食品科学 ›› 2017, Vol. 38 ›› Issue (22): 8-13.doi: 10.7506/spkx1002-6630-201722002
邵泽香,焦琳舒,陆兆新,别小妹,赵海珍,张充,吕凤霞
SHAO Zexiang, JIAO Linshu, LU Zhaoxin, BIE Xiaomei, ZHAO Haizhen, ZHANG Chong, Lü Fengxia
摘要: 为提高地衣芽孢杆菌L-天冬酰胺酶活性,通过定向进化技术对其进行分子改造。经过两轮易错聚合酶链式反应和一轮DNA shuffling,从19100多个突变株中筛选到突变体S10、S16和S21,其酶比活力较野生型分别提高了106%、74%和43%,且突变酶Kcat/Km都有所增大。其中,突变体S10氨基酸序列发生3?个突变,K43E、N67S和I269L。三维模拟结果显示,第43位氨基酸突变为谷氨酸、第67位氨基酸突变为丝氨酸,可能提高了底物亲和力和催化效率,从而提高酶活性。圆二色谱分析表明,相比野生酶,突变酶的α-螺旋数减少、无规则卷曲有所增加,表明其刚性略有降低,柔性有所增加。利用定向进化策略能够有效地提高地衣芽孢杆菌L-天冬酰胺酶活性。
中图分类号: