基于叠氮溴化丙锭与恒温核酸扩增技术快速检测亚致死状态食源金黄色葡萄球菌

doi:10.7506/spkx1002-6630-201624023

食品科学 ›› 2016, Vol. 37 ›› Issue (24): 149-155.doi: 10.7506/spkx1002-6630-201624023

基于叠氮溴化丙锭与恒温核酸扩增技术快速检测亚致死状态食源金黄色葡萄球菌

曹潇，赵力超，杨翠琪，谷立慧，欧阳广宇，陈金，陈思锴，谭绮雯，王丽

1.华南农业大学食品学院，广东广州 510642；2.广东省天然产物绿色加工与产品安全重点实验室，广东广州 510640

出版日期:2016-12-25 发布日期:2016-12-21
基金资助:
国家自然科学基金青年科学基金项目（31301445）；广东省科技计划项目（2016A040403103）； 2015年国家星火计划项目（2015GA780080）；广东省级“质量工程项目”

Establishment of PMA-LAMP Method for Rapid Detection of Staphylococcus aureus with Sublethal Injury

CAO Xiao, ZHAO Lichao, YANG Cuiqi, GU Lihui, OUYANG Guangyu, CHEN Jin, CHEN Sikai, TAN Qiwen, WANG Li

1. College of Food Science, South China Agricultural University, Guangzhou 510642, China; 2. Guangdong Province Key Laboratory for Green Processing of Natural Products and Product Safety, Guangzhou 510640, China

Online:2016-12-25 Published:2016-12-21

摘要/Abstract

摘要： 建立一种将荧光染料叠氮溴化丙锭（propidium monoazide，PMA）与环介导等温扩增（loop-mediatedisothermal amplification，LAMP）技术相结合的方法，用于快速高效检测金黄色葡萄球菌（Staphylococcusaureus）。同时，采用人工污染金黄色葡萄球菌的速冻水饺和奶粉作为食品样品，研究PMA-LAMP方法的检测灵敏度。结果表明，PMA溶液质量浓度3 μg/mL，650 W卤素灯下曝光5 min，PMA能够完全抑制1.2×107 copies/mL金黄色葡萄球菌死菌核酸扩增。PMA-LAMP方法能够在恒温65 ℃、60 min内完成对亚致死型金黄色葡萄球菌特异性nuc基因的特异性检测，其对亚致死状态金黄色葡萄球菌的检出限为34 CFU/mL，对食物样品速冻水饺和奶粉的检出限分别为17 CFU/mL和1.70×102 CFU/mL。建立的PMA-LAMP方法可以有效检测亚致死态金黄色葡萄球菌，提供了一种新的检测技术和解决方案。

关键词: 食品安全, 金黄色葡萄球菌, 亚致死状态, 叠氮溴化丙锭-环介导等温扩增技术, 快速检测

Abstract: In this study, a loop-mediated isothermal amplification (LAMP) assay combined with propidium monoazide (PMA) treatment was developed for the rapid and efficient detection of Staphylococcus aureus with sublethal injury. The sensitivity of PMA-LAMP was investigated by artificially contaminating food samples including frozen dumplings and milk powder with S. aureus. The results showed that a concentration of 3 μg/mL PMA was optimal for completely restraining the amplification of 1.2 × 107 copies/mL of DNA from dead S. aureus which was exposed to a 650 W halogen lamp for 5 min. PMA-LAMP could achieve the specific detection of the unique nuc gene of S. aureus with sublethal injury at a constant temperature of 65 ℃ within 60 min with a sensitivity of 34 CFU/mL. In addition, the PMA-LAMP assay was proved efficient by using it to detect the viable cells in artificially contaminated samples, with a sensitivity of 17 CFU/mL for artificially contaminated milk powder and 1.70 × 102 CFU/mL in artificially contaminated frozen dumplings. It can be concluded that the PMA-LAMP assay can efficiently detect S. aureus with sublethal injury and provide a new technique for detecting S. aureus in food samples.

Key words: food safety, Staphylococcus aureus, sublethal state, propidium monoazide-loop-mediated isothermal amplification (PMA-LAMP), rapid detection

中图分类号:

TS207.4

曹潇，赵力超，杨翠琪，谷立慧，欧阳广宇，陈金，陈思锴，谭绮雯，王丽. 基于叠氮溴化丙锭与恒温核酸扩增技术快速检测亚致死状态食源金黄色葡萄球菌[J]. 食品科学, 2016, 37(24): 149-155.

CAO Xiao, ZHAO Lichao, YANG Cuiqi, GU Lihui, OUYANG Guangyu, CHEN Jin, CHEN Sikai, TAN Qiwen, WANG Li. Establishment of PMA-LAMP Method for Rapid Detection of Staphylococcus aureus with Sublethal Injury[J]. FOOD SCIENCE, 2016, 37(24): 149-155.

[1]	杨慧轩，罗欣，朱立贤，杨啸吟，韩广星，董鹏程，张一敏. 噬菌体在控制肉源致病菌中的应用研究进展[J]. 食品科学, 2021, 42(9): 293-301.
[2]	陈选，陈旭，韩金志，汪少芸. 海洋鱼源抗菌肽的研究进展及其在食品安全中的应用前景[J]. 食品科学, 2021, 42(9): 328-335.
[3]	陈默，张景祥，胡恩华，吴林海，张义. 基于结构化分析和语义相似度的食品安全事件领域数据挖掘模型[J]. 食品科学, 2021, 42(7): 35-44.
[4]	郎晨晓，张一敏，朱立贤，梁荣蓉，毛衍伟，杨啸吟，韩广星，罗欣，董鹏程. 牛肉低温贮藏环境中沙门氏菌诱导耐酸响应的存在程度及其产生机制[J]. 食品科学, 2021, 42(6): 68-74.
[5]	张鹏飞，付雪婷，赵春花，刘心雨，张杰，张萌，寇明莹，葛武鹏，王新. 羊奶粉生产中金黄色葡萄球菌分离鉴定及其分子特性和耐药性检测[J]. 食品科学, 2021, 42(6): 291-297.
[6]	田景升，李东东，赵玲钰，高文惠. 喹乙醇印迹传感器的制备及其在喹噁啉类药物残留快检中的应用[J]. 食品科学, 2021, 42(6): 316-324.
[7]	骆靖阳，陆柏益. 基于文献计量学的食品大数据技术研究分析[J]. 食品科学, 2021, 42(5): 278-287.
[8]	刘娜，曹强，肖雨诗，黄蓉，程雷，刘欢，韩刚，李晋成，李梦龙，吴立冬. 基于多巴胺及其衍生物的传感器在食品快速检测中的研究进展[J]. 食品科学, 2021, 42(5): 332-339.
[9]	黄栋玮，谷贵章，胡科娜，高兴杰，张进杰，杨文鸽，徐大伦. 基于D152树脂吸附蛋白质结合SERS测定鱼肉中的鸟嘌呤含量[J]. 食品科学, 2021, 42(18): 298-305.
[10]	杨建飞，马倩，左勇，黄雪芹，徐佳，王定丽，周耀进，杨柯怡. 亚硝酸盐快速检测试剂研究及其在酱腌菜中的应用[J]. 食品科学, 2021, 42(18): 321-328.
[11]	王丹丹，李莉，杨艳歌，刘鸣畅，王洪越，吴淑清，袁飞，吴亚君. 克罗诺杆菌属快速检测体系的建立[J]. 食品科学, 2021, 42(16): 286-292.
[12]	李文华. 我国保健食品安全协同治理法律问题探析[J]. 食品科学, 2021, 42(13): 360-369.
[13]	王邹璐琪，李立煌，李丹阳，艾超超，任磊，孙本强. 构建下转换荧光-适配体的免疫层析试纸条用于快速检测黄曲霉毒素B1[J]. 食品科学, 2021, 42(12): 295-301.
[14]	李超逸，李龙，朱莹，吴婷，杜一平. 固相萃取光谱法测定水及肉制品中痕量亚硝酸钠[J]. 食品科学, 2021, 42(12): 309-314.
[15]	卢洁，田婧，梁振华，王金梅，康文艺，马常阳，李昌勤. 近红外光谱法快速测定香菇总糖含量[J]. 食品科学, 2021, 42(12): 189-194.

基于叠氮溴化丙锭与恒温核酸扩增技术快速检测亚致死状态食源金黄色葡萄球菌

Establishment of PMA-LAMP Method for Rapid Detection of Staphylococcus aureus with Sublethal Injury

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