虫草多糖苹果果醋的保健功能评价

贲松彬1,张 月2,孙冬梅1,谷海峰1,孟雪莲2,陈长兰2,*

(1.辽宁大学生命科学院,辽宁 沈阳 110036;2.辽宁大学药学院,辽宁 沈阳 110036)

 

摘 要:目的:虫草多糖与果醋均具有对人体有益的功效,该实验将两者结合,并通过小鼠连续灌胃体内实验,考察虫草多糖果醋抗疲劳、增加免疫力、降血脂和降血糖等方面的功效。方法:首先从蛹虫草子实体中提取虫草多糖。然后以苹果为原料经过酒精发酵和醋酸发酵制备苹果果醋原液,经调配制备苹果果醋。按实验设计添加不同剂量的虫草多糖制备虫草多糖果醋。对成年小鼠进行不同剂量的虫草多糖果醋灌胃后,通过小鼠的负重游泳时间、肝糖原含量和游泳后血乳酸含量测定等判定虫草多糖果醋提高小鼠抗疲劳能力的效果。通过抑制迟发型变态反应和增强碳廓清能力测定判定虫草多糖果醋提高小鼠免疫能力的效果。对成年小鼠在饲喂高脂饲料的同时进行不同剂量的虫草多糖果醋灌胃后,通过血清总胆固醇和甘油三酯水平测定判定虫草多糖果醋对高血脂的预防效果。对成年小鼠高血糖模型进行不同剂量的虫草多糖果醋灌胃后,通过测定血糖值判定虫草多糖果醋的降血糖效果。结果:通过抗疲劳实验研究发现,虫草多糖果醋组与空白对照组相比小鼠的负重游泳时间显著提高,肝糖原含量显著升高,游泳后血乳酸含量显著降低。通过增强免疫力实验研究发现,虫草多糖果醋组与空白对照组相比,耳肿胀度明显下降,廓清指数和吞噬指数显著提高。通过辅助降血脂实验发现,虫草多糖果醋组与饲喂高脂饲料的空白对照组相比,血清总胆固醇和甘油三酯水平显著降低,小鼠体质量显著低于空白对照。通过辅助降血糖实验发现,虫草多糖果醋组与空白对照组相比,血糖水平显著降低。并且各种生物活性实验结果均与虫草多糖果醋中虫草多糖的剂量成正比。虫草多糖果醋的功效要好于虫草多糖和果醋单独使用的功效。结论:虫草多糖果醋具有缓解体力疲劳、增强免疫力、辅助降血脂和辅助降血糖的保健功能。

关键词:虫草多糖果醋;辅助降血糖;辅助降血脂;抗疲劳;增强免疫力

 

Healthcare Functions of Apple Cider Vinegar Fortified with Cordyceps militaris Polysaccharides

 

BEN Song-bin1, ZHANG Yue2, SUN Dong-mei1, GU Hai-feng1, MENG Xue-lian2, CHEN Chang-lan2,*

(1. School of Life Science, Liaoning University, Shenyang 110036, China;

2. School of Pharmaceutical Science, Liaoning University, Shenyang 110036, China)

 

Abstract: Objectives: To evaluate the anti-fatigue, immune-enhancing, auxiliary lipid-lowering and auxiliary hypoglycemic effects of apple cider vinegar fortified with Cordyceps militaris polysaccharides orally administered to mice. Methods: Cordyceps militaris polysaccharides were extracted from the fruit bodies of Cordyceps militaris. Apple cider vinegar was prepared by alcoholic and subsequent acetous fermentation of apple juice and formulated into a functional beverage with the addition of the fungal polysaccharides. After adult mice were orally administered with different dosages of the apple vinegar beverage, weight-loaded forced swimming time, liver glycogen content and blood lactate content after swimming were determined to evaluate the anti-fatigue effect of the beverage. Suppression of delayed type hypersensitivity and carbon clearance enhancement were conducted to determine the immune-enhancing function. After adult mice were fed with a high-fat diet and simultaneously administered orally with different dosages of the fortified beverage, serum total cholesterol (TC) and triglyceride (TG) concentrations were detected to evaluate the auxiliary lipid-lowering effect in mice. After adult hyperglycemic mice were orally administered with different dosages of the beverage, blood glucose concentration was detected to evaluate the auxiliary hypoglycemic effect in vivo. Results: In anti-fatigue tests, the weight-loaded forced swimming time of mice was significantly increased, while liver glycogen level was significantly elevated and the area under the curve of blood lactate was significantly reduced in the treatment group when compared with the blank group. The swelling degree of ears was significantly reduced, and the clearance index and the phagocytosis index were significantly increased, as indicated by the immune-enhancing effects of the beverage. Its auxiliary lipid-lowering effect indicated serum TC and TG levels were significantly reduced and the body weight of mice was lower than that of the control. As for its auxiliary hypoglycemic activity, blood glucose concentration was significantly decreased. In addition, all these biological activities were dosage dependent. The efficacy of the fortified beverage was better than that of Cordyceps militaris polysaccharides and apple cider vinegar separately. Conclusion: Apple cider vinegar fortified with Cordyceps militaris polysaccharides has anti-fatigue, immune-enhancing, auxiliary lipid-lowering and auxiliary hypoglycemic effects in mice.

Key words: apple cider vinegar fortified with Cordyceps militaris polysaccharides; auxiliary hypoglycemic activity; auxiliary lipid-lowering activity; anti-fatigue effect; immune-enhancing function

中图分类号:TS275.4 文献标志码:A 文章编号:1002-6630(2014)07-0232-06

doi:10.7506/spkx1002-6630-201407046

虫草多糖具有复杂的高级结构[1],特殊的高级结构使其具有抗肿瘤、抗炎、降糖、提高脏器指数、抗放射性、抗肝纤维化等作用[2-5],尤其具有提高免疫功能等活性[6],并且虫草多糖具有良好的pH值广泛性[7]。而果醋在发酵过程中能产生氨基酸、尼克酸、维生素、矿物质、黄铜成分和三萜类物质等[8],具有减轻疲劳作用、防止动脉硬化、降低血压、肠胃保健、美容等作用[9-10],醋酸处理可明显降低细胞中双糖酶(蔗糖酶、麦芽糖酶、海藻糖酶和乳糖酶)和血管紧张肽Ⅰ转化酶的活性,而其他水解酶的活性不受影响,因此醋酸可以部分起到降低血糖的作用[11],可用于控制餐后的高血糖[12-13],为此本实验将其两者结合,通过体内实验,研究虫草多糖果醋的抗疲劳、增强免疫力、辅助降血脂和辅助降血糖功效。

1 材料与方法

1.1 材料、试剂与仪器

蛹虫草子实体 沈阳市北虫草培育基地;安琪酿酒高活性干酵母 安琪酵母股份有限公司;醋酸菌种 辽宁大学轻产学院李拖平教授友情馈赠;辽宁省产红富士苹果;土豆 市售;葡萄糖、蛋白胨、酵母粉、酵母膏、琼脂均为食品级 北京奥博星生物技术责任有限公司。

昆明小鼠,清洁级, 鼠龄6 辽宁中医药大学。

磷酸二氢钾、七水硫酸镁、氢氧化钠、邻苯二甲酸氢钾、酚酞、氯化钙 国药集团化学试剂有限公司;无水乙醇、95%乙醇 禹王集团;三氯乙酸、葡萄糖、浓硫酸、蒽酮、硫酸铜、钨酸钠、氟化钠 沈阳经济技术开发区试剂厂;对羟基联苯、乳酸锂、氯化钠、碳酸钠、印度墨汁、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、叠氮钠 天津市博迪化工有限公司;盐酸、过氧化物酶、4-氨基安替比林、葡萄糖氧化酶、苯甲酸、二甲苯 山东禹王实业有限公司化学分公司;如无特殊说明,试剂均为分析纯。

SW-GJ-2FD 超净工作台 苏州安泰空气技术有限公司;DNP-9082电热恒温培养箱 上海精宏试验仪器有限公司;SHZ-D(Ⅲ)循环水式真空泵 巩义市英峪予华仪器厂;PB-10酸度计 北京赛多利斯仪器系统有限公司;HZS-H水浴振荡器 哈尔滨东联电子开发有限公司;RE5299旋转蒸发仪 上海亚荣仪器有限公司;WYT糖度计 成都泰华光学有限公司;DSX-280B高压灭菌锅 开普电子仪表发展有限公司;UV2550紫外-可见分光光度计 日本岛津公司。

1.2 实验用虫草多糖果醋的制备步骤

1.2.1 虫草子实体提取液的制备

称取干燥的蛹虫草子实体50 g,以30%乙醇按料液比130在闪式提取器中进行提取[14],闪式提取功率为75W,提取时间2 min。闪式提取后经真空抽滤得到滤液后,将滤液浓缩至50 mL,此时每毫升液体中含蛹虫草子实体约为1 g,备用。

1.2.2 虫草粗多糖的制备

参考刘红锦等[15]的方法进行多糖的提取制备,60 ℃烘干后备用。

1.2.3 虫草多糖果醋的制备

将0.02 g酿酒酵母干粉用5 g/100 mL葡萄糖溶解后,在用前于37 ℃恒温箱中活化30 min。苹果洗净去皮、去核后按照苹果与蒸馏水质量比14榨汁,过滤后调整糖度为10°Bx,121 ℃高压湿热灭菌20 min。稍凉后接入12%体积活化的酵母溶液,于24 ℃摇床中进行酒精发酵5d,待酒精发酵结束后用75 ℃巴氏灭活酵母30 min。晾凉后接入5%体积发酵培养3d的醋酸菌溶液,于32 ℃恒温箱中进行醋酸发酵3d,待醋酸发酵结束后75 ℃巴氏灭活醋酸菌30 min,得到果醋原液,备用。

1.2.4 实验用虫草多糖果醋的制备

将果醋原液、苹果汁、绵白糖、柠檬酸、虫草子实体提取液(质量浓度为1g/mL,在此作为果醋防腐剂加入,详见讨论部分)按3 mL、55 mL、2g、0.2g、0.4mL,补足蒸馏水至体积为100 mL,调配成苹果醋,根据给药剂量在果醋中加入虫草多糖配制成虫草多糖果醋。

1.3 虫草多糖果醋的各种生物活性测定

1.3.1 缓解体力疲劳

1.3.1.1 实验动物分组

成年小鼠,雌雄各半,18~22 g,每组10只,适应性生长1周后根据实验计量给药。分别通过负重游泳时间、肝糖原含量、血乳酸含量变化判断虫草多糖果醋缓解体力疲劳的效果。

1.3.1.2 给药方法及计量

实验设虫草多糖高、中、低3个剂量组(2、1、0.5g/(kg•d)),采用虫草多糖溶于果醋配制,灌胃剂量0.2 mL;另设空白对照组(灌胃蒸馏水)、虫草多糖对照组(0.5 g/(kg•d),采用虫草多糖溶于蒸馏水配制)和果醋对照组(灌胃果醋),经口灌胃,灌胃量为0.2 mL/(只•d),连续饲喂30 d。

1.3.1.3 负重游泳时间实验[16]

末次给予受试样品30 min后,将5%体质量的铅皮绑于小鼠尾根部,置于25 ℃左右的水中游泳,记录游泳至死亡的时间。

1.3.1.4 肝糖原含量测定[16]

末次给样后30 min,处死小鼠,取肝脏经生理盐水漂洗后吸干水分,精确称取100 mg,加入5%三氯乙酸8 mL,匀浆1 min后再将匀浆液置于10 mL离心管中,以3000r/min离心15 min。取上清液1 mL于10 mL离心管中,加入95%乙醇4 mL,振荡至两种液体间不存在界面,室温下静置过夜提取糖原。待沉淀完全后以3000r/min
离心15 min,弃掉上清液,用2 mL蒸馏水使糖原充分溶解。以2 mL蒸馏水为空白,以0.5 mL 1mg/mL葡萄糖标准溶液和1.5mL蒸馏水混匀后作为标准管,用蒽酮法于620nm波长处测吸光度,按式(1)计算糖原含量。

579589.jpg (1)

式中:As为样品管吸光度;A0为标准管吸光度;0.5为0.5 mg,即0.5mL葡萄糖标准溶液中的葡萄糖含量;V提取液
为8 mL;m肝组织为0.1 g;100为100 g肝组织;0.9为将葡萄糖换算成糖原的转换系数。

1.3.1.5 血乳酸含量测定[16]

末次给样30 min后采血,于不负重的情况下在水温为30 ℃左右的水中游泳10 min后立即采血,休息20 min后再第3次采血。准确吸取全血20μL加入事先装入0.48 mL 1% 氟化钠溶液的5 mL试管底部,再加入1.5 mL蛋白沉淀剂(10%钨酸钠、0.33mol/L硫酸、蒸馏水按体积比1128混合而成),充分振荡混匀,于3000r/min离心10 min,取上清液,进行血乳酸含量测定,操作如下。

分别设测定管、标准管和空白管;在测定管中加入0.5mL上清液,标准管和空白管中分别加入同体积的乳酸标准液和沉淀剂-氟化钠混合液(蛋白沉淀剂与氟化钠溶液按体积比31混合而成);然后在各管中分别加入0.1mL 4%硫酸铜溶液和3mL浓硫酸;将各管充分混匀后沸水浴5min;取出后在冰水浴中冷却10min;再在各管中加入0.1mL 1.5%对羟基联苯0.1mL;摇匀后置30℃水浴30min,每10 min振摇1次。取出后沸水浴90s,取出冷却至室温,在波长为560nm处测吸光度,空白管调零。按公式(2)、(3)、(4)计算血乳酸含量、血乳酸曲线下面积及血乳酸恢复速率。

579608.jpg (2)

579634.jpg (3)

579650.jpg (4)

1.3.2 增强免疫力实验

1.3.2.1 增强免疫力实验实验动物分组

小鼠18~22 g,雄性,每组10只,适应性生长1周。分别通过抑制迟发型变态反应、增强碳廓清能力判断虫草多糖果醋增强免疫力的效果。

1.3.2.2 增强免疫力实验给药方法及剂量

同1.3.1.2节。

1.3.2.3 抑制迟发型变态反应

末次给样30 min后,将20μL二甲苯涂于小鼠右耳两面,30 min后脱颈椎处死,剪下双耳整个耳廓后,用6mm打孔器将双耳的相同部位打孔称质量,以两片质量差作为肿胀程度的指标,以抑肿率作为抗炎强度的指标,按照公式(5)、(6)分别计算肿胀度和抑肿率[17]。

耳肿胀度=致敏耳质量-未致敏耳质量 (5)

579666.jpg (6)

1.3.2.4 增强碳廓清能力

将稀释3倍的印度墨汁按小鼠100 mL/kg(以体质量计)从尾静脉注射,立即记时,2、10 min后分别眼眶取血20μL,立即加到2mL 0.1% Na2CO3溶液中,于721分光光度计在波长600nm处测光密度,以Na2CO3溶液作空白对照。将小鼠处死,取肝脏和脾脏,吸干血污分别称质量。以吞噬指数表示小鼠碳廓清能力。按公式(7)、(8)分别计算廓清指数(K)和吞噬指数(α)[18]。

589699.jpg (7)

579718.jpg (8)

式中:OD1为墨汁注入后2 min的光密度;OD2为墨汁注入后10 min的光密度;t1为 2 min;t2 为10 min。

1.3.3 辅助降血脂实验

1.3.3.1 降血脂实验动物分组

小鼠24~28 g,雌雄各半,适应性生长1周后根据TC水平随机分组,每组10只。通过测定血清总胆固醇(total cholesterol,TC)、甘油三酯(triglyceride,TG)水平判断降血脂的效果。

1.3.3.2 降血脂实验给药方法及剂量

高脂饲料为北京华阜康生物科技有限公司的KK鼠粮。粗脂肪含量16.15%。在给予高脂饲料的同时给予不同剂量的受试样品,其余实验方法和剂量同1.3.1.2节。

1.3.3.3 降血脂实验测定内容及方法

本实验为预防性给药,在给予高脂饲料的同时给予不同剂量的受试样品,于实验结束禁食16h,根据总胆固醇测定试剂盒及甘油三酯测定试剂盒中说明书所述,分别测血清TC、TG水平。

1.3.4 辅助降血糖实验

1.3.4.1 降血脂实验动物分组

小鼠24~28 g,雄性,适应性生长1周后禁食24h尾静脉注射链脲霉素造模,5d后禁食3~5h,测血糖值,将血糖值10~25mmol/L的模型小鼠随机分组,每组10只给药。通过测定血糖值和计算血糖下降水平判断降血糖的效果。

1.3.4.2 降血脂实验给药方法及剂量

给药方法和剂量同1.3.1.2节。空白组为模型空白对照组,为证明虫草多糖果醋不会使正常小鼠血糖值过低,增设了正常小鼠空白对照组和正常小鼠高剂量处理组。

1.3.4.3 降血脂实验测定内容及方法[19]

给药前后分别测定模型小鼠空腹3~5h的血糖值,计算血糖值和血糖下降百分率。

1.4 数据统计

使用SPSS 17.0软件,均数比较用单因素方差分析。实验数据用

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578417.jpg

±s表示。以P<0.05为差异显著,以
P<0.01为差异极显著。

2 结果与分析

2.1 缓解体力疲劳效果

2.1.1 负重游泳时间

表 1 虫草多糖果醋对小鼠抗疲劳的影响(

x

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±sn=10)

Table 1 Anti-fatigue effect of apple cider vinegar fortified with Cordyceps militaris polysaccharides in mice (

x

578479.jpg

±s, n = 10)

组别

游泳时间/s

肝糖原含量/(mg/100g)

血乳酸曲

线下面积

血乳酸恢复速率/(mg/(L•min))

空白对照组

275.2±23.948

183.4±12.1

69.909±12.456

0.0099±0.0036

果醋对照组

368±27.964**

316.3±19.5**

65.546±5.566

0.0103±0.0058*

多糖对照组

452.8±35.269**

344.9±29.7**

64.406±10.381

0.0120±0.0064**

多糖果醋低剂量组

679.3±47.157**

751.8±31.2**

61.092±11.373*

0.0131±0.0053

多糖果醋中剂量组

1372.3±122.823**

899.5±59.2**

51.073±6.449**

0.0152±0.0046

多糖果醋高剂量组

1833.3±53.622**

997.9±74.1**

38.304±7.654**

0.0165±0.0077**

 

注:*.与空白对照组相比有显著性差异(P<0.05);**.与空白对照组比较有极显著性差异(P<0.01)。表3~6同。

 

如表1所示,各虫草多糖果醋剂量组的游泳时间均长于空白对照组,且差异极显著(P<0.01)。随果醋中虫草多糖剂量的加大游泳时间显著增加,此外虫草多糖果醋剂量组的游泳时间都长于果醋和多糖对照组。

2.1.2 肝糖原含量

如表1所示,各虫草多糖果醋剂量组肝糖原含量明显高于空白对照组,且差异极显著(P<0.01)。

2.1.3 血乳酸含量变化

如表1所示,任一虫草多糖果醋剂量组的血乳酸曲线下面积均小于空白对照组,且各剂量组与空白对照组差异显著(P<0.05),而恢复速率也高于对照组。

综上所述,小鼠长期服用虫草多糖果醋负重游泳时间显著延长,肝糖原含量显著升高,游泳后血乳酸含量显著下降,因此虫草多糖果醋具有缓解体力疲劳的功能。

2.2 增强免疫力效果

2.2.1 抑制迟发型变态反应

表 2 虫草多糖果醋对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响(

x

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±sn=10)

Table 2 Effect of apple cider vinegar fortified with Cordyceps militaris polysaccharides on xylene-induced ear swelling of mice (

x

578539.jpg

±s, n = 10)

组别

肿胀度/g

抑制率/%

空白对照组

0.014±0.001

 

果醋对照组

0.012±0.001*

10.37

多糖对照组

0.011±0.001*

16.296

多糖果醋低剂量组

0.010±0.010*

25.185

多糖果醋中剂量组

0.009±0.001*

33.333

多糖果醋高剂量组

0.007±0.001*

45.926

 

 

如表2所示,虫草多糖果醋各剂量组和果醋、多糖对照组匀对二甲苯致小鼠耳肿胀有抑制作用,随剂量的加大,抑制作用越明显,多糖果醋高剂量组的抑制率可达45.926%,且低剂量组也远高于多糖对照组和果醋对照组。

2.2.2 增强碳廓清能力

如表3所示,各虫草多糖果醋剂量组和果醋、多糖对照组的廓清指数和吞噬指数均高于空白对照组,且多糖果醋剂量组的廓清指数和吞噬指数均高于单纯果醋和单纯多糖处理的对照组,多糖果醋剂量组的廓清指数和吞噬指数与空白对照相比均达到差异极显著水平,可判定虫草多糖果醋具有增强小鼠碳廓清的能力。综上所述,虫草多糖果醋饲喂小鼠的迟发型变态反应和碳廓清两项指标均为阳性,因此虫草多糖果醋具有增强免疫力功效。

表 3 虫草多糖果醋对小鼠碳廓清能力的影响(

x

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±sn=10)

Table 3 Effect of apple cider vinegar fortified with Cordyceps militaris polysaccharides on carbon clearance capacity of mice (

x

578602.jpg

±s, n = 10)

组别

廓清指数

吞噬指数

空白对照组

0.037±0.002

6.753±0.263

果醋对照组

0.045±0.004

8.382±0.936**

多糖对照组

0.068±0.002**

8.959±0.376**

多糖果醋低剂量组

0.1055±0.011**

9.345±0.136**

多糖果醋中剂量组

0.177±0.009**

9.879±0.696*

多糖果醋高剂量组

0.263±0.016**

10.666±1.387**

 

 

2.3 辅助降血脂效果

表 4 虫草多糖果醋对小鼠血清TC和TG含量影响(

x

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±sn=10)

Table 4 Effect of apple cider vinegar fortified with Cordyceps militaris polysaccharides on TC and TG levels of mice (

x

578669.jpg

±s, n = 10)

组别

TC含量/(mmol/L)

TG含量/(mmol/L)

空白对照组

4.103±0.348

1.485±0.652

果醋对照组

4.004±0.363

1.384±0.369

多糖对照组

3.412±0.441**

1.354±0.259

多糖果醋低剂量组

3.379±0.387**

1.317±0.610

多糖果醋中剂量组

3.211±0.688**

1.246±0.201

多糖果醋高剂量组

3.004±0.591**

0.903±0.216**

 

 

如表4所示,虫草多糖果醋各剂量组的TC、TG水平与空白对照组相比均有不同程度的降低,且差异极具显著性。此外,果醋对照组的TC、TG水平也比空白对照组稍低,多糖对照组比低剂量组稍高,可见果醋也具有降血脂功效,并且果醋与虫草多糖结合后功能有明显提高。综上,TC、TG两项指标阳性,可判定虫草多糖果醋具有辅助降血脂功能。

表 5 虫草多糖果醋对小鼠体质量的影响(

x

578725.jpg

±sn=10)

Table 5 Effect of apple cider vinegar fortified with Cordyceps militaris polysaccharides on body weight of mice (

x

578754.jpg

±s, n = 10)

组别

体质量/g

空白对照组

41.17±2.56

果醋对照组

33.62±1.37**

多糖对照组

32.74±0.95**

多糖果醋低剂量组

31.11±2.31**

多糖果醋中剂量组

29.49±1.63**

多糖果醋高剂量组

28.01±1.41**

 

 

如表5所示,从小鼠的体质量变化也可看出虫草多糖果醋可通过降血脂达到明显的减肥效果。与单纯饲喂高脂饲料的空白对照相比,低、中、高剂量组虫草多糖果醋均具有显著的控制体质量的效果,且表现出剂量依赖作用。而单纯饲喂虫草多糖和果醋的多糖对照组和果醋对照组也有一定的减肥效果,但作用低于低、中、高剂量组虫草多糖果醋处理。

2.4 辅助降血糖效果

表 6 虫草多糖果醋对小鼠血糖值的影响(

x

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±sn=10)

Table 6 Effect of apple cider vinegar fortified with Cordyceps militaris polysaccharides on blood glucose level of mice (

x

578843.jpg

±s, n = 10)

组别

血糖值/(mmol/L)

血糖下降百分率/%

模型空白对照组

12.133±1.637

100

模型果醋对照组

12.112±1.390

99.83

模型多糖对照组

10.902±0.837*

89.85

模型多糖果醋低剂量组

10.723±0.896**

88.38

模型多糖果醋中剂量组

10.176±1.214**

83.87

模型多糖果醋高剂量组

9.311±1.306**

76.74

正常小鼠空白对照组

5.743±0.631

100

正常小鼠多糖果醋高剂量组

5.930±0.744

103.26

 

注:*.与模型空白对照组相比有显著性差异(P<0.05);**.与模型空白对照组比较有极显著性差异(P<0.01)。

 

由表6可见,对高血糖模型小鼠饲喂不同剂量虫草多糖果醋的各虫草多糖果醋剂量组的血糖值均低于高血糖模型空白对照组,且差异具有显著性。而对高血糖模型小鼠饲喂果醋的果醋对照组与模型空白对照组血糖值相仿,说明果醋没有明显的降血糖功效。饲喂虫草多糖的多糖对照组具有明显的降血糖作用,但虫草多糖与果醋相结合比单纯使用虫草多糖降血糖效果明显增强。此外血糖的下降程度也随果醋中虫草多糖剂量的加大而有所升高。可判定为虫草多糖果醋具有辅助降血糖功效。

对正常小鼠饲喂高剂量的虫草多糖果醋,与正常小鼠空白对照组相比,血糖值有轻微升高而不是下降,说明正常小鼠饲喂高剂量的虫草多糖果醋不会造成血糖过低等副作用。

3 讨 论

本实验将虫草多糖与果醋结合,用小鼠验证其生物活性,得出该虫草多糖果醋具有缓解体力疲劳、增强免疫力、辅助降血脂和辅助降血糖功能。本实验得出的游泳时间虽比陆培基等[20]所作醋胶囊稍低,但与对照组的差值却高于醋胶囊;而辅助降血脂功能却较李红蕊等[21]所作红枣醋和枳椇醋稍高。此外从各组数据中可以推测出,当虫草多糖与果醋结合时,加大了多糖的抗疲劳、增强免疫力和降血脂的活性,且随着多糖剂量的增加活性也随之增强。说明虫草多糖果醋具有发展为功能饮料的巨大潜力。

本实验曾尝试了在果醋的发酵培养基中添加蛹虫草子实体的方法,但由于所得果醋具有难以去除的腥味而放弃。本实验还尝试了在果醋发酵过程中添加虫草多糖的实验,但由于虫草多糖在发酵过程中变化不大,而先添加实验虫草多糖的损失较大,经济上得不偿失而放弃。

鉴于在实验过程中发现虫草子实体提取液具防腐作用,在所制苹果醋中均加入同等比例的少量虫草子实体提取液,用做天然防腐剂。由于在不添加虫草多糖的果醋对照中和添加虫草多糖的果醋处理中所加入提取液的量相同,通过对比可以排除提取液中成分对小鼠的影响,实验结果能客观地反映虫草多糖的实际生物学效果。

参考文献:

[1] 吴凤瑶. 蛹虫草多糖的分子结构及生物学活性研究[D]. 镇江: 江苏科技大学, 2011.

[2] 倪贺, 李海航, 黄文芳, 等. 北虫草及其活性成分的研究与开发[J]. 科技导报, 2007, 25(15): 75-79.

[3] 马雄, 邱德凯, 徐军, 等. 冬虫夏草多糖脂质体抗纤维化的实验研究[J]. 中国中医基础医学杂志, 1999, 5(9): 28-30.

[4] 季晖, 徐红湖, 李耐三. 人工虫草菌丝多糖的分离提取及降血糖作用研究[J]. 中国药科大学学报, 1993, 24(1): 39-42.

[5] 俞丽露, 张冰冰, 阮叶萍, 等. 虫草多糖不同组分的免疫活性研究[J]. 浙江中医药大学学报, 2004, 28(1): 49-50.

[6] 车振明. 虫草多糖生物活性研究进展及其应用前景[J]. 食用菌, 2004(6): 3-5.

[7] LI X, XU L. Studies on expolysaccharide fermentation by Cordyceps militaris and on its physical and chemical properties and antioxidation[J]. The Journal of Microbiology, 1997, 17(3): 13-17.

[8] 王同阳. 果醋的功能性[J]. 中国调味品, 2006(6): 10-12.

[9] 李幼筠. 论食醋的功能性与新型功能性食醋的开发[J]. 中国酿造, 2004, 23(1): 5-8.

[10] 邢志利. 果醋的保健功效及加工工艺研究进展[J]. 中国调味品, 2005(4): 42-44.

[11] OGAWA N, SATSU H, WATANABE H, et al. Acetic acid suppresses the increase in disaccharidase activity that occurs during culture of caco-2 cells[J]. Journal of Nutrition, 2000, 130: 507-513.

[12] EBIHARA K, NAKAJIMA A. Effect of acetic acid and vinegar on blood glucose and insulin responses to orally administered sucrose and starch[J]. Agricultural and Biological Chemistry, 1988, 52(5): 1311-1312.

[13] NAKAJIMA A, EBIHARA K. Effect of prolonged vinegar feeding on postprandial blood glucose response in rats[J]. Journal of Japanese Society of Nutrition and Food Science, 1998, 41(6): 487-489.

[14] 刘玉峰, 王程程, 刘宇, 等. 正交试验法优化赤芍总苷闪式提取工艺[J]. 中国实验方剂学杂志, 2012, 18(2): 12-15.

[15] 刘红锦, 蒋宁, 李建军, 等. 蛹虫草多糖提取及纯化工艺研究[J]. 江西农业学报, 2007, 19(12): 80-82.

[16] 肖志勇. 薏苡仁多糖对小鼠缓解体力疲劳作用研究[J]. 中国医药指南, 2010, 3(8): 38-40.

[17] 陈凯, 窦月, 孟凡刚, 等. 板蓝根抗炎作用有效部位初步筛选[J]. 中国实验方剂学杂志, 2012, 18(6): 200-203.

[18] 李珂娴, 沈先荣, 何颖, 等. 方格星虫多糖对小鼠免疫功能的影响[J]. 中国海洋药物杂志, 2012, 31(1): 46-49.

[19] 保健食品检验与评价技术规范[S]. 北京: 中华人民共和国卫生部, 2003.

[20] 陆培基, 周永治. 恒顺醋胶囊抗疲劳功能研制报告[J]. 中国调味品, 2002, 27(10): 8-13.

[21] 李红蕊, 李志西, 赵晓野, 等. 红枣醋和枳椇醋减肥降血脂作用研究[J]. 西北农业学报, 2009, 18(2): 257-260.

 

收稿日期:2013-04-17

基金项目:辽宁省教育厅一般项目(L2013010);国家自然科学基金面上项目(31371085);

辽宁省天然产物制药工程技术研究中心资助项目

作者简介:贲松彬(1972—),女,副教授,博士,研究方向为生物化学。E-mail:bensongbin007@163.com

*通信作者:陈长兰(1963—),男,教授,博士,研究方向为遗传学与生物制药。E-mail:chenchanglanbio@ aliyun.com