高山红景天中糖基转移酶家族cDNA全长基因的克隆

doi:10.7506/spkx1002-6630-201021055

食品科学 ›› 2010, Vol. 31 ›› Issue (21): 244-247.doi: 10.7506/spkx1002-6630-201021055

高山红景天中糖基转移酶家族cDNA全长基因的克隆

于寒松¹，张继星²，李彦舫³，马兰青^{4 ,*} ，胡耀辉^{1 ,*}

1.吉林农业大学食品科学与工程学院
2.内蒙古民族大学生命科学学院
3.吉林大学植物科学学院
4.农业部都市农业(北方)重点开放实验室，北京农学院

收稿日期:2010-06-30 修回日期:2010-10-20 出版日期:2010-11-15 发布日期:2010-12-29
通讯作者: 胡耀辉 E-mail:huyaohui@vip.163.com
基金资助:
国家自然科学基金项目(30900112)

Full-length cDNA Cloning of Glycosyltransferase Family from Rhodiola sachalinensis

YU Han-song1，ZHANG Ji-xing2，LI Yan-fang3，MA Lan-qing4,*，HU Yao-hui1,*

1. College of Food Science and Engineering, Jilin Agricultural University, Changchun 130118, China；
2. College of Life Sciences, Inner Mongolia University for the Nationalities, Tongliao 028043, China；
3. College of Plant Science, Jilin University, Changchun 130062, China；
4. Key Laboratory of Urban Agriculture(North), Ministry of Agriculture, Beijing University of Agriculture, Beijing 102206, China

Received:2010-06-30 Revised:2010-10-20 Online:2010-11-15 Published:2010-12-29
Contact: HU Yao-hui E-mail:huyaohui@vip.163.com

摘要/Abstract

摘要：

为了获得高山红景天中红景天苷生物合成关键酶—— UDP- 糖基转移酶家族基因的全长cDNA 序列，采用在线简并引物设计软件结合3′-RACE 技术获得两个糖基转移酶基因的3′端部分序列，进一步采用不同的5′-RACE试剂盒扩增两个基因的5′端序列，结果显示利用Takara 公司的试剂盒扩增可以得到cDNA全长序列(GenBank登录号为EF508689 和EU567325)，而采用Invitrogen 公司的试剂盒得到的序列不包括全部开放读码框。实验证明，利用Takara 公司的SMARTerTM RACE cDNA Amplification Kit 克隆获得基因全长序列的比率更高。

关键词: 糖基转移酶, 基因克隆, cDNA 末端快速克隆法(RACE), 高山红景天

Abstract:

In order to obtain the critical enzyme for the synthesis of Rhodiola sachalinensis glycoside, two putative UDPglycosyltransferase (UGT) cDNAs (GenBank accession number, EF508689和EU567325) were isolated from R. sachalinensi. The primers were designed for 3＇-rapid amplification of cDNA ends (RACE) based on the consensus hybrid oligonucleotide primers (CODEHOP) strategy by the Block Maker program. A full-length cDNA sequence (Genbank accession numbers: EF508689 and EU567325) was obtained through the amplification using a SMARTerTM RACE cDNA Amplification Kit (TaKaRa, Dalian, China), whereas the sequence obtained using a 5'-RACE system (version 2.0, InvitrogenTM Life Technologies) contained no full-open reading frame.The cloning efficient of two 5'-RACE systems was investigated. Results exhibited that TaKaRa SMARTerTM RACE cDNA Amplification Kit was more efficient in complete cDNA sequence cloning, compared with the InvitrogenTM 5'-RACE system.

Key words: glycosyltransferase, gene cloning, rapid amplification of cDNA ends (RACE), Rhodiola sachalinensis

中图分类号:

Q785

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高山红景天中糖基转移酶家族cDNA全长基因的克隆

Full-length cDNA Cloning of Glycosyltransferase Family from Rhodiola sachalinensis

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