%0 Journal Article %A 刘乐 %A 丁一 %A 王紫玄 %A 房耀维 %A 王淑军 %A 吕明生 %T 海洋氧化节杆菌KQ11右旋糖酐酶催化位点关键氨基酸研究 %D 2019 %R %J 食品科学 %P 0-0 %V %N %X 摘 要:通过同源比对,对来自海洋氧化节杆菌(Arthrobacter oxydans KQ11)的右旋糖酐酶(AoDex)催化域及关键氨基酸进行预测,运用定点突变将AoDex催化域418-QTDGIELYKGSTMKNTFFNANDD-440中的5个氨基酸突变为甘氨酸,获得5种突变型右旋糖酐酶原核表达载体:pColdⅢ-KQN-Q418G、pColdⅢ-KQN-D420G、pColdⅢ-KQN-E423G、pColdⅢ-KQN-D439G、pColdⅢ-KQN-D440G。(表达产物记为:Q418GDex、D420GDex、E423GDex、D439Dex、D440GDex)。经过发酵表达,Q418GDex、D420GDex、E423GDex、D439Dex几乎没有酶活。D440GDex酶活与AoDex一致;所不同的是,D440GDex在25℃到40℃时的酶活提高了2-3倍,最适pH也从AoDex的5.5变为6.5。数据表明,Q418、D420、E423、D439四个氨基酸残基是AoDex催化域中的关键氨基酸。D440突变为甘氨酸对该酶的性质有较大影响,也表明其不是催化域中的广义碱。本研究表明AoDex的催化机制与糖苷酶49家族是一致的,为AoDex的功能改造奠定了基础。 %U https://www.spkx.net.cn/CN/abstract/article_45434.shtml