草莓中甲型肝炎病毒检测

doi:10.7506/spkx1002-6630-201424041

食品科学

草莓中甲型肝炎病毒检测

高世光1，王海燕2，郭慧1，冯华炜1，于洋1，麻丽丹1,*

1.丹东出入境检验检疫局，辽宁丹东 118000；2.大窑湾出入境检验检疫局，辽宁大连 116600

出版日期:2014-12-25 发布日期:2014-12-29
通讯作者: 麻丽丹
基金资助:
国家质检总局科研项目（2014IK094）；辽宁出入境检验检疫局科研项目（LK2013-18）

An Optimized Method for the Detection of Hapatitis A Virus (HAV) in Strawberry

GAO Shi-guang1, WANG Hai-yan2, GUO Hui1, FENG Hua-wei1, YU Yang1, MA Li-dan1,*

1. Dandong Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau, Dandong 118000, China;
2. Dayaowan Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau, Dalian 116600, China

Online:2014-12-25 Published:2014-12-29
Contact: MA Li-dan

摘要/Abstract

摘要：

目的：建立草莓中甲型肝炎病毒（hapatitis A virus，HAV）的有效富集方法及病毒RNA提取方法，用于草莓中HAV检测。方法：利用甲肝减毒疫苗对已知阴性的草莓样品进行人工污染，通过有效富集条件的优化及RNA提取后，采用实时荧光逆转录-聚合酶链式反应进行检测。结果：病毒富集选择Tris-甘氨酸-1 g/100 mL牛肉浸提物缓冲液洗脱、果胶酶30 U、氯仿-正丁醇为抑制剂去除剂、聚乙二醇沉淀、5 ℃孵育1 h等优化条件，检测灵敏度较高；最优RNA提取方法为美国ABI公司生产的RNA提取试剂盒。采用优化后的方法对草莓样品中HAV病毒的检测显示，该病毒粒子的检测灵敏度可以达31.36 CCID50/20 g样品。同时对50 份送检样品进行检测，结果均为阴性。结论：所建立的病毒富集方法和核酸提取方法更适合草莓样品中HAV的检测，灵敏度较高。

关键词: 草莓, 甲型肝炎病毒, 病毒富集, RNA提取

Abstract:

Objective: To establish the optimal enrichment and RNA extraction procedures for detecting hepatitis A virus
(HAV) in strawberries. Methods: After artificial contamination of known negative samples, HAV enrichment under
optimized conditions and RNA extraction were performed for analysis by real-time fluorescence PCR. Results: The virus
was enriched by elution with Tris glycine 1 g/100 mL beef extract buffer (TGBE), removal of the inhibitors using 30 U of
pectinase and a mixture of chloroform with n-butanol, precipitation with PEG, and 1 h incubation at 5 ℃. The detection
method was sensitive. The best RNA extraction results were achieved with a RNA extraction kit from ABI. The
sensitivity of the optimized method for detecting HAV particles was 31.36 CCID50/20 g of sample. Negative results
were reported for all 50 samples tested. Conclusion: The established method is suitable for the detection of HAV in
strawberry samples with high sensitivity.

Key words: strawberry, hepatitis A virus, virus enrichment, RNA extraction

中图分类号:

高世光1，王海燕2，郭慧1，冯华炜1，于洋1，麻丽丹1,*. 草莓中甲型肝炎病毒检测[J]. 食品科学, doi: 10.7506/spkx1002-6630-201424041.

GAO Shi-guang1, WANG Hai-yan2, GUO Hui1, FENG Hua-wei1, YU Yang1, MA Li-dan1,*. An Optimized Method for the Detection of Hapatitis A Virus (HAV) in Strawberry[J]. FOOD SCIENCE, doi: 10.7506/spkx1002-6630-201424041.

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