%0 Journal Article %A 费理文 %A 王勇 %T 构建高效糖配体再生重组菌生物催化合成莱鲍迪苷D %D 2018 %R %J 食品科学 %P 0-0 %V %N %X 利用拟南芥(Arabidopsis thaliana)蔗糖合酶AtSUS3构建活化糖配体尿苷二磷酸葡萄糖(以下简称UDPG)再生体系,与高效催化莱鲍迪苷D(RD)合成的糖基转移酶协同偶联完成RD的高效生物催化。从拟南芥cDNA克隆获得AtSUS3基因,将其装配至pET28a获得表达质粒pLW105,随后pLW105与携带糖基转移酶EUGT11基因的质粒共转化大肠杆菌BL21(DE3)构建双酶共表达工程菌。以此工程菌全细胞催化莱鲍迪苷A(RA)在不添加UDPG或者UDP的条件下,获得大于80%的mol底物转化率,RD产量达到930 mg/L。随后构建双酶基因串连质粒pLW108及双酶共表达大肠杆菌BL21(DE3)工程菌。用串连质粒构建的工程菌催化效果与双质粒共转化相同。针对细胞催化体系中需要高浓度蔗糖的问题,尝试采用共表达双酶工程菌的发酵破碎粗酶进行催化,结果显示以粗酶催化可简化催化体系,并降低蔗糖用量至质量分数5%,同时在不添加外源UDPG的情况条件下实现RD的高效生物催化,mol底物转化率达到90%以上,RD产量约1050 mg/L。 %U https://www.spkx.net.cn/CN/abstract/article_43725.shtml