食品科学 ›› 2017, Vol. 38 ›› Issue (4): 39-44.doi: 10.7506/spkx1002-6630-201704007
陆 浩,李天明,刘金雷,杜红燕,王北辰,冯惠勇
LU Hao, LI Tianming, LIU Jinlei, DU Hongyan, WANG Beichen, FENG Huiyong
摘要: 通过构建尿嘧啶磷酸核糖转移酶基因(upp)敲除打靶质粒,采用同源重组的方法获得了生酮古龙酸杆菌(Ketogulonigenium vulgare)的upp基因缺失突变株K. vulgare Δupp,可作为基因组无痕修饰系统底盘细胞的upp基因表达载体,转化突变株K. vulgare Δupp,获得upp基因回补菌株PBB-upp,并验证了upp作为负向筛选标记的可行性。实验结果表明:突变株Δupp在1 mg/mL的5-氟尿嘧啶培养基上可生长,野生型和回补菌株PBB-upp不能生长,3株菌对5-氟尿嘧啶的抗性存在显著差异,说明可以将upp基因作为负向筛选标记,与正向筛选标记相结合,在upp基因缺失的底盘细胞基础上通过两次同源重组,实现基因组的无痕修饰与改造。
中图分类号: