蕹菜过氧化物酶的分离纯化及理化性质

doi:10.7506/spkx1002-6630-201503032

食品科学

蕹菜过氧化物酶的分离纯化及理化性质

王红扬，王洁，李星，唐云明

西南大学生命科学学院，重庆市甘薯工程研究中心，三峡库区生态环境教育部重点实验室，重庆 400715

出版日期:2015-02-15 发布日期:2015-02-10

Isolation, Purification and Characterization of Peroxidase from Ipomoea aquatica Forsk.

WANG Hongyang, WANG Jie, LI Xing, TANG Yunming

Key Laboratory of Eco-environments in Three Gorges Reservoir Region, Ministry of Education, Chongqing Sweet-potato Engineering Research Center, School of Life Science, Southwest University, Chongqing 400715, China

Online:2015-02-15 Published:2015-02-10

摘要/Abstract

摘要：

新鲜蕹菜经硫酸铵分级沉淀、DEAE-Sepharose离子交换层析和Superdex-200凝胶过滤层析后获得电泳纯的过氧化物酶（peroxidase，POD），该酶的比活力、回收率、纯化倍数和产率分别为35 972.96 U/mg、12.21%、168.48和211.07 U/g。该酶的亚基分子质量为42.7 kD，最适温度为40 ℃，最适pH值为6，并且在20～50 ℃及pH 5～8的范围内具有良好的稳定性。以不同浓度的H2O2为底物，测得该酶的Km值为18.32 mmol/L。NaCl、尿素（Urea）、Zn2+、Mg2+对该酶都具有较强的激活作用，十二烷基硫酸钠（sodium dodecyl sulfate，SDS）、硫氰化钾（potassium thiocyanate，KSCN）、抗坏血酸（ascorbic acid，AsA）、Ba2+、Mn2+ 、Fe2+、甲醇、乙醇、正丁醇和异丙醇对蕹菜POD活力均有抑制作用，其中抗坏血酸对POD有极强的抑制作用，当浓度为0.01 mol/L时，酶活力接近于0。

关键词: 蕹菜, 过氧化物酶, 分离纯化, 酶活力

Abstract:

Electrophoresis-purity peroxidase (POD) was extracted and purified from Ipomoea aquatica Forsk. through
ammonium sulfate precipitation, DEAE-Sepharose and Superdex-200 chromatography. The specific activity of the purified
peroxidase was 35 972.96 U/mg and the yield was 211.07 U/g with a recovery rate of 12.21% and a purification fold of
168.48. Its molecular mass was around 42.7 kD as determined by sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis
(SDS-PAGE). Besides, the POD with the optimal temperature and pH of 40 ℃ and 6, respectively, was relatively stable
in the temperature range of 20–50 ℃ and pH range of 5–8. This enzyme showed a Km value of 18.32 mmol/L towards the
substrate hydrogen peroxide. In addition, the POD was found to be activated by NaCl, urea, Zn2+and Mg2+ but inhibited by
SDS, KSCN, ascorbic acid (AsA), Ba2+, Mn2+, Fe2+, methanol, ethanol, n-butyl alcohol and isopropanol, and completely
inactivated by 0.01 mmol/L AsA.

Key words: Ipomoea aquatica Forsk., peroxidase, isolation and purification, enzyme activity

中图分类号:

Q946.5

王红扬，王洁，李星，唐云明. 蕹菜过氧化物酶的分离纯化及理化性质[J]. 食品科学, doi: 10.7506/spkx1002-6630-201503032.

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