实时荧光PCR检测香梨黑斑病菌

doi:10.7506/spkx1002-6630-201320035

食品科学

实时荧光PCR检测香梨黑斑病菌

王凤军，张祥林，马海波，冯新忠，冯俊丽，华鹏

1.库尔勒出入境检验检疫局，新疆库尔勒 841000；2.新疆出入境检验检疫局，新疆乌鲁木齐 830000；
3.新疆农业大学农学院，新疆乌鲁木齐 830000；4.浙江理工大学生物工程研究所，浙江杭州 310018

出版日期:2013-10-25 发布日期:2013-09-28

Real-Time Fluorescence PCR Identification of Alternaria alternata Causing Black Spot Disease of Fragrant Pear

WANG Feng-jun，ZHANG Xiang-lin，MA Hai-bo，FENG Xin-zhong，FENG Jun-li，HUA Peng

1. Korla Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau, Korla 841000, China；
2. Xinjiang Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau, Ürümqi 830000, China；
3. College of Agriculture, Xinjiang Agricultural University, Ürümqi 830000, China；
4. Institute of Bioengineering, Zhejiang Sci-Tech University, Hangzhou 310018, China

Online:2013-10-25 Published:2013-09-28

摘要/Abstract

摘要：

根据梨黑斑病原菌链格孢子基因组保守序列，设计合成特异性引物和双荧光标记探针，通过对12个梨花样本、30个梨果样本和94个玻片样本检测分析，建立对香梨黑斑病菌的TaqMan实时荧光聚合酶链式反应(PCR)检测方法。此外，对其他4种香梨植物病害病原菌进行了荧光PCR检测比对。结果表明：只有香梨黑斑病菌产生荧光信号，与其他4种病害病原菌无交叉反应。与常规PCR相比，TaqMan实时荧光 PCR检测特异性强、灵敏度高，能检测到质量浓度为1.9pg/μL的DNA样本，且不必通过病原菌的分离与纯化培养，可直接用于病变样品的检测以及植物病害的筛查与动态监测，适合植物病害的快速诊断和预防控制。

关键词: 香梨, 链格孢菌, 实时荧光PCR, TaqMan探针, 快速检测

Abstract:

A real-time fluorescence PCR method was established by using a pair of specific primers and double-fluorescence
labeling probe according to the conserved sequence of the pathogen Alternaria alternata causing fragrant pear black
spots. Totally 12 flowers, 30 fruits and 94 slides from fragrant pears were detected in this study. The real-time fluorescence
PCR was used to detect four other plant disease pathogens on pears. Results showed that only in the pathogen causing black
spots, fluorescence signal could be collected with the specific primers and probe. The assay for specific detection was more
sensitive than conventional PCR, and could detect the concentration of DNA template as low as 1.9 pg/μL without pathogen
separation and purification. This method is a reliable, sensitive, quick and easy-handling method suitable for rapid diagnosis
and dynamic monitoring of the plant pathogen.

Key words: fragrant pear, Alternaria alternata, real-time fluorescence polymerase chain reaction, TaqMan probe, rapid detection

王凤军，张祥林，马海波，冯新忠，冯俊丽，华鹏. 实时荧光PCR检测香梨黑斑病菌[J]. 食品科学, doi: 10.7506/spkx1002-6630-201320035.

WANG Feng-jun，ZHANG Xiang-lin，MA Hai-bo，FENG Xin-zhong，FENG Jun-li，HUA Peng. Real-Time Fluorescence PCR Identification of Alternaria alternata Causing Black Spot Disease of Fragrant Pear[J]. FOOD SCIENCE, doi: 10.7506/spkx1002-6630-201320035.

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实时荧光PCR检测香梨黑斑病菌

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