国产和进口奶源婴儿配方奶营养效应的比较

许崇辉,潘 芳,易 蓉,温巧玲,刘慧智,程树军,李华燕

(广东检验检疫技术中心,广东 广州 510623)

 

摘 要:目的:以3 个国产奶源婴儿配方奶粉和3 个进口奶源婴儿配方奶粉分别喂养实验动物,研究比较国产奶源和进口奶源在实验动物上引起的营养生物效应的差异。方法:采用刚断乳SD大鼠,在连续30 d左右的喂养实验后,检测实验动物的安全性和营养学指标。结果:6 种受试品牌奶粉在动物生长发育过程、体质量和体质量增长趋势、食物利用率、血常规指标及血液生化指标都没有明显的差别。结论:受试的3个国产奶源婴儿配方奶粉与3 个进口奶源婴儿配方奶粉在实验动物上引起的营养生物效应是相同的,没有优劣之分。

关键词:奶粉;大鼠喂养实验;营养效应;食物利用率

 

Comparative Nutritional Evaluation of Infant Formula Milk Powders from Chinese and Foreign Milk Sources

 

XU Chong-hui, PAN Fang, YI Rong, WEN Qiao-ling, LIU Hui-zhi, CHENG Shu-jun, LI Hua-yan

(Guangdong Inspection and Quarantine Technology Center, Guangzhou 510623, China)

 

Abstract: Objective: A comparative evaluation of the nutritional and biological potential of six samples of commercial infant formula milk powder (three from Chinese milk source and the other three from foreign milk source) was carried out by animal feeding tests. Method: After 30-day feeding with these samples, freshly weaned SD rats were subjected to safety and nutritional evaluation. Results: Infant formula milk powder from different milk sources did not result in a significant difference in the growth and development performance, body weight and weight gain, food utilization rate, routine blood parameters or blood biochemical parameters in animals. Conclusion: The nutritional and biological potential of the six samples of infant formula milk powder from two different milk sources are identical.

Key words: milk powder; rat feeding test; nutrition effect; food utilization rate

中图分类号:R114 文献标志码:A 文章编号:1002-6630(2014)09-0269-05

doi:10.7506/spkx1002-6630-201409053

自三聚氰胺事件以来,国外品牌奶粉和奶源占据国内市场的份额不断扩大。据奶业行业资料分析[1-2],2011年婴幼儿奶粉进口量占据中国婴幼儿奶粉总销量的1/5,2012—2015年间,进口量平均增长速度将保持15%左右。而在一、二线城市,国外婴儿品牌奶粉和国外奶源占据国内市场80%的份额。

根据GB 10767—2010《较大婴儿和幼儿配方食品》的婴儿配方奶粉要求[3],目前国内对奶粉质量的检验指标主要是理化和微生物检验指标,属于品质、原因方面的检验,且每一奶粉或配方奶粉有几十种成分或指标,难于一一比较说明优劣。本实验通过验动物喂养实验方法,研究比较国产和进口奶源奶粉进入实验动物体内,经过吸收、代谢和合成等过程引起的生物效应。通过比较体质量及其增长趋势、食物利用率、血常规和血清生化指标、营养生理性指标的差异,来反映国产奶源和进口奶源的质量和营养效果。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

1.1.1 受试物

在市场上购买6 个有代表性、适用于12 个月以上婴儿的配方奶粉(表1)。6 个样本的营养成分、含量和比例均达到GB 10767—2010的要求。

表 1 6 个样本奶粉的基本信息

Table 1 Information about 6 milk powder samples

奶粉简称

奶源

主要营养成分

能量/(kJ/100g)

蛋白质含量/(g/100g)

脂肪/(g/100g)

碳水化合物/(g/100g)

2-飞

国内

1978

18.5

20.0

53.7

3-贝健

国内(黑龙江)

2025

16.5

21.6

56.2

5-冠

国内

1977

17.5

20.5

53.3

1-蒙

进口

1986

16.2

21.3

52.5

4-贝爱

进口

2010

16.5

21.0

56.2

6-慧

进口

2000

18.5

21.0

51.5

 

注:3-贝健和4-贝爱为同一公司品牌、不同奶源的2种奶粉。

 

1.1.2 实验动物、动物饲料和饲养环境

实验动物、饲料和饲料基粉由广东省医学实验动物中心(实验动物生产许可证编号:SCXK(粤)2008-0002)提供。无特定病原体(specefic pathogen free,SPF)级刚断乳SD大鼠,初始体质量在40~60 g,合格证号:NO.0115436,检疫合格。空白对照组的饲料为标准的大鼠颗粒饲料;各实验组的饲料是各样本奶粉与饲料基粉按同一比例混匀加工而成的颗粒饲料,奶粉在加工后占饲料的比例约为21%;饲料和饲料基粉均符合实验动物的营养标准[4]。

实验饲养环境:SPF级动物房,实验动物使用许可证编号:SYXK(粤)2008-0086。实验期间,温度(22±2)℃,相对湿度55%~68%。

1.2 试剂与仪器

丙氨酸氨基转移酶试剂(120202)、总蛋白试剂(120104)、尿素氮试剂(111101)、总胆固醇试剂(120903)、天冬氨酸氨基转移酶试剂(120202)、甘油三酯试剂(120903)、肌酐试剂(120202)、白蛋白试剂(111121)、葡萄糖试剂(120213) 烟台澳斯邦生物工程有限公司。

ECHO LCD全自动血液生化分析仪 意大利爱康公司;MEK-7222K血球计数仪 日本光电公司。

1.3 方法

方法原理[5]:在SPF级动物房,各组实验动物分别喂养给予不同样本奶粉,连续32 d。在喂养期间和实验结束时,检测各组实验动物的生长发育指标、生理性指标和营养性指标,来比较说明各品牌的奶粉安全性和营养性。

实验动物分组:设1 个空白对照组和6 个实验组(2-飞、
3-贝健、5-冠组国产奶源;1-蒙、4-贝爱、6-慧为进口奶源)。每组SD大鼠20 只,雌、雄各10 只,按性别分笼饲养,10 只/笼。

动物喂养方式:在喂养期间,空白对照组动物每天定量饲喂标准的大鼠饲料,自由饮水;实验组动物每天给予奶粉加工饲料和按人体调制方式配制的饮用奶液,除4h饮用奶液外,其余时间自由饮水。实验组动物每天摄入奶粉量约占每天食物总量的30%。

每天喂养过程如下:8:30—9:00观察、检查前一天各组喂养情况;9:00—9:30将已清洗干净的奶瓶在100 ℃水中,煮5 min,冷却后,配制成当天需要的奶液;10:00给各实验组动物饮奶至下午2:00;对照组动物则饮水。各实验组喂奶结束,改饮水,并定量给予各组动物饲料,记录奶残留量,计算实际饮用量。每天按上述程序重复操作,连续32 d。期间,每周称体质量一次;每2~3 d更换一次动物垫料。

喂养最后一天,空腹12 h,称重后大鼠眼球静脉方式采血。用MEK-7222K血球计数仪测定下列血常规指标:血小板、血红蛋白、红细胞、嗜碱粒细胞、嗜酸粒细胞、单核细胞、淋巴细胞、中性粒细胞、单核细胞、淋巴细胞、中性粒细胞、白细胞。用ECHO爱康全自动血液生化分析仪测定下列血清生化学指标:血清总蛋白、白蛋白、谷丙转氨酶、谷草转氨酶、葡萄糖、 肌酐、尿素氮、胆固醇及甘油三酯。

1.4 统计分析方法

各实验组检测指标数据均采用

613644.jpg
613645.jpg

±s表示,用SPSS16.0统计软件进行统计分析。

2 结果与分析

2.1 实验动物生长发育及一般情况观察

在32 d的喂养期间,所有动物整体生长发育过程正常,体质量从实验开始时的50 g左右增长到实验结束时的200 g左右,增长了3 倍多。所有动物皮肤毛发正常;无动物死亡,未见有疾患、消瘦动物;未见行为异常;各组动物饮食饮水正常,均喜好饮调制的奶液;各组动物大小便正常,未见稀烂粪便。

2.2 体质量和体质量增长趋势

由表2可知,在喂养第0天时,各实验组和空白对照组动物的体质量没有明显差别;从喂养第7天开始,各实验组雌、雄性大鼠的体重体质量、期间体质量增长率就开始明显高于各自的空白对照组(P<0.05或
P<0.01),而且这一差别一直维持到第32天喂养结束时。实验组雌、雄性大鼠在同一实验时点,体质量差别很小。在实验结束时,各实验组整体体质量增长和体质量增长趋势相同。

2.3 实验各时点和总的食物利用率

食物利用率是指实验各时点各组动物消耗100g食物和相应期间体质量增加值的比值。由表3可知,在总的喂养期间和喂养的大多数时点,喂养奶粉的各实验组的食物利用率比空白对照组高,且存在统计学显著性差异;而各品牌奶粉的实验组之间,在同一实验时点,各组食物利用率差值很小,无统计学显著性意义。

2.4 血常规指标和血清生化指标

由表4、5可知,实验组与空白对照组,或各实验组之间,各指标差别很小,均在正常值范围。

3 讨 论

SD大鼠是常用于营养学和奶粉营养效应研究的实验动物[6-9],在本实验中,各组大鼠经过32 d喂养,从刚断乳约50 g体质量成长到200 g体质量的性成熟前期,体质量增长了3 倍多(表2),是大鼠生长最快的阶段,符合SD大鼠的生长发育规律[10-11]。在整个实验期间,7 组动物均能正常、健康生长发育,未发现某组或某只实验动物有特别的不同。

体质量是反映机体生长、发育和营养状态最重要的指标,体质量增长的多少,与动物生理健康、营养物质和喂养环境条件有关[12]。在其他条件相同时,体质量增长的多少,主要决定于食物的营养效应[13]。在本实验中,6 个样本组与对照组比较,体质量有持续性的显著意义,说明在相同的实验条件下,在实验动物食物中添加高蛋白、高能量的品牌奶粉,可以使动物体质量比空白组动物增加更多,更快;而在6 个不同品牌的奶粉之间,或国内奶源和进口奶源之间,体质量增长和体质量增长趋势并没有明显的不同(表2)。

由表1可见,本实验的3 个国产奶源婴儿配方奶粉和3 个进口奶源婴儿配方奶粉在各主要营养成分含量,最大相差不足10%;而作为综合性指标的能量,最大相差不足5%。这与刘宁玉等[14]在对国产与进口婴儿配方奶粉的营养成分比较分析时发现,国产与进口在维生素、矿物质和产能营养物质上并无显著性差别很相符。而本实验用来自同一批动物,初中体质量相同、在同一饲养生长环境和饲养方式、给予营养成分相同或“无显著性差别”的样本奶粉,理论上应有相同的生物效应,即体质量及其生长过程相同。本实验各实验组之间体质量和其生长趋势无差别。

食物利用率是反映食物营养效价最常用指标[15-16]。由表3可知,在大多数观察时点,各实验组高于对照组;而各样本组之间,除第7天1-蒙组与4-贝爱组雌、雄性大鼠和第21天2-飞组与1-蒙组雄性外,在大多数观察时点和总实验周期的食物利用率没有显著性差异。这说明在食物中增加奶粉可以提高实验动物标准饲料的食物利用率;添加哪种品牌的奶粉,食物利用率并无不同,即所选各品牌的奶粉的营养生物效应没有不同。

血常规指标及血清生化指标均是反映实验动物健康和营养的常用指标,正常、健康的实验动物的都在一定的范围内[17-19]。实验动物学和毒理学一般认为,2组动物某指标的均值差超过正常范围(>2s),能提示、反映动物处于不正常生理状态和可能病变[20]。在表4、5中,在实验组与空白对照组,或实验组之间,虽个别指标存在统计学意义的差异,但未发现异常的数值,均未超过正常范围,没有生物学意义上差异。说明各实验组动物与空白组均处于正常健康的生理状态。这与相关研究一致[21-22]。

综上分析,本实验的6 个奶粉品牌样本(3 个为国产奶源,3 个为进口奶源)在实验动物生长发育、体质量增长趋势、血常规指标和血清生化指标等营养生物效应相同,未见国产奶源和进口奶源的品牌奶粉在营养效应有明显的差别和优劣之分。

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收稿日期:2013-06-13

作者简介:许崇辉(1965—),男,副主任医师,硕士,研究方向为食品毒理学。E-mail:xch868@126.com

表 2 各组动物每周及总的体质量和体质量增长率(

x

613835.jpg

±sn=10)

Table 2 Weekly and total body weight and weight gain rate of each animal group (

x

613809.jpg

±s, n=10)

性别

来源

组别

第0天

体质量/g

第7天

体质量/g

每周增

长率/%

第14天

体质量/g

每周增

长率/%

第21天

体质量/g

每周增

长率/%

第28天

体质量/g

每周增

长率/%

第32天

体质量/g

每周增

长率/%

雌性

 

对照组

49.4±4.7

70.8±6.7

43.38

96.7±5.3

36.70

123.8±5.2

27.96

159.1±7.7

28.52

168.1±8.0

5.38

国产

奶源

2-飞

48.7±3.5

76.3±5.1

56.76

108.5±5.1**

42.14

146.8±5.1**

35.24

175.6±8.4**

19.69

181.0±7.9**

2.98

3-贝健

50.3±3.8

75.4±3.2

50.03

106.7±7.5*

41.57

141.5±7.5**

32.54

175.4±7.5**

24.01

181.2±9.3**

3.21

5-冠

50.7±5.6

78.0±7.9*

53.67

108.4±7.9**

39.03

142.9±7.3**

31.80

176.5±10.6**

23.51

178.9±11.3*

1.36

进口

奶源

1-蒙

50.2±5.6

78.2±8.2*

55.66

109.6±8.1**

40.15

144.3±6.0**

31.71

179.7±7.9**

24.51

183.0±7.5**

1.79

4-贝爱

49.8±6.0

77.8±9.4

56.15

111.4±9.8**

43.10

147.4±9.6**

32.38

177.4±10.0**

20.37

180.2±11.3**

1.52

6-慧

51.1±5.0

78.5±6.1*

53.62

112.7±4.6**

43.55

145.6±4.0**

29.16

182.2±6.2**

25.16

184.7±5.3**

1.35

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

雄性

 

空白组

49.2±3.3

71.4±4.8

45.23

99.5±7.5

39.42

135.8±11.5

36.40

174.2±14.3

28.31

192.7±13.8

9.61

国产

奶源

2-飞

49.4±3.2

78.0±5.3*

58.04

113.4±8.1**

45.34

152.8±12.8*

34.74

204.6±14.5**

33.86

226.9±15.7**

9.86

3-贝健

48.9±3.3

76.6±3.7**

56.75

110.9±6.5**

44.79

153.3±11.0**

38.20

202.1±10.5**

31.80

231.1±14.7**

12.55

5-冠

50.7±3.2

78.2±5.3*

54.33

115.2±10.0**

47.30

157.6±12.2**

36.83

205.8±14.4**

30.58

235.7±16.7**

12.66

进口

奶源

1-蒙

50.3±4.0

77.9±4.4*

54.81

112.2±4.9**

44.02

157.6±6.4**

40.49

206.4±9.4**

30.93

231.6±7.8**

10.89

4-贝爱

50.0±3.4

78.0±5.3*

55.99

115.8±5.7**

48.33

159.2±10.4**

37.53

209.0±11.5**

31.29

236.0±15.0**

11.41

6-慧

49.7±3.7

77.9±6.5**

56.67

115.5±8.5**

48.41

159.0±15.0**

37.62

206.9±20.5**

30.09

233.9±21.4**

11.55

 

注:*.与对照组相比差异显著(P<0.05);**.与对照组差异极显著(P<0.01)。下同。

 

表 4 各组实验动物血常规检测结果(

x

614152.jpg

±sn=10)

Table 4 Blood routine parameters of each animal group (

x

614180.jpg

±s, n=10)

性别

来源

组别

白细胞数/

(109/L)

中性粒细

胞数/(109/L)

淋巴细胞数/(109/L)

单核细胞数/(109/L)

中性粒细

胞占比/%

淋巴细

胞占比/%

单核细胞

占比/%

嗜酸粒细

胞占比/%

嗜碱粒

细胞/%

红细胞数/

(1012/L)

血红蛋白

含量/(g/L)

血小板数/

(109/L)

雌性

 

空白组

6.82±0.54

1.76±0.46

4.95±0.31

0.11±0.03

25.7±5.6

72.7±5.6

1.49±0.41

0.07±0.07

0.01±0.03

6.33±0.37

143±6

1017±93

国产奶源

2-飞

5.79±0.77

1.53±0.35

4.17±0.51

0.09±0.06

26.2±4.4

72.4±4.2

1.30±0.53

0.11±0.07

0.02±0.04

6.39±0.46

142±9

920±76

3-贝健

6.84±1.36

2.19±0.73

4.58±1.01

0.07±0.05

32.0±7.6

67.1±7.6

0.85±0.19

0.07±0.07

0.00±0.00

6.49±0.29

144±6

933±48

5-冠

6.37±1.22

1.60±0.56

4.70±0.75

0.07±0.05

24.8±4.3

74.0±4.4

0.99±0.30

0.20±0.12

0.04±0.07

6.24±0.28

138±6

840±75

进口奶源

1-蒙

5.81±0.67

1.49±0.38

4.23±0.64

0.09±0.03

25.6±6.0

72.9±5.9

1.31±0.38

0.14±0.11

0.02±0.04

6.42±0.61

142±12

880±79

4-贝爱

7.13±1.54

1.87±0.55

5.18±1.30

0.08±0.04

26.5±6.6

72.3±6.5

1.04±0.30

0.16±0.11

0.04±0.05

6.36±0.27

141±5

911±71

6-慧

6.66±0.54

1.79±0.31

4.78±0.45

0.09±0.03

26.9±3.9

71.7±4.0

1.21±0.33

0.18±0.12

0.01±0.03

6.41±0.53

142±11

848±93

雌性

 

空白组

9.28±1.06

2.44±0.55

6.74±0.86

0.10±0.00

26.2±4.9

72.9±4.9

0.87±0.27

0.10±0.05

0.02±0.04

6.48±0.43

140±9

898±85

国产奶源

2-飞

9.26±1.02

2.18±0.39

6.94±0.90

0.14±0.05

23.6±4.2

74.8±4.1

1.51±0.52

0.11±0.03

0.02±0.04

6.48±0.18

140±3

830±50

3-贝健

8.92±0.74

2.33±0.29

6.46±0.57

0.13±0.05

26.0±2.6

72.5±2.6

1.44±0.51

0.09±0.09

0.01±0.03

6.41±0.24

140±7

859±64

5-冠

8.94±0.69

2.36±0.43

6.44±0.41

0.14±0.05

26.3±3.4

72.0±3.4

1.58±0.51

0.12±0.10

0.03±0.05

6.25±0.33

136±7

854±106

进口奶源

1-蒙

8.37±0.66

2.04±0.39

6.21±0.60

0.12±0.04

24.3±4.0

74.2±3.9

1.32±0.36

0.11±0.10

0.01±0.03

6.24±0.37

136±7

890±134

4-贝爱

8.17±0.83

1.98±0.35

6.09±0.77

0.10±0.00

24.4±3.7

74.1±3.6

1.38±0.27

0.09±0.07

0.02±0.04

6.40±0.19

140±4

897±67

6-慧

8.84±1.32

2.25±0.61

6.49±1.03

0.10±0.00

25.4±5.3

73.3±5.3

1.13±0.25

0.12±0.08

0.01±0.03

6.44±0.22

140±3

887±56

 

表 5 各组实验动物血清生化检验结果(

x

614332.jpg

±sn=10)

Table 5 Serum biochemistry parameters of each animal group (

x

614360.jpg

±s, n=10)

性别

来源

组别

血清生化指标

谷丙转氨酶

活力/(U/L)

谷草转氨酶

活力/(U/L)

血清总蛋白

含量/(g/L)

白蛋白含

量/(g/L)

尿素氮含

量/(mmol/L)

肌酐含量/

μmol/L)

葡萄糖含量/

(mmol/L)

胆固醇含量/

(mmol/L)

甘油三酯含量/

(mmol/L)

雄性

 

空白组

39.5±4.2

127±5

69.5±2.7

27.8±0.5

7.23±0.40

39.0±5.9

5.80±0.26

2.51±0.14

0.91±0.10

国产奶源

2-飞

39.8±3.7

128±9

69.8±2.4

28.1±0.6

7.11±0.36

37.7±4.2

5.66±0.39

2.46±0.20

0.92±0.13

3-贝健

40.3±4.3

126±7

68.8±2.6

28.2±0.6

7.13±0.50

39.7±2.9

5.89±0.36

2.57±0.15

0.94±0.07

5-冠

41.1±4.7

129±5

69.9±2.6

28.2±0.4

6.98±0.45

38.5±3.4

5.62±0.31

2.64±0.12

1.07±0.10

进口奶源

1-蒙

39.2±4.1

123±7

68.2±3.0

28.5±0.6

7.11±0.37

38.6±7.8

5.84±0.34

2.55±0.18

0.90±0.13

4-贝爱

40.8±3.3

125±9

68.5±2.9

28.1±0.5

7.29±0.34

38.9±4.2

5.43±0.46

2.38±0.20

0.95±0.12

6-慧

37.5±4.9

130±6

69.0±1.6

28.3±0.3

6.75±0.60

41.8±5.9

5.49±0.27

2.70±0.11

1.01±0.16

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

雌性

 

空白组

39.9±2.8

131±9

70.1±1.8

28.2±0.5

7.22±0.52

38.4±2.6

6.00±0.35

2.66±0.11

1.01±0.12

国产奶源

2-飞

43.5±3.1

129±6

69.8±2.6

27.9±0.5

7.41±0.47

37.7±5.9

5.94±0.36

2.53±0.14

0.86±0.08

3-贝健

40.3±3.6

129±7

67.9±3.0

28.7±0.5

7.17±0.26

36.4±8.0

6.08±0.35

2.66±0.14

0.89±0.13

5-冠v

42.1±5.2

133±6

68.4±1.1

28.3±0.2

6.84±0.50

41.2±5.8

5.97±0.50

2.67±0.16

0.96±0.14

进口奶源

1-蒙

39.9±3.0

130±7

68.6±2.6

28.1±0.8

6.75±0.75

41.2±6.2

6.09±0.27

2.61±0.22

1.03±0.11

4-贝爱

42.7±4.3

131±9

70.9±2.0

28.0±0.6

7.26±0.56

37.1±3.9

5.79±0.24

2.51±0.26

0.94±0.12

6-慧

40.1±3.7

135±7

70.3±1.9

28.3±0.2

7.24±0.58

37.9±2.7

5.72±0.42

2.66±0.06

1.01±0.11

 

表 3 各组动物每周及总的食物利用率(

x

613968.jpg

±sn=10)

Table 3 Weekly and total food utilization rate of each animal group (

x

613996.jpg

±s, n=10)

性别

来源

组别

每周食物利用率/(g/100g饲料)

总食物利用率/(g/100g饲料)

第7天

第14天

第21天

第28天

雌性

 

空白对照

44.60±5.47

39.35±4.20

28.18±2.34

33.62±5.29

34.83±2.64

国产奶源

2-飞

52.15±5.37*

42.44±5.36

36.38±7.65**

29.94±4.91

38.42±3.24*

3-贝健

49.59±5.33**

41.35±8.44

32.95±5.51*

33.43±6.64

37.53±2.74

5-冠

50.80±5.11*

40.15±4.08

32.4±6.99

30.21±4.32

36.23±3.35

进口奶源

1-蒙

50.20±5.40**

41.41±2.72

32.66±4.97*

33.16±6.54

37.57±2.95

4-贝爱

55.85±7.55**

44.25±5.38*

34.46±5.01*

30.57±2.41

38.82±2.83**

6-慧

52.61±4.11**

45.12±4.86*

30.89±5.90

31.42±4.26

37.36±2.67*

 

 

 

 

 

 

 

 

雄性

 

空白对照

46.31±5.15

42.64±5.54

37.74±5.20

36.60±4.23

39.69±3.93

国产奶源

2-飞

53.47±4.81*

46.68±5.23

37.03±5.51

44.27±2.61**

44.20±3.35

3-贝健

53.35±2.47**

45.28±5.62

39.83±5.06

41.70±2.20**

43.64±2.38

5-冠

51.36±5.13

48.8±7.39

39.88±4.98

41.23±4.21

44.00±3.40

进口奶源

1-蒙

50.42±6.70

45.24±4.68

42.7±3.38*

41.70±7.60

44.11±2.47

4-贝爱

55.91±5.78**

49.76±2.68**

40.83±5.58

42.62±4.65*

45.53±2.97

6-慧

53.74±6.04**

49.72±4.32*

40.86±7.11

40.92±6.12

44.71±5.26