磺胺嘧啶单克隆抗体的制备与鉴定

doi:10.7506/spkx1002-6630-201011041

食品科学 ›› 2010, Vol. 31 ›› Issue (11): 192-196.doi: 10.7506/spkx1002-6630-201011041

磺胺嘧啶单克隆抗体的制备与鉴定

王刘花，许杨* ，郭杰标，张泓，何庆华

南昌大学食品科学与技术国家重点实验室，中德联合研究院

收稿日期:2009-11-09 修回日期:2010-04-12 出版日期:2010-06-01 发布日期:2010-12-29
通讯作者: 许杨 E-mail:wangliumeis@sina.com
基金资助:
江西省科技支撑计划项目(2007BS12501)

Preparation and Identification of Anti-sulfadiazine Monoclonal Antibody

WANG Liu-hua，XU Yang* ，GUO Jie-biao，ZHANG Hong，HE Qing-hua

Sino-Germany Joint Research Institute, State Key Laboratory of Food Science and Technology, Nanchang
University, Nanchang 330029, China

Received:2009-11-09 Revised:2010-04-12 Online:2010-06-01 Published:2010-12-29
Contact: XU Yang E-mail:wangliumeis@sina.com

摘要/Abstract

摘要：

采用重氮法同时制备结合比分别为9.0、8.0、3.7 的3 种磺胺嘧啶免疫抗原，并将其免疫BALB/c 小鼠，其中结合比为8.0 的一组免疫效果最佳。获得一株稳定分泌抗磺胺嘧啶单克隆抗体的杂交瘤细胞(1F6)，体内诱生法制备腹水。间接ELISA 测定腹水效价为1:1.28 × 106，建立间接竞争ELISA 标准曲线，其检测下限为10.4ng/mL，线性范围为14.8～421.5ng/mL，IC50 值为79.1ng/mL，与磺胺二甲嘧啶、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺对甲氧嘧啶交叉反应率分别为 0.3%、0.99%、4.5%，与磺胺甲噁唑、磺胺喹恶啉、对氨基苯甲酸、磺胺、对氨基苯磺酸未见有交叉反应。经鉴定，单克隆抗体免疫球蛋白为鼠IgG 的2b 亚类。

关键词: 磺胺嘧啶, 重氮法, 酶联免疫检测, 单克隆抗体

Abstract:

In order to generate a monoclonal antibody (McAb) against sulfadianzine (SD), three separate immunogens with SD/BSA conjugation ratios of 9.0, 8.0 and 3.7 were prepared by diazotization method and BALB/c mice were then immunized with the immunogens. An optimum immunization was observed in BALB/c mice immunized with the immunogen with middle SD/BSA conjugation ratio. A McAb (1F6) with high affinity to SD was obtained by hybridoma technique. The titer of the McAb was 1:1.28 ×106 in ascites according to the indirect ELISA determination. IC50 and the lowest detectable limit (LDL) of the McAb in linear range of 14.8－421.5 ng/mL for SD were 79.1 ng/mL and 10.4 ng/mL, respectively. The cross-reactivity ratios of the McAb against sulfamethazine, sulfamonomethoxine and sulfamethoxydiazine were 0.3%, 0.99% and 4.5%, respectively, while no cross-reactivity to sulfamethoxazole, sulfaquinoxaline, 4-aminobenzoic acid, sulfanilamide or sulfanilic acid was observed. The sub-class of the McAb was identified as IgG2b.

Key words: sulfadiazine, diazotization, ELISA, monoclonal antibody

中图分类号:

S859.84

王刘花，许杨*,郭杰标，张泓，何庆华. 磺胺嘧啶单克隆抗体的制备与鉴定[J]. 食品科学, 2010, 31(11): 192-196.

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