沙门氏菌裂解性噬菌体的分离鉴定及其生物学特性

包红朵 1,张鹏禹 1,2,周 艳 1,张莉莉 1,张 辉 1,陶明煊 2,王 冉 1,*

(1.江苏省农业科学院食品质量安全与检测研究所,农业部农产品质量安全控制技术与标准重点实验室,省部共建国家重点实验室培育基地-江苏省食品质量安全重点实验室,江苏南京210014;2.南京师范大学金陵女子学院,江苏南京210097)

摘要:从家禽屠宰场污水中,以肠炎沙门氏菌ATCC13076和禽沙门氏菌CVCC2184为宿主菌,分离到两株裂解性沙门氏菌噬菌体,分别命名为vB_SenM-PA13076(简称PA13076)和vB_SenM-PC2184(简称PC2184)。同时对这两株噬菌体进行了噬菌斑、噬菌谱系(含耐药菌)、形态学(透射电镜)、遗传物质、酸碱及热稳定性、最佳感染复数、一步生长曲线等生物学特性研究。结果表明:两株噬菌体的裂解空斑均透亮清晰;除对本身宿主菌产生强裂解作用,还裂解其他沙门氏菌,为宽噬菌谱,其中PA13076能强裂解一株耐氨苄 青霉素ATCC13076转化菌株(A +13076),PC2184则能裂解另一株耐氨苄青霉素CVCC2184转化菌株(A +2184);电镜观察这两株噬菌体均为肌尾病毒科;遗传物质为dsDNA;pH值和温度耐受能力较好;PA13076、PC2184最佳感染复数分别为0.01、10,潜伏期分别为20、30min,爆发期分别为70、60min,平均爆发量分别为21、23。

关键词:肠炎沙门氏菌;裂解性噬菌体;生物学特性;耐药性

沙门氏菌(Salmonella)居食源性疾病致病菌之首位,是全球最常见食源性病原菌,常引起食品安全事故 [1]。DuPont等 [2]报道沙门氏菌引起的食源性疾病在持续增加,表明当前食源性致病菌的灭菌技术并非绝对可靠。中国疾病控制中心报告的食物中毒数据显示沙门氏菌引起的发病人数比例居首,达13.8% [3]。2013年10月9日,美国18个州爆发了沙门氏菌引起的食物中毒事件,近300人生病 [4];4d后美国南旧金山4万磅禽类产品又因沙门氏菌污染召回 [5]。可见,沙门氏菌污染可带来严重的食品安全隐患,更严峻的是,沙门氏菌的耐药性正日益增强 [6],在中国 [7-8]和其他国家 [9]都正在引起广泛关注。

噬菌体作为细菌的天敌,已被科学家作为对付多重耐药菌新的希望,因此也成为了当前的研究热点。2006年,美国食品药品管理局(Food and Drug Administration,FDA)批准李斯特菌噬菌体制剂在即食食品(ready-to-eat)和禽类产品中使用,随后,沙门氏菌噬菌体产品如Intralytix公司的SalmonFresh也相继通过美国FDA评价食品添加剂的安全性指标认证(Generally Recognized as Safe,GRAS),获得FDA应用批准,这为噬菌体的商业化应用奠定了基础。本研究分离获得两株裂解性肠炎沙门氏菌噬菌体,并分析了其生物学特性和裂解特性,为噬菌体产品控制沙门氏菌污染或感染的进一步研究提供了基础数据参考。

1 材料与方法

1.1 菌种、培养基与试剂

菌种:分离噬菌体的宿主菌为肠炎沙门氏菌ATCC13076、禽沙门氏菌CVCC2184;肠炎沙门氏菌分离株K14、K16、K17、K23、K27、SR1、SR2、SR3、SR4、SR5;鼠伤寒沙门氏菌ATCC13311,分离株J521、K12;甲型副伤寒沙门氏菌ATCC50073,乙型副伤寒沙门氏菌分离株HNER067-1、HNER067-2、J300、J342;鸡白痢沙门氏菌CMCC533,分离株S96115、C905、S96116、S9627、S8645、S9685、S96109、S9695、S9103、S0701、S9649、S11-2、S11-3、S11-4-1、S11-4-2;鸭沙门氏菌分离株D9;2株耐氨苄青霉素肠炎沙门氏菌A +13076、A +2184(由本实验室通过导入质粒pUC18分别标记ATCC13076和CVCC2184制得)。污水样:采自南京及周边家禽屠宰场。

TSB-YE、LB培养基、琼脂青岛高科园海博生物科技有限公司;聚乙二醇(polyethylene glycol,PEG)8000、DNaseⅠ、RNaseA酶北京鼎国昌盛生物技术有限责任公司;限制性内切酶日本TaKaRa公司;氯仿、盐酸、NaCl、MgSO 4·7H 2O均为分析纯。

1.2 仪器与设备

5810R台式高速冷冻离心机德国Eppendorf公司;SW-CJ-1F超净台苏州真田洁净设备有限公司;HZL-F160全温振荡培养箱太仓市强乐实验设备有限公司;DHP-9052电热恒温培养箱上海一恒科技有限公司;DELTA320pH计瑞士Mettler Toledo公司;HFU486Basic超低温冰箱德国Thermo公司。

1.3 方法

1.3.1 噬菌体的分离富集

参照Mclaughlin等 [10]的方法分别以肠炎沙门氏菌ATCC13076和禽沙门氏菌CVCC2184为宿主菌分离噬菌体,首先在南京及周边家禽屠宰场采集污水样品,水样中加无菌生理盐水对浓稠水样稀释,滤纸过滤,4℃条件下8000×g离心滤液20min,得上清液,用0.22μm微孔滤膜过滤除菌。取滤液5mL,分别加入ATCC13076、CVCC2184等沙门氏菌液1mL和15mL LB培养液,室温静置30min,37℃、150r/min振荡过夜进行噬菌体富集培养。4℃、8000×g离心过夜培养物20min,取上清重复富集操作3次,用0.22μm滤膜过滤得含噬菌体的原液,4℃条件下保存备用。

1.3.2 噬菌斑的纯化及噬菌体颗粒制备

进行单层平板点样实验 [11],用涂布棒将100μL过夜培养的宿主菌于LB平板上涂开,滴加噬菌体原液10μL,阴性对照组(CK)滴加等量LB培养液,37℃培养12h,观察菌苔形成情况。挑选菌苔上出现明显溶菌空斑的样品,进行双层平板实验 [12]。噬菌体原液用SM缓冲液进行10倍稀释,取100μL合适浓度梯度的稀释液与100μL对应宿主菌混匀静置15min,加入3.5mL55℃左右的0.6%琼脂LB培养基,迅速混匀倒入1.2%琼脂LB平板上,凝固后37℃培养12h。标记双层平板上形态一致的典型噬菌斑,用枪头移取噬菌斑于5mL LB培养液中,加入200μL对应宿主菌,室温放置15min,37℃条件下培养12h,4℃、11000×g离心10min,得上清液。单一噬菌斑重复该纯化操作3~5次即得纯化噬菌体。

噬菌体纯化颗粒通过《分子克隆实验指南》中关于λ噬菌体颗粒的PEG/NaCl沉淀提取方法进行制备 [13],噬菌体颗粒溶于SM缓冲液中,4℃条件下保存备用。

1.3.3 噬菌体宿主谱的点样实验

采用点样实验分析噬菌体的噬菌谱 [14]。统计各细菌的裂解情况即得该噬菌体的宿主谱。

1.3.4 噬菌体透射电镜观察

将10μL噬菌体(10 8~10 10PFU/mL)滴加在铜网上,静置沉淀15min,吸去多余液体。滴加体积分数2%、pH7.0的磷钨酸(phosphotungstic acid,PTA)染色5~10min [12],自然干燥后用日立H7650型透射电子显微镜观察噬菌体形态。

1.3.5 噬菌体遗传物质酶切分析

参照《分子克隆实验指南》提取噬菌体基因组 [13],并于-20℃条件下保存备用。限制性核酸内切酶有HindⅢ、EcoRⅠ、EcoRⅤ、PstⅠ、SalⅠ、BamHⅠ、SacⅠ、NcoⅠ,根据酶供应商的说明书进行基因组酶切操作,酶作用结束后,用0.8%琼脂糖凝胶电泳,成像观察。

1.3.6 噬菌体酸碱稳定性和热稳定性的测定

调pH值分别为2、3、4、5、6、8、9、10、11、12、13的蛋白胨水。取不同pH值蛋白胨水与噬菌体等量混合,37℃水浴2h测定效价;取100μL噬菌体于离心管中,测定初始效价,将离心管分别于30、40、50、60、70、80℃的水浴环境中作用30、60min,测定噬菌体效价变化。两个实验均重复3次,每次设2个平行。

1.3.7 噬菌体最佳感染复数(multiplicity of infection,MOI)的测定

取对数期宿主菌,按不同感染复数1∶1000、1∶100、1∶10、1∶1、10∶1、100∶1加入噬菌体和宿主菌,37℃、150r/min振荡培养5h,10000×g、4℃离心10min,得上清液测定各组噬菌体效价。实验重复3次,设置不加噬菌体的宿主菌培养液为实验对照。

1.3.8 噬菌体一步生长曲线实验分析

参考Leuschner等 [15]的方法,取对数期细菌,以MOI≥10加入噬菌体,37℃水浴15min,10000×g离心1min,去上清,LB液洗涤两次,细菌沉淀加入37℃条件预热的LB液中混匀,迅速于37℃、180r/min振荡培养,同时开始计时。每10min取样测噬菌体效价,设立不加噬菌体的宿主培养液和不加宿主菌的噬菌体作为实验对照。以感染时间为横坐标,噬菌体效价对数值为纵坐标,绘制一步生长曲线,实验重复3次,每次设2个平行。

2 结果与分析

2.1 噬菌体的分离纯化及其噬菌斑形态、透射电镜观察

图1 肠炎沙门氏菌噬菌体原液单层平板点样实验
Fig.1Spot tests of Salmonella enteritidis bacteriophages in the liquid samples

由图1可知,在单层平板上点样得到肠炎沙门氏菌ATCC13076和禽沙门氏菌CVCC2184的噬菌空斑,而阴性对照组(CK)正常长出菌苔。在双层平板上两株噬菌体均呈现出典型裂解性噬菌体特征,空斑透亮,边缘整齐清晰,无晕环。37℃培养12 h,在LB培养平板上PA13076噬菌斑直径为0.5~1.0mm,PC2184为1.0~1.5mm(图2)。

图2肠炎沙门氏菌噬菌体PA13076(A)和禽沙门氏菌噬菌体PC21842184(B)的噬菌斑
Fig.2Plaques of Salmonella enteritidis phage PA13076(A)and Salmonella phage PC2184(B)

图3噬菌体PA13076(A)和PC2184(B)的透射电镜观察
Fig.3Ttransmission electron micrographs of phage PA13076(A)and PC2184(B)

由图3可知,噬菌体PA13076头部偏椭圆形,长径约87nm,横径约66nm,具有可收缩性尾,尾长约90nm,直径约18nm,头部与尾部被颈圈隔开,PC2184头部呈正多面体形状,长径约68nm,横径约65nm,具有可收缩肌鞘,尾长约106nm,直径约17nm,按国际病毒分类委员会分类规则 [15],将它们归为有尾噬菌体目,肌尾病毒科。

2.2 噬菌体的宿主谱分析

噬菌体PA13076能裂解ATCC13076、A +13076等17株不同种的沙门氏菌;而PC2184能裂解CVCC2184、A +2184等33株沙门氏菌;这些宿主菌中涵括耐药性肠炎、肠炎、鼠伤寒、鸡白痢、乙型副伤寒和鸭沙门氏菌;同时它们也具有一定范围的交叉宿主菌谱(表1)。

表1 噬菌体PC2184和PA130766的宿主谱
Table1Host range of phage PC2184and PA1133007766

宿主菌代号宿主菌种类PA13076PC2184 ATCC13076肠炎沙门氏菌 (Salmonella enteritidis)++ A +13076耐氨苄肠炎沙门氏菌Ampicillin-resistant SE+-ATCC13311鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium)++ ATCC50073甲型副伤寒沙门氏菌(Salmonella paratyphi A)-+ CVCC2184肠炎沙门氏菌(Salmonella enteritidis)±+ A +2184耐氨苄肠炎沙门氏菌Ampicillin-resistant SE-± CMCC533鸡白痢沙门氏菌(Salmonella pullorum)-± SPu-01鸡白痢沙门氏菌(Salmonella pullorum)--SPu-45鸡白痢沙门氏菌(Salmonella pullorum)-+ C905鸡白痢沙门氏菌(Salmonella pullorum)-± SPu-103鸡白痢沙门氏菌(Salmonella pullorum)-± SPu-109鸡白痢沙门氏菌(Salmonella pullorum)--SPu-115鸡白痢沙门氏菌(Salmonella pullorum)-± SPu-116鸡白痢沙门氏菌(Salmonella pullorum)-+

续表1

注:“+”表示宿主菌对噬菌体完全敏感;“±”表示宿主菌对噬菌体不完全敏感;“-”表示宿主菌对噬菌体不敏感。

宿主菌代号宿主菌种类PA13076PC2184 SPu-27鸡白痢沙门氏菌(Salmonella pullorum)--SPu-49鸡白痢沙门氏菌(Salmonella pullorum)-± SPu-85鸡白痢沙门氏菌(Salmonella pullorum)-± SPu-95鸡白痢沙门氏菌(Salmonella pullorum)--S11-2鸡白痢沙门氏菌(Salmonella pullorum)-+ S11-3鸡白痢沙门氏菌(Salmonella pullorum)-+ S11-4-1鸡白痢沙门氏菌(Salmonella pullorum)±-S11-4-2鸡白痢沙门氏菌(Salmonella pullorum)±+ D9鸭沙门氏菌(Salmonella anatis)±+ HNER067-1乙型副伤寒沙门氏菌(Salmonella paratyphi B)++ HNER067-2乙型副伤寒沙门氏菌(Salmonella paratyphi B)±+ J300乙型副伤寒沙门氏菌(Salmonella paratyphi B)±+ J342乙型副伤寒沙门氏菌(Salmonella paratyphi B)±+ J521鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium)±+ K12鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium)-+ K14肠炎沙门氏菌(Salmonella enteritidis)±+ K16肠炎沙门氏菌(Salmonella enteritidis)±+ K17肠炎沙门氏菌(Salmonella enteritidis)±+ K23肠炎沙门氏菌(Salmonella enteritidis)±+ K27肠炎沙门氏菌(Salmonella enteritidis)±± SR1肠炎沙门氏菌(Salmonella enteritidis)-± SR2肠炎沙门氏菌(Salmonella enteritidis)-+ SR3肠炎沙门氏菌(Salmonella enteritidis)-+ SR4肠炎沙门氏菌(Salmonella enteritidis)-+ SR5肠炎沙门氏菌(Salmonella enteritidis)-+

2.3 噬菌体遗传物质的酶切鉴定分析

图4噬菌体PA13076和PC2184基因组DNAA酶切图谱
Fig.4Agarose gel electrophoresis of the genomes of phage PA13076and PC2184digested with restriction enzymes

将提取得到的噬菌体基因组进一步进行酶切电泳实验,由图4可知,合适的限制性核酸内切酶处理噬菌体基因组后,DNA被消化片段化,表明它们的遗传物质为dsDNA(双链DNA)。

噬菌体PA13076基因组能被限制性内切酶EcoRⅠ和EcoRⅤ切开,PC2184则能被EcoRⅠ、EcoRⅤ和HindⅢ切开,其他限制性内切酶不能消化它们的基因组(图4)。酶切片段经计算得到噬菌体PA13076的基因组大小约为57k b,而PC2184为59kb,更准确的基因组大小要在测序后才能确定,根据酶切片段只能进行大概估算。

2.4 噬菌体的酸碱稳定性和热稳定性

图5噬菌体PA13076(A)和PC2184(B)对酸碱的耐受能力
Fig.5Resistance of PA13076(A)and PC2184(B)to acid and alkali

由图5可知,噬菌体PA13076在pH6~11范围内效价 较稳定,pH值小于6以及大于11都会引起效价的明显减少,但在pH值为12的强碱环境中噬菌体仍具有较高效价,pH≤3或≥13时,才基本检测不到噬菌斑。PC2184在pH6~9范围内效价较稳定,pH值降到5或升到10时,效价下降较明显,当pH≤4或≥12,大部分噬菌体已经失活。

图6噬菌体PA13076(A)和PC2184(B)对温度的耐受能力
Fig.6Resistance of PA13076(A)and PC2184(B)to temperature

由图6可知,噬菌体PA13076在各温度下作用30、60min后效价变化无太大差别,30、40、50℃下几乎维持在初始效价,但60℃时下降较快,70℃之后已基本无 噬菌体存在;PC2184在30、40、50、60℃条件下效价下降很少,70℃时,效价降低较快,且60min组降低幅度大于30min组,80℃时,60min组已检测不到噬菌体,30min组效价则下降到2.15×10 2PFU/mL,表明高温会严重破坏噬菌体的活性。

2.5 噬菌体最佳感染复数

表2噬菌体PA13076的最佳MOII测定结果

Table2Determination of optimal multiplicity of infection(MOI)of phage PA1133007766

MOI细菌数/CFU噬菌斑/PFU效价/(PFU/mL)100∶13×10 63×10 85.2×10 810∶13×10 63×10 73.3×10 81∶13×10 63×10 61.4×10 81∶103×10 63×10 52.1×10 81∶1003×10 63×10 41.5×10 91∶10003×10 63×10 32.5×10 8

由表2可知,噬菌体PA13076的MOI为1∶100时,宿主菌释放的子代噬菌体效价为1.5×10 9PFU/mL,在各实验组中最高,为最佳MOI。由表3可知,当MOI为10∶1时,PC2184的效价为7.0×10 9PFU/mL,是产生子代噬菌体颗粒最多的一组,为噬菌体扩增时的最佳MOI值。

表3噬菌体PC2184的最佳MOI测定结果
I
Table3Determination of optimal multiplicity of infection(MOI)of Table3Determination of optimal multiplicity of infection(MOI)of phage PC2184C2184

MOI细菌数/CFU噬菌斑/PFU效价/(PFU/mL)100∶11.5×10 61.5×10 84.5×10 910∶11.5×10 61.5×10 77.0×10 91∶11.5×10 61.5×10 61.6×10 91∶101.5×10 61.5×10 51.4×10 81∶1001.5×10 61.5×10 41.2×10 81∶10001.5×10 61.5×10 31.6×10 8

2.6 噬菌体的一步生长曲线

图7噬菌体PA13076(A)和PC2184(B)在37℃的LB培养液中的一步生长曲线
Fig.7One-step growth curves of phage PA13076(A)and PC2184(B)in LB at37℃

由图7可知,噬菌体PA13076感染宿主菌的潜伏期约20min,爆发持续时间约70min,算得平均爆发量为21(平均爆发量=爆发末期的噬菌体效价/感染初期的宿主菌浓度);PC2184潜伏期约30min,爆发持续时间约60min,平均爆发量为23,具有较高的裂解活性。

3 讨论

3.1 抗耐药性沙门氏菌噬菌体的分离鉴定

单层平板点样得到菌苔上的溶菌区域较大,可见富集后的噬菌体效价较高。通过点样验证实验有些实验菌中出现较混浊的溶菌区域或外圈透亮但中间混浊的环状溶菌区域,表明该实验菌对该噬菌体不完全敏感。双层平板实验在噬菌体研究中既是噬菌体数量(效价)计算的基本方法,也是噬菌体筛选纯化的经典手段 [16]。根据包红朵 [12]和王冉 [17]等的报道,双层平板上裂解性噬菌体的噬菌斑规则透亮、边缘清晰,与本研究中噬菌斑的特点吻合。综合形态学等信息,将这两株噬菌体命名为vB_SenM-PC2184和vB_SenM-PA13076,其中vB:viruses bacteriophage(病毒噬菌体);Sen:Salmonella enteritidis(肠炎沙门氏菌);M:Myoviridae(肌尾病毒科)。该命名比一般文献中报道的更科学,能表达出噬菌体必要的一些分类信息。Bueno等 [18]对两株噬菌体进行类似命名为vB_SauS-phi-IPLA35和vB_SauS-phi-IPLA88,其中Sau:Staphylococcus aureus(金黄色葡萄球菌);S:Siphoviridae(长尾病毒科)。噬菌体按核酸类型及单双链形式分为4个“群”,“群”是噬菌体分类的第一个级阶 [15],dsDNA病毒群在文献中最为常见,种类最多,本研究两株噬菌体也不例外。

本研究两株噬菌体均能裂解多株分离菌,属宽谱噬菌体,噬菌体PC2184宿主谱较噬菌体PA13076广,能裂解实验室39株沙门氏菌中的33株(84.6%),宿主谱可为两株噬菌体的复配杀菌应用提供参考。Carey-Smith等 [19]曾报道噬菌体FGCSSa1,其宿主谱涵括6株不同种沙门氏菌;Capparelli等 [20]分离到肠炎沙门氏菌噬菌体Ф1,则能裂解18株沙门氏菌中的16株。值得注意的是,PA13076能强裂解一株耐氨苄青霉素肠炎沙门氏菌A +13076;而PC2184对另一株耐氨苄青霉素肠炎沙门氏菌A +2184的溶菌空斑不够清晰,裂解作用稍弱。这两株噬菌体所呈现出的对耐药性肠炎沙门氏菌的裂解性,为耐药性肠炎沙门氏菌的杀灭及其生物防控提供了新的解决思路,并为相关新型抗菌剂的研究提供了有力佐证。

3.2 两株噬菌体的生物学特性研究

PC2184的酸碱耐受能力不及PA13076,但明显优于JS01等噬菌体 [21],PA13076耐酸碱能力很强,尤其对碱的耐受能力明显优于PK88-4、LipG2-5等噬菌体 [17,22],与qds001类似,在一定程度上畏酸嗜碱 [23]。PC2184热稳定性较高,与PK88-4等噬菌体相近 [17];PA13076热稳定性不及PC2184,与LipG2-5相仿 [21],但明显优于qds001等噬菌体 [23]。本研究中噬菌体耐酸碱能力和耐热性的数据可为其实际应用条件提供参考。

根据Lu等 [11]描述,感染发生前噬菌体与宿主菌数量的比值即为感染复数,获得子代噬菌体产量最高的即为最佳感染复数。感染复数是研究噬菌体投入与产出量效关系的重要指标 [20],最佳MOI因噬菌体种类不同而存在差异,在噬菌体产品的生产制备中将具有重要的指导意义。噬菌体生长可分为3个时期:噬菌体在宿主菌上的吸附;噬菌体在宿主菌里面的生长(潜伏期);噬菌体的释放(爆发期) [24]。潜伏期是指从噬菌体吸附宿主菌到第一次爆发开始之间的时间区段,爆发量即为最终释放出来的噬菌体颗粒数与潜伏期初始感染的宿主菌细胞数的比值 [11]。于龙等 [25]报道的噬菌体SM701的潜伏期约30min,与PC2184相近,爆发期约100min,爆发量约63,均大于本研究的两株噬菌体。Leuschner等 [15]报道的噬菌体PWH2与本研究相比显示出更长的潜伏期,达到90min,爆发期60min,爆发量较高,为110。本研究得到两株全新的肠炎沙门氏菌噬菌体PA13076和PC2184,与其他噬菌体相比具有一些共性的生物学特性,但又表现出不一样的特点,特别是它们对耐药宿主菌的裂解作用,为后续针对耐药性肠炎沙门氏菌的防控研究提供了重要的参考意义。

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Isolation and Biological Characteristics of Lytic Salmonella Bacteriophage

BAO Hongduo 1,ZHANG Pengyu 1,2,ZHOU Yan 1,ZHANG Lili 1,ZHANG Hui 1,TAO Mingxuan 2,WANG Ran 1,*
(1.Jiangsu Key Laboratory of Food Quality and Safety-State Key Laboratory Cultivation Base of MOST,Key Laboratory of Control Technology and Standard for Agro-product Safety and Quality,Ministry of Agriculture,Institute of Food Safety and Inspection,Jiangsu Academy of Agricultural Sciences,Nanjing210014,China;2.Ginling College,Nanjing Normal University,Na njing210097,Chi na)

Abstract:Two lytic Salmonella bacteriophages,namely vB_SenM-PA13076(PA13076)and vB_SenM-PC2184(PC2184)that can inactivate ATCC13076or CVCC2184were isolated from the sewage samples of poultry slaughtering plants.Their biological properties were identified by plaque,host range(antibiotic-resistant bacteria),transmission electron microscopy(TEM),genetic material,pH and thermostability,optimal multiplicity of infection(MOI)and one-step growth experiment.Thei r plaq ues on host strains were clear and bright,and also caused bacteriolysis to other strains of Salmonella.PA13076could strongly cause bacteriolysis to an ampicillin-resistant strain SE A +13076,while PC2184only lyse another strain A +2184slightly.The newly isolated bacte riophages were the members of family Myoviridae according to their ultrastructure under TEM.Their genomes were dsDNA and revealed excellent tolerance to pH and temperature.The MOI of PA13076(PC2184)was0.01(10),and the latent period was20min(30min),the burst period was70min(60min)and the average burst size was21(23)phages per cell. 

Key words:Salmonella enteritidis;lytic phage;biological characteristic;multi-antibiotic resistance

中图分类号:Q939.48

文献标志码:A

文章编号:1002-6630(2015)05-0131-06

doi:10.7506/spkx1002-6630-201505025

收稿日期:2014-04-30

基金项目:江苏省自然科学基金项目(BK2012788);江苏省农业科技自主创新资金探索性项目(CX(12)5040);国家自然科学基金青年科学基金项目(31402234)

作者简介:包红朵(1984—),女,助理研究员,博士研究生,主要从事噬菌体防治细菌性疾病研究。E-mail:baohongduo@jaas.ac.cn

*通信作者:王冉(1973—),女,研究员,博士,主要从事畜产品安全和健康养殖研究。E-mail:wangran2001@126.com