标准分子构建及其在转基因玉米59122定量检测中的应用

doi:10.7506/spkx1002-6630-201102032

食品科学

标准分子构建及其在转基因玉米59122定量检测中的应用

陆姣，杨蓉,黄昆仑，赵薇维，罗云波，元延芳，许文涛

1.中国农业大学食品科学与营养工程学院食品安全实验室，北京 100083；
2.农业部转基因产品检验监督测试中心(北京)，北京 100083

出版日期:2011-01-25 发布日期:2011-01-10
通讯作者: 许文涛
基金资助:
国家“863”计划项目(2006AA10Z440)；国家自然科学基金项目(30800770)；
国家转基因生物新品种培育重大专项(2008ZX08012-001)

Construction of Standard Reference Molecule and Its Application in Event-specific Transgenic Detection of Genetically Modified Maize 59122

LU Jiao，YANG Rong，HUANG Kun-lun，ZHAO Wei-wei，LUO Yun-bo，YUAN Yan-fang，XU Wen-tao

1. Food Safety Laboratory, College of Food Science and Nutritional Engineering, China Agricultural University,
Beijing 100083, China ；2. Supervision, Inspection and Testing Center of Genetically
Modified Organisms (Beijing), Ministry of Agriculture, 100083 Beijing, China

Online:2011-01-25 Published:2011-01-10
Contact: XU Wen-tao

摘要/Abstract

摘要： 根据转基因作物59122 的外源基因与玉米基因组之间的左侧侧翼序列设计具品系特异性的荧光探针及引物，以实时荧光PCR 技术建立59122 的品系特定量检测方法，以重组PCR 技术成功获得了标准分子(整合了内标基因序列与左侧翼序列)梯度范围为101～105，定量范围为0.01%～100%；建立了玉米内源基因与侧翼序列的标准曲线，变异系数CV 值、标准偏差SD 以及相关系数R2 均可接受；检测5 个已知转基因含量(0.1%、0.5%、1%、2%、5%)的混合样品中的转基因含量，结果分别为0.12%、0.56%、1.04%、1.61%、4.66%，实验误差小于25%，结果可信。

关键词: 品系特异性, 实时荧光PCR, 转基因玉米, 标准分子

Abstract: Transgenic event-specific primers and Taqman probes based on the left-flanking sequence of 59122 were
designed, and a real-time PCR method was developed to quantitatively detect the event-specific genetically modified maize
59122. The standard reference molecule (integration of the reference gene sequence and the left-wing sequence) with a
gradient range of 101－105 and a quantitative range of 0.01%－100% were obtained by a recombinant PCR method. Two
standard curves of the reference gene sequence and the left-wing sequence were established with acceptable CV (coefficient
of variance), SD (standard deviation) and R2 (correlation coefficient). Five mixed samples with known genetically modified
contents of 0.1%, 0.5%, 1%, 2% and 5% were determined with the results of 0.12%, 0.56%, 1.04%, 1.61% and 4.66%,
respectively. The experimental error was less than 25%. The assay can be applied to analyze genetically modified content (raw
materials as well as processed food) and will provide a technical support for the preparation of standard reference molecule.

Key words: event-specific, real-time PCR, genetically modified maize, standard reference molecule

中图分类号:

Q789
S513

陆姣，杨蓉,黄昆仑，赵薇维，罗云波，元延芳，许文涛. 标准分子构建及其在转基因玉米59122定量检测中的应用[J]. 食品科学, doi: 10.7506/spkx1002-6630-201102032.

LU Jiao，YANG Rong，HUANG Kun-lun，ZHAO Wei-wei，LUO Yun-bo，YUAN Yan-fang，XU Wen-tao. Construction of Standard Reference Molecule and Its Application in Event-specific Transgenic Detection of Genetically Modified Maize 59122[J]. FOOD SCIENCE, doi: 10.7506/spkx1002-6630-201102032.

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标准分子构建及其在转基因玉米59122定量检测中的应用

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