环丙沙星单克隆抗体的制备及鉴定

doi:10.7506/spkx1002-6630-201012004

食品科学 ›› 2010, Vol. 31 ›› Issue (12): 16-20.doi: 10.7506/spkx1002-6630-201012004

环丙沙星单克隆抗体的制备及鉴定

杨先乐¹，黄宣运¹，胡鲲¹，方伟¹，王炼²，姜有声^{1 ,*}

1.上海海洋大学国家水生动物病原库
2.四川省水产学校

收稿日期:2009-09-11 修回日期:2010-01-14 出版日期:2010-06-15 发布日期:2010-12-29
通讯作者: 姜有声 E-mail:ysjiang@shou.edu.cn
基金资助:
国家现代农业产业技术体系建设专项资金项目；“十一五”国家科技支撑计划项目(2006BAD03B04)；
上海市科技兴农重点攻关项目(6660106477)；上海市重点学科建设项目(Y1101)

Preparation and Identification of Monoclonal Antibody against Ciprofloxacin

YANG Xian-le1，HUANG Xuan-yun1，HU Kun1，FANG Wei1，WANG Lian2，JIANG You-sheng1,*

1. National Pathogen Collection for Aquatic Animal, Shanghai Ocean University, Shanghai 201306, China；
2. Sichuan Provincial Fisheries School, Chengdu 401520, China

Received:2009-09-11 Revised:2010-01-14 Online:2010-06-15 Published:2010-12-29
Contact: JIANG You-sheng1,* E-mail:ysjiang@shou.edu.cn

摘要/Abstract

摘要：

通过改进的碳二亚胺法制备环丙沙星- 牛血清白蛋白偶联物(CIP-BSA)，用紫外扫描、十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)方法鉴定偶联物。利用制备的CIP-BSA 偶联物作为免疫原，免疫Balb/c 小鼠，用杂交瘤技术制备环丙沙星单克隆抗体，并对其效价、亲和力和特异性进行鉴定。结果表明：CIP-BSA 的偶联比为30:1。经间接酶联免疫吸附(ELISA)法筛选，共筛出两株敏感、特异的杂交瘤细胞(JY-1、JY-2)。这两株细胞的腹水经纯化后的抗体效价分别为5.12 × 106、2.56 × 106，亲和力常数分别为2.88 × 109、2.46 × 109L/mol，两抗体均为IgG1a，取亲和力高的JY-1 进行竞争抑制测定，IC50 值可以达到9.83ng/mL。该单抗仅与恩诺沙星存在交叉反应，交叉反应率为95%。通过验证得到的JY-1 细胞株分泌的单克隆抗体可用于水产品中环丙沙星残留的快速检测。

关键词: 环丙沙星, 半抗原, 抗体, 免疫

Abstract:

The ciprofloxacin-bovine serum albumin conjugate (CIP-BSA) was prepared by a modified carbodiimide method, and identified by ultraviolet spectrometry and polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE). Then CIP-BSA was used as immunogen to immunize BALB/c mice, inducing the secretion of antibodies against hapten CIP. The monoclonal antibodies (Mabs) against CIP were obtained by hybridoma technology and their titer, affinity and specificity were identified. The results showed that CIP-BSA coupling ratio was 30:1, and two Mabs secreted by cell lines JY-1 or JY-2 belonging to IgG1a were screened by the indirect ELISA method. The titers of purified JY-1 and JY-2 Mabs were 5.12 × 106 and 2.56 × 106, respectively; both the Mabs showed high affinity to CIP with affinity coefficients of 2.88 × 109 and 2.46 × 109 L/mol respectively. A competitive inhibition curve of the JY-1 Mab was developed, and the IC50 was 9.83 ng/mL. The JY-1 Mab exhibited high cross-reactivity (95%) with enrofloxacin. These results suggested that the JY-1 Mab was useful for determination of CIP residues in aqua-products.

Key words: ciprofloxacin, hapten, antibody, immunity

中图分类号:

R446.61

杨先乐1，黄宣运1，胡鲲1，方伟1，王炼2，姜有声1,*. 环丙沙星单克隆抗体的制备及鉴定[J]. 食品科学, 2010, 31(12): 16-20.

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