荞麦过敏原特异性抗体酶联免疫吸附法检测试剂的制备

doi:10.7506/spkx1002-6630-201120068

食品科学 ›› 2011, Vol. 32 ›› Issue (20): 327-330.doi: 10.7506/spkx1002-6630-201120068

荞麦过敏原特异性抗体酶联免疫吸附法检测试剂的制备

张昕1，崔晓东2，王转花2

1.山西大学环境科学与工程研究中心 2.山西大学生物技术研究所

出版日期:2011-10-25 发布日期:2011-10-12
基金资助:
山西省科技攻关项目(20100321101)；太原市技术创新计划项目(2010-09)

Preparation of an ELISA Method for Determining Buckwheat Allergen

ZHANG Xin1，CUI Xiao-dong2，WANG Zhuan-hua2

(1. Research Center for Environmental Science and Engineering, Shanxi University, Taiyuan 030006, China； 2. Institute of Biotechnology, Shanxi University, Taiyuan 030006, China)

Online:2011-10-25 Published:2011-10-12

摘要/Abstract

摘要： 以天然苦荞过敏蛋白包被聚苯乙烯微孔板，以鼠抗人IgE抗体标记辣根过氧化物酶，以间接酶联免疫吸附法(indirect enzyme-linked immunosorbent assay，IELISA)检测病人血清中的特异性抗体，分析并建立关键操作步骤及反应条件。结果表明：ELISA反应的最适工作条件为包被的抗原质量浓度100μg/mL、阳性血清稀释度1:50、酶标二抗稀释度1:1000，37℃时封闭的最佳时间为40min，包被抗原与阳性血清中抗体的最佳作用时间为40min，阳性血清与酶标二抗的最佳作用时间为40min。本方法具有良好的特异性、重复性和精密度。

关键词: 苦荞, 过敏蛋白, 试剂盒, 间接酶联免疫吸附法

Abstract: An indirect enzyme-linked immunosorbent assay (IELISA) was proposed to detect specific antibodies in tartary buckwheat allergenic patients, sera using polystyrene micro-well plate coated with natural tartary buckwheat allergenic proteins and horseradish peroxidase (HRP)-labeled mouse anti-human IgE. Key operations and reaction conditions were optimized. The results showed that the optimal coating antigen concentration, positive serum dilution, HRP-labeled mouse anti-human IgE concentration, blocking time at 37 ℃, reaction time between coating antigen and antibodies in positive sera, and reaction time between positive sera and HRP-labeled mouse anti-human IgE were 100 μg/mL, 1:50, 1:1000, 40 min, 40 min and 40 min, respectively. This method proved highly specific, repeatable and sensitive.

Key words: tartary buckwheat, allergen, kit, indirect enzyme-linked immunosorbent assay (IELISA)

中图分类号:

R392.11

张昕，崔晓东，王转花. 荞麦过敏原特异性抗体酶联免疫吸附法检测试剂的制备[J]. 食品科学, 2011, 32(20): 327-330.

ZHANGXin，CUIXiao-dong，WANGZhuan-hua. Preparation of an ELISA Method for Determining Buckwheat Allergen[J]. FOOD SCIENCE, 2011, 32(20): 327-330.

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