徐蕾蕊1,魏海燕1,林长军2,马 丹1,汪 琦1,张西萌1,李 丹1,付溥博1,刘 莉1,魏永新1,赵晓娟1,曾 静1,*
XU Leirui1, WEI Haiyan1, LIN Changjun2, MA Dan1, WANG Qi1, ZHANG Ximeng1, LI Dan1, FU Pubo1, LIU Li1, WEI Yongxin1, ZHAO Xiaojuan1, ZENG Jing1,*
摘要:
目的:研制用于食品中星状病毒核酸检测的cRNA标准物质。方法:利用基因克隆体外转录方法制备星状病毒cRNA纯品,初步定量后稀释至适宜浓度进行分装,其中一部分分装样品添加RNAsafe处理,剩余部分不做处理,制备2 种标准物质样品。采用实时荧光定量实时聚合酶链式反应(real-time-polymerase chain reaction,RTPCR)方法检验2 种标准物质样品均匀性和稳定性。样品中RNA浓度(拷贝/μL)通过荧光定量RT-PCR和数字PCR联合定值获得,并进行不确定度分析。结果:均匀性结果显示2 种样品组间精密度与组内精密度差异均无统计学意义(P>0.05)。稳定性检验表明20~25 ℃ 10 d、4 ℃ 14 d、-20 ℃ 3 个月及-80 ℃和液氮6 个月2 种样品cRNA含量无显著变化。RNAsafe(-)标准物质定值为:(1.652±0.143)×108 拷贝/μL(-80 ℃)和(1.652±0.135)×108 拷贝/μL(液氮)。结论:RNAsafe(-)标准物质样品可作为用于星状病毒核酸检测的标准物质。
中图分类号: