韭菜酸性磷酸酶的分离纯化及酶学性质

doi:10.7506/spkx1002-6630-201317040

食品科学

韭菜酸性磷酸酶的分离纯化及酶学性质

孙芳，任美凤，胡瑞斌，唐云明*

西南大学生命科学学院，重庆市甘薯工程研究中心，三峡库区生态环境教育部重点实验室，重庆 400715

出版日期:2013-09-15 发布日期:2013-09-27
通讯作者: 唐云明
基金资助:
重庆市科委重点攻关项目(CSTC，2011AB1027)

Isolation, Purification and Characterization of Acid Phosphatase from Chinese Chives

SUN Fang，REN Mei-feng，HU Rui-bin，TANG Yun-ming*

Key Laboratory of Eco-environments in Three Gorges Reservoir Region, Ministry of Education, Chongqing Sweetpotato Engineering
Research Center, School of Life Science, Southwest University, Chongqing 400715, China

Online:2013-09-15 Published:2013-09-27
Contact: TANG Yun-ming

摘要/Abstract

摘要：

取新鲜韭菜，通过匀浆、缓冲液抽提、硫酸铵分级沉淀、CM-Sepharose离子交换层析、Superdex-200凝胶过滤层析等方法纯化，获得韭菜中所含的一种电泳纯的酸性磷酸酶(ACP)。经纯化后的酶溶液比活力为645.83U/mg，纯化倍数达到454.81倍，回收率为10.50%。酶学性质研究表明：该酶的分子质量约为58.97kD；最适反应温度和pH值分别为65℃和5.4；该酶对对硝基苯磷酸二钠(pNPP)的Km值为0.896×10-3mol/L；较高浓度的Mg2+、Mn2+对该酶的激活作用更强；抗坏血酸、甲醇、乙醇、氯仿、异丙醇、Cu2+、Ag+的浓度越大，对该酶的抑制作用越强。

关键词: 韭菜, 酸性磷酸酶, 分离纯化, 性质

Abstract:

Fresh chives were homogenized, extracted with buffer and precipitated by ammonium sulfate. The precipitant
was dissolved in HAc-NaAc and then purified by CM-Sepharose ion-exchange chromatography and superdex-200 gel
filtration chromatography. A new type of electrophoretically pure acid phosphatase (ACP) from fresh Chinese chives was
then obtained. The enzyme activity of the purified ACP reached 645.83 U/mg. The purification factor was 454.81 and the
activity recovery was 10.50%. Characterization studies showed that the molecular mass of this enzyme was approximately
58.97 kD and the optimum reaction temperature and pH value were 65 ℃ and 5.4, respectively. The Km value for this
enzyme was 0.896 × 10-3 mol/L when using nitrophenyl phosphate disodium (pNPP) as the substrate. High concentrations
of Mg2+ and Mn2+ showed stronger activation of the enzyme while the higher concentration of ascorbic acid, methanol,
ethanol, chloroform, isopropanol, Cu2+ and Ag+, the stronger the inhibition of the enzyme.

Key words: Chinese chives, acid phosphatase, isolation and purification, characterization

中图分类号:

Q946.5

孙芳，任美凤，胡瑞斌，唐云明*. 韭菜酸性磷酸酶的分离纯化及酶学性质[J]. 食品科学, doi: 10.7506/spkx1002-6630-201317040.

SUN Fang，REN Mei-feng，HU Rui-bin，TANG Yun-ming*. Isolation, Purification and Characterization of Acid Phosphatase from Chinese Chives[J]. FOOD SCIENCE, doi: 10.7506/spkx1002-6630-201317040.

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