诺氟沙星免疫学检测方法的建立及优化

doi:10.7506/spkx1002-6630-201121030

食品科学 ›› 2011, Vol. 32 ›› Issue (21): 148-151.doi: 10.7506/spkx1002-6630-201121030

诺氟沙星免疫学检测方法的建立及优化

姜金庆1,2，李广领2，王自良2,*，刘兴友2，杨雪峰1，黄华国1

1.河南科技学院动物科学学院 2.动物疫病和残留物防控河南省高校工程技术研究中心

出版日期:2011-11-15 发布日期:2011-11-11
基金资助:
河南省高校科技创新人才支持计划资助项目(2010HASTIT026)

Development and Optimization of Immunoassay Method for Detection of Norfloxacin Residues

JIANG Jin-qing1,2，LI Guang-ling2，WANG Zi-liang2,*，LIU Xing-you2，YANG Xue-feng1，HUANG Hua-guo1

(1. College of Animal Science, Henan Institute of Science and Technology, Xinxiang 453003, China；2. Henan Higher Education Engineering Technology Research Center for Animal Diseases Control and Residues Supervison, Xinxiang 453003, China)

Online:2011-11-15 Published:2011-11-11

摘要/Abstract

摘要： 采用优化的碳二亚胺法制备诺氟沙星(NOR)人工抗原，免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体，建立间接竞争ELISA标准曲线。对NOR的线性检测范围为0.07～31.8ng/mL，半数抑制质量浓度(IC50)和最低检测限(LOD)分别为1.5ng/mL和0.04ng/mL。检测缓冲液中pH值和磷酸根离子浓度的最佳参数分别为7.4和10mmol/L；对甲醇和NaOH溶液(30mmol/L)的最佳调整体积分数分别为30%和10%。抗体具有广谱特异性，与环丙沙星(83.3%)、培氟沙星(78.9%)、依诺沙星(68.2%)、恩诺沙星(51.7%)和洛美沙星(41.7%)有较高的交叉反应率，可用于氟喹诺酮类药物(FQs)多残留检测方法研究。

关键词: 诺氟沙星, 氟喹诺酮, 间接竞争ELISA, 多残留检测

Abstract: Modified EDC method was employed to synthesize norfloxacin (NOR) artificial antigen and New Zealand rabbits were immunized for anti-NOR polyclonal antibody (pAb) production. An indirect competitive ELISA standard curve was established. The developed assay was sensitive and had a linear range from 0.07 to 31.8 ng/mL (R2 = 0.9627), with IC50 and LOD of respectively 1.5 ng/mL and 0.04 ng/mL. The optimal pH and phosphate ion concentration in assay buffer were determined to be 7.4 mmol/L and 10 mmol/L, respectively, and the concentration adjustments for methanol and NaOH (30 mmol/L) in dilute solutions did not exceed 30% and 10%, respectively. The produced pAb had broad-spectrum specificity and exhibited a high cross-reactivity with ciprofloxacin (83.3%), pefloxacin (78.9%), enoxacin (68.2%), enrofloxacin (51.7%) and lomefloxacin (41.7%). The results obtained suggest that the established icELISA method be used for the multi-determination of fluoroquinolone residues.

Key words: norfloxacin (NOR), fluoroquinolone (FQs), indirect competitive ELISA, multi-residue detection

中图分类号:

TS207.6

姜金庆，李广领，王自良，刘兴友，杨雪峰，黄华国. 诺氟沙星免疫学检测方法的建立及优化[J]. 食品科学, 2011, 32(21): 148-151.

JIANG Jin-qing，LI Guang-ling，WANG Zi-liang，LIU Xing-you，YANG Xue-feng，HUANG Hua-guo. Development and Optimization of Immunoassay Method for Detection of Norfloxacin Residues[J]. FOOD SCIENCE, 2011, 32(21): 148-151.

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