利用低温聚合酶链式反应技术提高大豆超氧化物歧化酶活性

doi:10.7506/spkx1002-6630-201505024

食品科学

利用低温聚合酶链式反应技术提高大豆超氧化物歧化酶活性

张丽媛1，马红丹1，赵邯郸1，徐丹丹1，曲静2，关淑艳1,*，王丕武2,*

1.吉林农业大学生命科学学院，吉林长春 130118；2.吉林农业大学农学院，吉林长春 130118

出版日期:2015-03-15 发布日期:2015-03-17

Improved Superoxide Dismutase Activity in Soybean by Low Temperature Polymerase Chain Reaction (PCR)

ZHANG Liyuan1, MA Hongdan1, ZHAO Handan1, XU Dandan1, QU Jing2, GUAN Shuyan1,*, WANG Piwu2,*

1. College of Life Sciences, Jilin Agricultural University, Changchun 130118, China;
2. Faculty of Agronomy, Jilin Agricultural University, Changchun 130118, China

Online:2015-03-15 Published:2015-03-17

摘要/Abstract

摘要：

目的：利用低温聚合酶链式反应对大豆超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）的活性进行改良。方法：将6 种在较低退火温度下扩增出的超氧化物歧化酶基因插入到表达载体pREP5N上，构建pPM1、pPM2、pPM3、pPM4、pPM5、pPM6表达载体，转入大肠杆菌后得到工程菌，诱导其在大肠杆菌中进行蛋白表达，并进行酶活力测定，筛选高酶活力菌株。结果：将已克隆的目的基因序列与已知的大豆MnSOD基因序列比对分析，一致性平均为86.57%，氨基酸序列同源性平均为82.58%。对已获得的6 种工程菌进行蛋白质提取，十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳结果显示表达产物的分子质量约为26 kD。经1%差异水平分析，改良后的SOD酶活力均有极显著提高，平均比对照菌株的酶活力提高1.95 倍。结论：本实验证明低温聚合酶链式反应是改变酶活性的一种有效方法，为超氧化物歧化酶在生产中的应用提供了技术支持。

关键词: 超氧化物歧化酶基因, 低温聚合酶链式反应, 酶活力

Abstract:

Objective: This study aims at modifying the activity of superoxide dismutase in soybean by low temperature
PCR. Methods: Six amplified superoxide dismutase genes at low annealing temperatures were inserted into the expression
vector pREP5N to construct the new vectors pPM1, pPM2, pPM3, pPM4, pPM5 and pPM6. These expression vectors
were introduced into E. coli for enzyme expression. The enzyme activity was determined for screening strains with high
enzyme activity. Results: The alignment analysis of cloned sequences versus published MnSOD sequences showed that
the consistency was 86.57% on average. The homology of amino acid sequences was 82.58%. The molecular weights
of the proteins extracted from six strains were approximately 26 kD as determined by SDS-PAGE. Enzyme activity was
significantly improved (P < 0.01) by 1.95 folds on average. Conclusion: The findings of this study provide technical support
for the application of superoxide dismutase.

Key words: superoxide dismutase gene, low temperature polymerase chain reaction, enzyme activity

中图分类号:

Q786

张丽媛1，马红丹1，赵邯郸1，徐丹丹1，曲静2，关淑艳1,*，王丕武2,*. 利用低温聚合酶链式反应技术提高大豆超氧化物歧化酶活性[J]. 食品科学, doi: 10.7506/spkx1002-6630-201505024.

ZHANG Liyuan1, MA Hongdan1, ZHAO Handan1, XU Dandan1, QU Jing2, GUAN Shuyan1,*, WANG Piwu2,*. Improved Superoxide Dismutase Activity in Soybean by Low Temperature Polymerase Chain Reaction (PCR)[J]. FOOD SCIENCE, doi: 10.7506/spkx1002-6630-201505024.

[1]	苏琳，李慧姣，侯艳茹，赵雅娟，白艳苹，孙冰，赵丽华，靳烨. 一水肌酸及共轭亚油酸对大鼠肌纤维相关基因和酶活性的影响及机理[J]. 食品科学, 2021, 42(7): 149-155.
[2]	侯艳茹，苏琳，侯普馨，白艳苹，孙冰，赵丽华，黄凯飚，吕科，靳烨. 饲养方式对苏尼特羊肌纤维组成和肉品质的影响及其调控机理[J]. 食品科学, 2021, 42(7): 83-89.
[3]	于殿宇，陈书曼，王彤，李丹，张雪，吴楠，唐洪琳，秦兰霞，姚凯. 复合膜固定化酶提高米糠稳定性[J]. 食品科学, 2020, 41(6): 139-145.
[4]	章蔚，石柳，熊光权，吴文锦，李新，乔宇，丁安子，廖李，汪兰. 不同预冷时间下鮰鱼能量代谢和加工品质的相关性分析[J]. 食品科学, 2020, 41(3): 55-61.
[5]	魏贞，韩彩静，高云娜，樊占青，王亚南，王哲人，闵伟红. 北京棒杆菌新型天冬氨酸激酶双突变株Y198N/D201M的构建及酶学性质表征[J]. 食品科学, 2020, 41(18): 127-133.
[6]	侯普馨，侯艳茹，白艳苹，苏琳，赵丽华，宝勒格，靳烨. 日粮添加亚麻籽对苏尼特羊肌纤维特性及肉品质的影响[J]. 食品科学, 2020, 41(11): 36-42.
[7]	肖盼盼，章骞，翁凌，张凌晶，杨爽，刘光明，曹敏杰. 凡纳滨对虾蛋白酶对酱油渣蛋白质的降解作用[J]. 食品科学, 2020, 41(10): 131-137.
[8]	苗字叶，姚亚亚，刘阳星月，田博宇，李晓洋，李慧静. 超高静压改性麦麸对其功能性质的影响[J]. 食品科学, 2019, 40(19): 164-171.
[9]	王蕾，俞凌峰，李君豪，严嘉玮，罗自生，李莉. 基于蓄冷剂模拟贮运的秀珍菇细胞膜损伤和酶活力变化[J]. 食品科学, 2019, 40(1): 270-277.
[10]	王帮国，余振宇，林琳，潘丽军，姜绍通. 超声波、超高压对白鲢鱼肌肉脂肪氧合酶构象及酶活力的影响[J]. 食品科学, 2018, 39(3): 169-175.
[11]	张坤，邹烨，王道营，张新笑，陈琳，诸永志，徐为民. 高强度超声处理对鹅胸肉肌动球蛋白特性的影响[J]. 食品科学, 2018, 39(21): 59-65.
[12]	李圆圆，罗安伟，李琳，苏苗，蔺志颖，宋俊奇，白俊青，方沂蒙. 采前氯吡脲处理对‘秦美’猕猴桃贮藏期间果实硬度及细胞壁降解的影响[J]. 食品科学, 2018, 39(21): 273-278.
[13]	赵天惠，张佰清. 耐受性枯草芽孢杆菌的脉冲强光诱变筛选及产酶活力分析[J]. 食品科学, 2018, 39(2): 192-197.
[14]	韩艳文，池明，樊晓岚，赵航，闫师杰. 不同降温方式下晚采鸭梨PAL基因相对表达与果心褐变的关系[J]. 食品科学, 2018, 39(15): 174-180.
[15]	王玲，曾艺涛，黄先智，丁晓雯. 1-脱氧野尻霉素对肥胖小鼠脂代谢的影响及机理[J]. 食品科学, 2018, 39(1): 207-212.

利用低温聚合酶链式反应技术提高大豆超氧化物歧化酶活性

Improved Superoxide Dismutase Activity in Soybean by Low Temperature Polymerase Chain Reaction (PCR)

RichHTML

PDF (PC)

可视化

摘要/Abstract

引用本文

使用本文

参考文献

相关文章 15

编辑推荐

Metrics

本文评价