抗黄曲霉毒素B1单链抗体的表达载体的比较

doi:10.7506/spkx1002-6630-201009039

食品科学 ›› 2010, Vol. 31 ›› Issue (9): 171-176.doi: 10.7506/spkx1002-6630-201009039

抗黄曲霉毒素B1单链抗体的表达载体的比较

杨炼，刘自琴，刘蓉，陈海琴，陈卫，张灏*

江南大学食品学院，食品科学与技术国家重点实验室

收稿日期:2009-10-28 修回日期:2010-03-11 出版日期:2010-05-01 发布日期:2010-12-29
通讯作者: 张灏 E-mail:zhanghao@jiangnan.edu.cn
基金资助:
教育部新世纪人才计划资助项目(NCET-06-0482)

Comparison of pET Vectors for the Expression of Single Chain Antibody for Aflatoxin B1

YANG Lian，LIU Zi-qin，LIU Rong，CHEN Hai-qin，CHEN Wei，ZHANG Hao*

State Key Laboratory of Food Science and Technology, School of Food Science and Technology,
Jiangnan University, Wuxi 214122, China

Received:2009-10-28 Revised:2010-03-11 Online:2010-05-01 Published:2010-12-29

摘要/Abstract

摘要：

目的：比较4 种不同的pET 载体在表达抗黄曲霉毒素B1(AFB1)的单链抗体(scFv)克隆的特点，确定用以表达scFv-H4 的合适载体。方法：将目的基因H4 分别克隆到载体pET20b、pET22b、pET28a 和pET32a 上，分别转入大肠杆菌BL21(DE3)或Origami(DE3)中，比较诱导过程中细胞的生长状况和诱导结束后细胞破碎液中scFv-H4的生物活性以及细胞各部分包涵体。结果：pET20b 和pET22b 能表达具有生物活性的scFv-H4，这些具有生物活性的蛋白主要存在于周质中；pET28a 和pET32a 不能表达有生物活性的scFv-H4，而pET32a 仅能在细胞质中产生大量的包涵体。结论：pET22b 可能是表达AFB1 的单链抗体较优的表达载体。

关键词: 黄曲霉毒素, 单链抗体, 表达, 大肠杆菌, pET

Abstract:

Objective: Recombinant antibody expression in microorganism greatly facilitated the affinity and stability studies of recombinant antibodies, but previous studies had less reports about the selection of vectors. A suitable expression vector is important during the expression of the single chain antibody (scFv-H4) for aflatoxin B1. Methods: Four pET vectors such as pET20b, pET22b, pET28a and pET32a were employed in the functional expression of scFv-H4. Results: pET20b and pET22b vectors were able to express the functional antibody in periplasm. The vector of pET28a was not suitable for the expression of scFv-H4 due to lack of detectable scFv-H4 in total protein. Moreover, the detectable scFv-H4 was only expressed in inclusion body through pET32a expression system. Conclusion: pET22b was an excellent vector for the expression of scFv-H4, which might be a good reference for similar protein expression and be useful in the later study of scFv-H4 affinity and stability.

Key words: aflatoxin, single chain fragment, expression, Escherichia coli, pET

中图分类号:

Q782

杨炼，刘自琴，刘蓉，陈海琴，陈卫，张灏*. 抗黄曲霉毒素B1单链抗体的表达载体的比较[J]. 食品科学, 2010, 31(9): 171-176.

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抗黄曲霉毒素B1单链抗体的表达载体的比较

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