微滴数字PCR技术在多拷贝木聚糖酶酿酒酵母工程菌筛选中的应用

doi:10.7506/spkx1002-6630-201810028

食品科学 ›› 2018, Vol. 39 ›› Issue (10): 179-184.doi: 10.7506/spkx1002-6630-201810028

微滴数字PCR技术在多拷贝木聚糖酶酿酒酵母工程菌筛选中的应用

兰雪1，张斯童1，李哲1，常浩1，孙旸1，王刚1，陈欢1，王春凤2，陈光1,*

（1.吉林农业大学生命科学学院，吉林?长春 130118；2.吉林农业大学动物科学技术学院，吉林?长春 130118）

出版日期:2018-05-25 发布日期:2018-05-15
基金资助:
吉林省秸秆综合利用技术创新平台项目（吉高平合字2014[C]-1）；吉林省科技发展计划重大科技招标专项（20170203009NY）；吉林省科技发展计划重大科技攻关项目（20150204003SF）

Application of Droplet Digital PCR in Screening of Genetically Modified Saccharomyces cerevisiae for Multicopy Expression of Xylanase

LAN Xue1, ZHANG Sitong1, LI Zhe1, CHANG Hao1, SUN Yang1, WANG Gang1, CHEN Huan1, WANG Chunfeng2, CHEN Guang1,*

(1. College of Life Science, Jilin Agricultural University, Changchun 130118, China;2. Animal Science and Technology College, Jilin Agricultural University, Changchun 130118, China)

Online:2018-05-25 Published:2018-05-15

摘要/Abstract

摘要： 为获得高产木聚糖酶酿酒酵母工程菌，利用rDNA整合法构建木聚糖酶酿酒酵母整合表达载体，实现木聚糖酶基因的多拷贝表达，并利用微滴数字聚合酶链式反应技术对转化子拷贝数进行检测，分析木聚糖酶基因拷贝数与酶活力之间的关系。结果表明：利用rDNA整合法获得了10?株不同拷贝数木聚糖酶酿酒酵母工程菌，对其酶活力进行测定，发现当拷贝数小于9时，菌株产酶能力随拷贝数增加而增强，9?拷贝数时菌株产酶能力最强，酶活力为308?U/mL，超过9?拷贝，产酶能力降低。

关键词: 微滴数字聚合酶链式反应技术, 多拷贝, 酿酒酵母, 木聚糖酶, rDNA整合法

Abstract: In order to obtain a high yield of xylanase from genetically engineered Saccharomyces cerevisiae, the S. cerevisiae expression vector for the multicopy expression of the xylanase gene was constructed by rDNA integration method. Then, the copy number of transformants was detected by droplet digital PCR, and the relationship between the copy number of the xylanase gene and the enzyme activity was analyzed. The results indicated that 10 strains of S. cerevisiae were obtained by rDNA integration method. Their enzymatic activity was measured. The xylanase production capacity was increased to the maximum of 308 U/mL with copy number up to 9, but decreased when the copy number was more than 9.

Key words: droplet digital PCR, multicopy transformant, Saccharomyces cerevisiae, xylanase, rDNA integration method

中图分类号:

Q936

兰雪，张斯童，李哲，常浩，孙旸，王刚，陈欢，王春凤，陈光. 微滴数字PCR技术在多拷贝木聚糖酶酿酒酵母工程菌筛选中的应用[J]. 食品科学, 2018, 39(10): 179-184.

LAN Xue, ZHANG Sitong, LI Zhe, CHANG Hao, SUN Yang, WANG Gang, CHEN Huan, WANG Chunfeng, CHEN Guang. Application of Droplet Digital PCR in Screening of Genetically Modified Saccharomyces cerevisiae for Multicopy Expression of Xylanase[J]. FOOD SCIENCE, 2018, 39(10): 179-184.

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微滴数字PCR技术在多拷贝木聚糖酶酿酒酵母工程菌筛选中的应用

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