苷的含量测定[J]. 西南民族大学学报，2009，35（1）：98-101．
[33]吴春蕾，焦涛，刘圆，等.藏药材红毛五加总皂苷纯化工艺研究[J].西南民族大学学报，2009，35（4）：785-788．