脱氧雪腐镰刀菌烯醇模拟表位的2 种融合蛋白的表达及其在无毒酶联免疫吸附方法中的应用

doi:10.7506/spkx1002-6630-201408039

食品科学

脱氧雪腐镰刀菌烯醇模拟表位的2 种融合蛋白的表达及其在无毒酶联免疫吸附方法中的应用

徐富勇1,2，孟玮1，刘仁荣1,*，徐玲1，裘雪梅1，朱立鑫1

1.江西科技师范大学生命科学学院，江西南昌 330013；2.南昌大学生命科学与食品工程学院，江西南昌 330029

出版日期:2014-04-25 发布日期:2014-05-13
通讯作者: 刘仁荣
基金资助:
江西省自然科学基金项目（20122BAB214006）；江西省教育厅科技项目（GJJ13573）

Application in Non-Toxic ELISA of Expression of Deoxynivalenol Mimotope Fusion Protein

XU Fu-yong1,2 , MENG Wei1, LIU Ren-rong1,*, XU Ling1, QIU Xue-mei1, ZHU Li-xin1

1. School of Life Science, Jiangxi Science and Technology Normal University, Nanchang 330013, China;
2. School of Life Sciences and Food Engineering, Nanchang University, Nanchang 330029, China

Online:2014-04-25 Published:2014-05-13
Contact: LIU Ren-rong

摘要/Abstract

摘要：

脱氧雪腐镰刀菌烯醇（deoxynivalenol，DON）的模拟表位（CDON），是从噬菌体展示随机肽库中淘选出来的七肽，可模拟DON与抗DON抗体结合。为了在酶联免疫吸附方法（enzyme linked immunosorbent assay， ELISA）中用重组蛋白替代DON偶联物，以期开发出能代替偶联DON人工抗原的无毒检测DON的ELISA方法，通过构建重组表达载体pGEX-CDON和pC89S4-CDON，并在大肠杆菌表达系统中分别表达和纯化GST-CDON和pⅧ- CDON融合蛋白，比较测定2 种融合蛋白与抗DON抗体的结合效果。ELISA方阵滴定结果显示：纯化的融合蛋白具有良好的反应原性。在间接竞争性ELISA中，当以融合蛋白GST-CDON为包被抗原时，检测限为31 ng/mL，线性范围为31～500 ng/mL，IC50为194 ng/mL，加标回收率为54.1%～65.4%，变异系数为6.28%～13.37%；当以融合蛋白pⅧ-CDON为包被抗原时，检测限为15 ng/mL，线性范围为15～500 ng/mL，IC50为94 ng/mL，加标回收率为 81.7%～89.0%，变异系数为3.15%～7.55%。

关键词: 脱氧雪腐镰刀菌烯醇, 模拟表位, 质粒, 噬菌粒

Abstract:

Deoxynivalenol (DON) mimotope, designated as CDON, is a mimicking epitope (CMRPWLQ) screened from a phagedisplayed
random peptide library. In order to replace DON conjugated toxin with non-toxic recombinant protein in ELISA, two
novel expression vectors, which were designated as plasmid pGEX-CDON and phagemid pC89S4-CDON, were used to produce
GST-CDON and pⅧ-CDON fusion proteins in E. coli. After purification, both GST-CDON and pⅧ-CDON fusion proteins showed
good reactogenicity with an anti-DON antibody in a competitive inhibition ELISA test. When GST-CDON was used as coating
antigen, the linear range of the competitive inhibition ELISA was 31–500 ng/mL with an IC50 value of 194 ng/mL, and spiked
recoveries were 54.1%–65.4%, with coefficient of variation of 6.28%–13.37%. The detection limit was 31 ng/mL. Upon using pⅧ-
CDON as coating protein, the linear range of the competitive inhibition ELISA was 15–500 ng/mL with an IC50 value of 94 ng/mL,
and spiked recoveries were 81.7%–89.0%, with coefficient of variation of 3.15%–7.55%. The detection limit was 15 ng/mL.
ELISA analysis and comparison showed that the reactogenicity and specificity of pⅧ-CDON binding to anti-DON antibody
were better than that of GST-CDON fusion protein. Therefore, pⅧ-CDON is promising for establishing an ELISA without the
application of the toxic mycotoxin conjugate.

Key words: deoxynivalenol, mimotope, plasmid, phagemid

中图分类号:

Q819

徐富勇1,2，孟玮1，刘仁荣1,*，徐玲1，裘雪梅1，朱立鑫1. 脱氧雪腐镰刀菌烯醇模拟表位的2 种融合蛋白的表达及其在无毒酶联免疫吸附方法中的应用[J]. 食品科学, doi: 10.7506/spkx1002-6630-201408039.

XU Fu-yong1,2,MENG Wei1, LIU Ren-rong1,*, XU Ling1, QIU Xue-mei1, ZHU Li-xin1. Application in Non-Toxic ELISA of Expression of Deoxynivalenol Mimotope Fusion Protein[J]. FOOD SCIENCE, doi: 10.7506/spkx1002-6630-201408039.

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脱氧雪腐镰刀菌烯醇模拟表位的2 种融合蛋白的表达及其在无毒酶联免疫吸附方法中的应用

Application in Non-Toxic ELISA of Expression of Deoxynivalenol Mimotope Fusion Protein

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