食品科学 ›› 2018, Vol. 39 ›› Issue (2): 99-104.doi: 10.7506/spkx1002-6630-201802016
张玉梅1,2,李鹏鹏1,*,张牧焓1,王晶晶1,2,王道营1,徐为民1,2,3
ZHANG Yumei1,2, LI Pengpeng1,*, ZHANG Muhan1, WANG Jingjing1,2, WANG Daoying1, XU Weimin1,2,3
摘要: 为研究麻鸭(Anas platyrhynchas)热休克蛋白HSP90α结合肌内磷脂及抑制磷脂水解的作用机制,采用反转录聚合酶链式反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)技术,以麻鸭骨骼肌细胞cDNA为模板扩增HSP90α基因,构建重组表达质粒在大肠杆菌中诱导表达,镍柱亲和层析和凝胶层析纯化可溶性重组蛋白。结果表明,获得的HSP90α开放阅读框全长为2?187?bp,编码728?个氨基酸,预测的理论等电点约为5。构建的原核表达载体pCold1-HSP90α在大肠杆菌中成功可溶性表达了麻鸭HSP90α,并获得了高纯度的重组HSP90α蛋白。运用薄层层析证明该重组蛋白具有稳定结合磷脂酰胆碱的活性,并且该蛋白能显著削弱磷脂酶A2对磷脂的水解作用。该研究成功克隆并建立了麻鸭HSP90α基因的原核表达体系,制备了具有磷脂结合活性的重组蛋白,为进一步研究HSP90α与磷脂的相互作用及对肉品加工中磷脂的保护效应提供了理论支持。
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