地衣芽孢杆菌2709 蛋白酶分离纯化研究

doi:10.7506/spkx1002-6630-201011031

食品科学 ›› 2010, Vol. 31 ›› Issue (11): 141-146.doi: 10.7506/spkx1002-6630-201011031

地衣芽孢杆菌2709 蛋白酶分离纯化研究

马永强1，张浩 1，杨春华1，刘颖 1，孙冰玉1，张毅方2，石彦国1 ,*

1.哈尔滨商业大学食品工程学院 2.哈尔滨高科大豆食品有限责任公司

收稿日期:2009-09-03 修回日期:2010-03-18 出版日期:2010-06-01 发布日期:2010-12-29
通讯作者: 石彦国 E-mail:zhanghaocomeon@126.com
基金资助:
国家“863”计划项目(2006AA10Z329)

Separation and Purification of Protease from Bacillus licheniformis 2709

MA Yong-qiang1，ZHANG Hao1，YANG Chun-hua1，LIU Ying1，SUN Bing-yu1，ZHANG Yi-fang2，SHI Yan-guo1,*

1. College of Food Engineering, Harbin University of Commerce, Harbin 150076, China；
2. Harbin Hi-Tech Soybean Food Co. Ltd., Harbin 150078, China

Received:2009-09-03 Revised:2010-03-18 Online:2010-06-01 Published:2010-12-29
Contact: SHI Yan-guo E-mail:zhanghaocomeon@126.com

摘要/Abstract

摘要：

对产自地衣芽孢杆菌(B. licheniformis)2709 的碱性蛋白酶通过乙醇沉淀、盐析、DEAE 阴离子交换层析、凝胶层析4 步纯化，最终获得电泳纯的酶。以去酰胺度及酶比活力为指标，对碱性蛋白酶分离纯化条件进行优化。结果发现：提纯酶的比活力达61069U/mg，纯化倍数为38.7，活性回收率为19.3%，去酰胺度为20.9%。并研究该酶的基本酶学特性，结果发现：该酶最适作用pH 值为10.0，最适反应温度为50℃。40℃保温2h 后该酶保持80% 以上的活力，在pH8～11 之间有较高的pH 值稳定性。

关键词: 碱性蛋白酶, 提纯, 去酰氨

Abstract:

A procedure comprising alcohol precipitation, ammonium sulfate precipitation, DEAE ion exchange chromatography and gel filtration chromatography was used to prepare electrophoretically pure alkaline protease from the fermentation supernatant of Bacillus licheniformis 2709. Deamidation degree and alkaline protease activity were evaluated to optimize the procedure. The results indicated that the activity of purified protease was 61069 U/mg; final purification factor was 38.7; recovery rate of activity was 19.3%; and deamidation rate was 20.9%. The enzymological properties of alkaline protease were also studied. The optimal reaction conditions for alkaline protease were pH 10.0 and 50 ℃. After incubation at 40 ℃ for 2 h, the protease remained more than 80% activity and was relatively stable at pH 8 － 11.

Key words: alkaline protease, purification, deamidation

中图分类号:

TQ925.2

马永强1，张浩1，杨春华1，刘颖1，孙冰玉1，张毅方2，石彦国1,*. 地衣芽孢杆菌2709 蛋白酶分离纯化研究[J]. 食品科学, 2010, 31(11): 141-146.

MA Yong-qiang1，ZHANG Hao1，YANG Chun-hua1，LIU Ying1，SUN Bing-yu1，ZHANG Yi-fang2，SHI Yan-guo1,*. Separation and Purification of Protease from Bacillus licheniformis 2709[J]. FOOD SCIENCE, 2010, 31(11): 141-146.

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Separation and Purification of Protease from Bacillus licheniformis 2709

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