食品科学 ›› 2017, Vol. 38 ›› Issue (20): 34-39.doi: 10.7506/spkx1002-6630-201720006
王健,刘媛,张俊花,韩正政,兰凤英
WANG Jian, LIU Yuan, ZHANG Junhua, HAN Zhengzheng, LAN Fengying
摘要: 通过密码子优化、昆虫杆状病毒表达系统(Bac-to-Bac)构建、表达条件筛选及镍柱亲和层析,研究β2肾上腺素受体(β2 adrenergic receptor,β2AR)基因(β2AR)在昆虫细胞Sf9中的高效表达及纯化策略。方法:人工合成改造后的β2AR基因,将其克隆至转移载体pFastBac1中,构建重组杆状病毒表达质粒pFastBac1-β2AR’,转染昆虫细胞Sf9,优化表达条件,采用镍离子亲和层析法纯化重组蛋白并进行活性鉴定。结果:适宜的表达条件为感染细胞使用的感染复数5、感染后表达时间48?h,Western blot分析显示在47?kD左右处出现清晰的特异性条带,与预期结果一致。纯化的受体蛋白纯度大于90%,活性鉴定结果显示该受体蛋白可特异性吸附盐酸克伦特罗、沙丁胺醇及莱克多巴胺3?种β激动剂的酶标记物,OD值分别为0.983、0.947和0.912。结论:本研究实现了β2AR受体在Sf9细胞中的表达,且纯化后的受体蛋白保持了较好的β激动剂亲和活性,为利用β2AR受体开展β激动剂多残留快速检测技术提供了依据。
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