半巢式PCR法构建天然噬菌体单域重链抗体文库

doi:10.7506/spkx1002-6630-201019065

食品科学 ›› 2010, Vol. 31 ›› Issue (19): 299-303.doi: 10.7506/spkx1002-6630-201019065

半巢式PCR法构建天然噬菌体单域重链抗体文库

涂追^1,2，许杨^1,2,*，何庆华^1,2，陶勇²

1.南昌大学食品科学与技术国家重点实验室
2.南昌大学中德联合研究院

收稿日期:2010-06-30 修回日期:2010-09-25 出版日期:2010-10-15 发布日期:2010-12-29
通讯作者: 许杨 E-mail:xuyang1951@yahoo.com.cn
基金资助:
国家中小企业创新基金项目(09C26213604449)；江西省教育厅青年科学基金项目(GJJ09442)；江西省自然科学基金项目

Construction of Alpaca-derived Naive Single-domain Antibody Phage Display Library by Semi-nested PCR

TU Zhui1,2，XU Yang1,2,*，HE Qing-hua1,2，TAO Yong2

1. State Key Laboratory of Food Science and Technology, Nanchang University, Nanchang 330047, China ；
2. Sino-German Joint Research Institute, Nanchang University, Nanchang 330047, China)

Received:2010-06-30 Revised:2010-09-25 Online:2010-10-15 Published:2010-12-29
Contact: XU Yang E-mail:xuyang1951@yahoo.com.cn

摘要/Abstract

摘要：

目的：构建天然噬菌体单域重链抗体文库，淘选可应用于食品安全检测的单域重链抗体。方法：以未经免疫的健康羊驼(Lama pacos)外周血为起始材料，提取RNA 反转录为cDNA，根据重链抗体保守序列设计引物，通过半巢式PCR 法扩增获得全套重链抗体可变区编码基因，将其克隆至噬菌粒pHEN1，电转化大肠杆菌TG1 得到初级抗体库，辅助噬菌体KM13 感染后得到噬菌体展示库。采用固相淘选法分别对3 种人工抗原进行淘选。结果：单域重链抗体编码基因得到有效扩增，经10 次电转化获得初级文库，命名为SNAL，实际库容量达到1.6 × 107 个独立克隆，菌落PCR 鉴定结果表明，克隆效率约为87%，辅助噬菌体救援后得到的展示文库命名为SNA-PDL，滴度达1013CFU/mL。对3 种不同人工抗原DON-MBSA、NOR-BSA 和AFB1-OVA 的淘选均有富集现象。结论：构建了天然噬菌体单域重链抗体文库，文库的多样性较好，可以用于后续淘选。

关键词: 单域重链抗体, VHH 抗体, 噬菌体文库, 羊驼, 半抗原

Abstract:

Objective: To construct a single-domain heavy chain antibody phage display library for food safety detection. Methods: Total RNA was purified from peripheral lymphocytes of two healthy non-immune alpaca (Lama pacos) and directly used for complementary DNA (cDNA) synthesis. The repertoire of VHH encoding DNAs was amplified by semi-nested PCR, and the PCR products were cloned into the phagemid vector pHEN1. Through the electroporation of E. coli TG1, a primary library was established and then rescued by the helper phage KM13 to generate a phage display library. The generated phage display library was used to pan three different artificial antigens by solid phage biopanning. Results: The VHH encoding DNAs was amplified. After electroporating for 10 times, the primary library named as SNAL was generated containing more than 107 independent clones. The cloning efficiency was up to 87%. The titter of the phage display library obtained after the rescue with KM13 named as SNA-PDL was up to 1013 CFU/mL. All antigen screening data exhibited a significant enrichment in phage particles. Conclusion: A naive single-domain antibody phage display library has been successfully constructed. This library exhibits good diversity and can be used to the recovery of binders.

Key words: single-domain heavy chain antibody, VHHs, phage display library, alpaca, hapten

中图分类号:

Q789

涂追1,2，许杨1,2,*，何庆华1,2，陶勇2. 半巢式PCR法构建天然噬菌体单域重链抗体文库[J]. 食品科学, 2010, 31(19): 299-303.

TU Zhui1,2，XU Yang1,2,*，HE Qing-hua1,2，TAO Yong2. Construction of Alpaca-derived Naive Single-domain Antibody Phage Display Library by Semi-nested PCR[J]. FOOD SCIENCE, 2010, 31(19): 299-303.

[1]	王静，马宁宁，宋洋. 杂环胺人工抗原的合成以及多克隆抗体的制备[J]. 食品科学, 2017, 38(4): 45-50.
[2]	王晓芬，鄢爱平，谭婷，毛雪金，刘俊俊，郭岚，万益群. 多效唑人工抗原的合成与鉴定[J]. 食品科学, 2016, 37(7): 134-139.
[3]	肖石妹，鄢爱平，肖芳，万益群，郭岚. 氯吡脲人工抗原的合成与鉴定[J]. 食品科学, 2016, 37(21): 183-188.
[4]	石贤爱1,2，裴世锋1，李向楠1，朱秋享1，叶小军3，樊海平3. 基于不同半抗原的呋喃唑酮代谢物免疫检测方法的建立与比较[J]. 食品科学, 2014, 35(8): 174-180.
[5]	吴春生，马良，胡媛媛，张宇昊. 真菌毒素人工抗原制备方法研究进展[J]. 食品科学, 2014, 35(5): 239-245.
[6]	王吕，邵辉峰，张斌，陈雪岚. 人工抗原苯并芘的化学合成与分析[J]. 食品科学, 2014, 35(19): 53-56.
[7]	陈波，何庆华，许杨. 小分子物质的非竞争免疫分析方法最新研究进展[J]. 食品科学, 2014, 35(15): 310-313.
[8]	邓发亮，刘晓云，唐时幸，王继华. 莱克多巴胺人工抗原的合成与鉴定[J]. 食品科学, 2013, 34(18): 146-149.
[9]	刘盼，郑海涛，何计国*. 格列本脲人工抗原的合成与鉴定[J]. 食品科学, 2012, 33(1): 200-203.
[10]	熊振宇，杨艳燕，李培武张奇，张文，丁小霞. 两种特异性氰戊菊酯人工抗原的合成与鉴定[J]. 食品科学, 2011, 32(7 ): 178-182.
[11]	宋贵平，郑海涛，何计国. 三聚氰胺人工抗原化合物的合成及鉴定[J]. 食品科学, 2011, 32(11): 260-264.
[12]	张小莺1，赵津子1，陈琛2，韩水仲1，田泽华1. 半抗原免疫分析在食品安全检测中的应用[J]. 食品科学, 2010, 31(17): 397-401.
[13]	周映霞1,2,3，张丽杰2，潘家荣2，焦必宁1,3,*，王磊2. 杀菌剂抑霉唑人工抗原的合成和鉴定[J]. 食品科学, 2010, 31(13): 184-188.
[14]	郭乃菲1,2，高兴1,2，纪淑娟1，于基成2,*. 百菌清人工抗原的制备与鉴定[J]. 食品科学, 2010, 31(13): 214-218.
[15]	杨先乐1，黄宣运1，胡鲲1，方伟1，王炼2，姜有声1,*. 环丙沙星单克隆抗体的制备及鉴定[J]. 食品科学, 2010, 31(12): 16-20.

半巢式PCR法构建天然噬菌体单域重链抗体文库

Construction of Alpaca-derived Naive Single-domain Antibody Phage Display Library by Semi-nested PCR

RichHTML

PDF (PC)

可视化

摘要/Abstract

引用本文

使用本文

参考文献

相关文章 15

编辑推荐

Metrics

本文评价