厚朴多糖提取工艺及其体外抗氧化活性

姜 宁 1,刘晓鹏 1′2′*,陈 芳 1,喻长发 1,勒栋梁 3,丁振国 3,吴 皓 2

(1.湖北民族学院生物科学与技术学院,湖北 恩施 445000;2.南京中医药大学博士后流动站,江苏 南京 210023;3.南京同仁堂洪泽中药材科技有限公司,江苏 洪泽 223200)

摘 要:通过Box-Behnken试验优化提取厚朴多糖的工艺;以超氧阴离子自由基、1′1-二苯基-二苦基肼(1′1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基和2′2’-连氮基-双-(3-乙基苯并噻唑-6-磺酸)(ABTS •)清除能力,Fe 2+螯合力、铁离子还原抗氧化力(ferric reducing antioxidant power,FRAP)为指标,探究厚朴多糖的体外抗氧化活性。结果表明,提取厚朴多糖的最佳工艺条件为pH 7.3、液固比32∶1(mL/g)、提取温度78 ℃、提取时间139 min,此条件下多糖提取率达3.35%~3.52%。体外抗氧化活性结果表明,厚朴多糖超氧阴离子自由基清除力为(18.72±2.12) μmol VC/mg,DPPH自由基清除能力达(0.59±0.05) μmol Trolox/mg,ABTS •清除能力为(0.57±0.04) μmol Trolox/mg,Fe 2+螯合力为(0.38±0.02) μmol EDTA/mg,FRAP值为(2.19±0.31) μmol Trolox/mg。

关键词:厚朴;多糖;提取;响应面分析;抗氧化

中药厚朴为木兰科植物厚朴(Magnolia officinalis Rehd et Wils.)的干皮、根皮或枝皮,性温、味苦辛、无毒,入脾、胃、大肠经,能温中下气,燥湿消痰 [1]。厚朴在我国有两千多年药用历史,用于治疗消化系统、呼吸系统等多个系统及器官的疾病,2010版《中国药典》记载的厚朴为主要原料药的中成药达20余种 [1]。我国很多方剂如厚朴三物汤、大承气汤、四七汤和桅子厚朴汤中都含有生药厚朴。

厚朴含有多种化学成分,包括酚类、生物碱类、挥发油类、黄酮类、多糖等成分 [2-4],其中厚朴酚与和厚朴酚是主要活性成分,目前国内外对厚朴的药理研究主要其中在厚朴酚和厚朴酚的抗氧化、抗菌、抗病毒、抗炎、抗肿瘤等作用 [5-9],针对厚朴多糖的研究尚不多见。本研究通过考察pH值、液固比、提取时间和提取温度等因素,采用单因素试验和Box-Behnken试验优化厚朴多糖的提取工艺,并考察5 个抗氧化指标以揭示其体外抗氧化活性,旨在为厚朴资源的开发利用提供科学依据和理论指导。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

厚朴取自湖北恩施市双河乡,为紫油厚朴的干燥树皮,烘干,粉碎,过60 目筛。

1′1-二苯基-二苦基肼(1′1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基、2′2’-连氮基-双-(3-乙基苯并噻唑-6-磺酸)(2′2’-azino-bis(3-ethylbenzthiazoline-6-sulfonic acid),ABTS)、菲咯嗪、三吡啶三吖嗪、Trolox 日本东京化成工业株式会社;二喹啉甲酸蛋白浓度定量试剂盒 碧云天生物技术研究所;VC、葡萄糖、无水乙醇、蒽酮(均为分析纯) 国药集团化学试剂有限公司。

1.2 仪器与设备

Multiskan GO全波长酶标仪 美国Thermo公司;TU-1810型紫外-可见分光光度计 北京普析通用仪器有限责任公司;RT-02A型多功能粉碎机 弘荃机械企业有限公司;COUCTER型离心机 美国Beckman公司;HHS型恒温水浴锅 上海博讯实业有限公司医疗设备厂。

1.3 方法

1.3.1 厚朴多糖提取工艺的优化

1.3.1.1 厚朴多糖的提取

厚朴60 ℃烘干,粉碎,过60 目筛备用。称取一定量的厚朴粉末,加入适量缓冲液,水浴提取一定时间后,离心取上清液进行真空旋转蒸发浓缩至原体积的1/10,向浓缩液中缓慢加入无水乙醇至乙醇终体积分数为80%,4 ℃静置过夜,离心,沉淀用无水乙醇洗涤3 次后用蒸馏水溶解。将上述溶液、三氯甲烷、正丁醇按体积比25∶5∶1混合并剧烈振荡20 min,离心取上清液,此过程重复5 次以除去蛋白。葡萄糖为标准品,硫酸-蒽酮法测多糖含量 [10],多糖提取率按下列公式计算:

式中:ρ为测定样液的质量浓度/(mg/mL);V为提取体积/mL;m为厚朴质量/mg。

测量抗氧化活性前,样品于蒸馏水中透析过夜以除去小分子物质。透析液旋转蒸发浓缩,冻干得厚朴多糖冻干粉。检测冻干粉中的多糖含量;以牛血清白蛋白为标准品,二喹啉甲酸法检测其蛋白含量,具体操作按试剂盒说明书进行;以没食子酸为标准品,Folin-Ciocalteu法测多糖冻干粉的总酚含量 [11];以芦丁为标准品,分光光度法测量总黄酮含量 [12]

1.3.1.2 单因素试验

称取一定量的厚朴粉末,按照以下条件进行单因素试验:分别配制pH值为6.0、6.5、7.0、7.5、8.0的缓冲液按液固比30∶1(mL/g)加入样品中,90 ℃提取时间120 min;固定pH 7.0、提取温度90 ℃、提取时间120 min,改变液固比分别为10∶1、20∶1、30∶1、40∶1、50∶1(mL/g);固定pH 7.0、液固比30∶1(mL/g),分别于60、70、80、90、100 ℃提取120 min;固定提取液pH 7.0、液固比30∶1(mL/g),于90 ℃分别提取60、90、120、150、180 min。以考察各因素对厚朴多糖提取率的影响。

1.3.1.3 Box-Behnken试验优化厚朴多糖提取工艺

根据单因素试验结果,采用Design-Expert 8.0软件进行Box-Behnken试验设计,以pH值、液固比、提取温度和提取时间为自变量,多糖提取率为响应值优化厚朴多糖的提取工艺。试验因素与水平设计见表1。

表1 Box-Behnken试验因素与水平
Table1 Coded levels for factors used in Box-Behnken experiments

水平因素A pHB液固比C提取温度/℃D提取时间/min—16.520∶17090 07.030∶180120 17.540∶190150

1.3.2 厚朴多糖体外抗氧化活性的测定

1.3.2.1 超氧阴离子自由基清除能力测定

厚朴多糖的超氧阴离子自由基清除能力采用邻苯三酚自氧化法,按参考文献[13]操作,以VC为标准品,浓度分别为0.31、0.62、1.2、2.5、5、10 mmol/L,制作VC的超氧阴离子自由基清除能力的标准曲线,测定厚朴多糖的超氧阴离子自由基清除能力,以μmol VC/mg表示。

1.3.2.2 DPPH自由基清除能力测定

厚朴多糖的DPPH自由基清除能力测定按照Gülcin等 [14]方法进行。Trolox为标准品,浓度分别为2.5、5、10、20、40、80 μmol/L,制作出Trolox DPPH自由基清除能力的标准曲线,样品的自由基清除能力以μmol Trolox/mg表示。

1.3.2.3 ABTS ・清除能力测定

参照Chen Danjun等 [15]的方法测定厚朴多糖的ABTS ・清除能力。Trolox作为标准品,作出Trolox的ABTS ・清除能力(浓度分别为1.25、2.5、5、10、20、40 μmol/L)的标准曲线。厚朴多糖的清除能力以μmol Trolox/mg表示。

1.3.2.4 亚铁离子(Fe 2+)螯合能力测定

Fe 2+螯合力参照文献[16]测定。EDTA作为测定该指标的标准品,浓度为7.8、15.6、31.3、62.5、125、250 μmol/L,计算Fe 2+螯合力与EDTA浓度的线性回归方程。样品的螯合力用μmol EDTA/mg表示。

1.3.2.5 铁离子还原抗氧化力(ferric reducing antioxidant power,FRAP)测定

FRAP测定采用Fernandes等 [17]的方法。抗氧化剂将铁-三吡啶三吖嗪(Fe 3+-TPTZ)复合物还原成蓝色的亚铁离子形式(Fe 2+),此形式在593 nm波长处有吸收峰,吸收度越高,抗氧化力越强。Trolox为标准品,测定浓度分别为5、10、20、40、80、160 μmol/L的FRAP值,计算线性回归方程。以μmol Trolox/mg表示FRAP。

1.4 数据处理

所有实验重复3 次,结果以 ±s表示。单因素试验和体外抗氧化活性研究采用Origin 8.0统计软件分析;Box-Behnken试验设计和结果分析采用Design-Expert 8.0软件。

2 结果与分析

2.1 厚朴多糖冻干粉组分分析

厚朴多糖冻干粉中多糖含量为96.31%,未检测到蛋白质、酚类以及黄酮类化合物。因此,可以推断冻干粉中厚朴多糖是体外抗氧化的物质基础。

2.2 厚朴多糖提取工艺的优化

2.2.1 单因素试验结果

图1 单因素试验结果
Fig.1 Results of single factor experiments

从图1可以得知,随着pH值由低到高,提取率上升,pH 7.0时,厚朴多糖提取率最大(图1A)。液固比对提取的影响结果见图1B。液固比的加大,会使厚朴多糖的提取率升高,但液固比超过30∶1(mL/g)后,提取率上升不显著。温度会显著影响厚朴多糖的提取率,其他条件一致,80 ℃水浴时,提取率最高(图1C)。图1D显示提取时间对厚朴多糖的提取率有显著影响,提取时间的延长,会显著提高多糖的提取率,但时间过长,提取率不再显著变化。综上所述,选取pH 6.5、7.0、7.5,液固比20∶1、30∶1、40∶1(mL/g),提取温度70、80、90 ℃和提取时间90、120、150 min作为后续Box-Behnken试验的考察指标。

2.2.2 Box-Behnken试验优化厚朴多糖提取工艺

2.2.2.1 回归模型的建立

表2 Box-Behnken试验设计及结果
Table2 Design and results of Box-Behnken experiments

试验号A pHB液固比C提取温度D提取时间Y提取率/% 1—1—1002.72±0.05 2 1—1002.74±0.08 3—11002.62±0.10 4 1 1 0 03.07±0.15 5 0—1—12.14±0.02 6 0 0 1—13.23±0.06 0 7 0—113.04±0.01 8 0 0 1 12.57±0.08 0 9—100—12.86±0.07 10100—12.51±0.11 11—10012.81±0.05 1210013.47±0.04

续表2

试验号A pHB液固比C提取温度D提取时间Y提取率/% 130—1—102.42±0.03 1401—102.47±0.10 150—1102.81±0.09 1601103.22±0.05 17—10—102.41±0.14 1810—102.80±0.15 19—10103.19±0.07 2010102.96±0.04 210—10—12.41±0.08 22010—12.72±0.06 230—1012.78±0.11 2401013.03±0.12 2500003.48±0.18 2600003.33±0.09 2700003.39±0.12 2800003.30±0.05 2900003.54±0.08

Box-Behnken试验结果如表2所示。由统计软件Design-Expert 8.0分析,建立了如下四元二次回归方程:Y=3.41+0.078A+0.10B+0.22C+0.16D+0.11AB—0.15AC+0.25AD+0.09BC—0.02BD—0.39CD—0.23A 2—0.37B 2—0.33C 2—0.29D 2

表3 Box-Behnken试验结果方差分析
Table3 ANOVA of Box-Behnken experimental results

注:*.显著(P<0.05);**.极显著(P<0.01)。

差异源平方和自由度均方F值P值显著性模型3.79140.2723.60<0.000 1** A pH0.07410.0746.420.023 9* B液固比0.1310.1311.350.004 6** C提取温度0.6010.6052.58<0.000 1** D提取时间0.2910.2925.680.000 2** AB0.04610.0464.030.064 4 AC0.09610.0968.380.011 8* AD0.2610.2622.240.000 3** BC0.03210.0322.830.115 0 BD9.000×10 —419.000×10 —40.0780.783 5 CD0.6210.6253.73<0.000 1** A 20.3310.3329.08<0.000 1** B 20.8910.8977.64<0.000 1** C 20.7210.7262.72<0.000 1** D 20.5610.5648.97<0.000 1**残差0.16140.011失拟0.12100.0121.230.453 9误差0.03949.830×10 —3总和3.9528

该模型的决定系数R 2为0.959 4,校正后决定系数 为0.918 7。方差分析(表3)表明该模型极显著(P<0.000 1),失拟性试验不显著(P>0.1),说明此回归模型与实际情况拟合得很好。

对各因素的分差分析结果(表3)显示,AB、BC、BD项不显著(P>0.05),所以将上述回归模型的AB、 BC和BD项删除,最终回归模型如下:Y=3.41+0.078A+0.10B+0.22C+0.16D—0.15AC+0.25AD—0.39CD—0.23A 2—0.37B 2—0.33C 2—0.29D 2

2.2.2.2 厚朴多糖的工艺优化

由回归方程计算得到:当A = 0.63、B = 0.20、C =—0.16、D = 0.63时,Y出现极大值。即当提取条件为pH 7.3、液固比32∶1(mL/g)、提取温度78 ℃、提取时间139 min时,厚朴多糖的提取率最高,达3.47%。对该工艺进行验证,得到多糖的提取率在3.35%~3.52%之间,说明该优化的工艺能 很好地指导生产实践。

2.2.2.3 两因素间的交互效应分析

由表3可以得知,pH值与提取温度、pH值与提取时间以及提取温度与提取时间的交互作用对厚朴多糖提取率有显著影响(P<0.05)。通过响应面分析可以看出:液固比32∶1(mL/g)、提取时间139 min时,随着pH值的上升和提取温度的升高,多糖提取率呈现出先急剧增加后缓慢下降的趋势,当pH 7.25~7.5,提取温度75~80 ℃时,多糖提取率最高(图2a)。pH值与提取时间对提取率的交互影响如图2b所示:当液固比和提取温度一定时,多糖提取率随着pH值增加和提取时间延长也急剧增加,pH 7.25~7.5,提取时间120~150 min时,达到最大值,随后提取率随二者的增加急剧下降。提取温度和提取时间对多糖提取效果的影响见图2c,pH值和液固比分别为7.3和32∶1(mL/g)时,提取温度升高和时间延长会使多糖提取率急剧提高,随后提取率上升趋势变缓,当提取温度75~80 ℃、提取时间120~150 min时,多糖的提取率最高。

图2 两因素交互作用对厚朴多糖提取率的影响
Fig.2 Interactive effects of extraction parameters on the yield of polysaccharides

2.3 厚朴多糖的体外抗氧化活性

2.3.1 超氧阴离子自由基清除能力

在一定浓度范围内(0.31~10 mmol/L),超氧阴离子自由基清除率与VC浓度呈线性关系,线性回归方程为y = 8.870x+5.387(决定系数R 2为0.992 3,校正后决定系数 为0.990 8)。将测得的厚朴多糖超氧阴离子自由基清除率代入上述线性方程,可得出厚朴多糖超氧阴离子自由基清除能力为(18.72±2.12) μmol VC/mg。

Müller等 [18]采用α-生育酚为标准品,以摩尔α-生育酚当量(mol α-tocopherol equivalent,mol α-TE)为单位测定了胡萝卜素和叶黄素的抗氧化活性。与其他自由基相比,超氧阴离子自由基较为惰性且寿命较长,但其能参与其他自由基的后续反应,产生更多ROS如羟自由基和单线态氧从而对组织产生损伤导致各种疾病 [19]。因此,超氧阴离子自由基的清除能力可以作为物质抗氧化活性的一个指标。贾琳斐等 [20]以VC为阳性对照,研究了海红果水溶性多糖的超氧阴离子自由基的清除能力,结果表明在0.4~1 mg/mL的范围内,海红果水溶性多糖的超氧阴离子自由基清除能力呈质量浓度依赖性,由1.98%增至14.66%。虽然富含—OH是多糖具有抗氧化性的主要原因,但多糖清除超氧阴离子自由基的机理仍不清楚,还需进一步研究。

2.3.2 DPPH自由基清除能力

Trolox浓度在一定范围内(2.5~80 μmol/L),与DPPH自由基清除率呈线性关系(决定系数R 2为0.984 2,校正后决定系数 为0.981 0),回归方程为:y= 0.978x+5.823。根据该方程,厚朴多糖样品的DPPH自由基清除能力为(0.59±0.05) μmol Trolox/mg。

多糖清除DPPH自由基的原因主要是因为它们能提供质子,Trolox常被用作体外抗氧活性测定的标准品 [21-22]。本研究以Trolox为标准品,检测了厚朴多糖的DPPH自由基清除能力,表明厚朴多糖有较强的DPPH自由基清除能力。有关植物多糖DPPH自由基清除能力的研究有很多,如郑义等 [23]报道了高良姜多糖具有明显的DPPH自由基清除能力,杨娜等 [24]的研究表明蕨麻多糖的DPPH自由基清除能力有质量浓度依赖性,IC 50为5.47 mg/mL。

2.3.3 ABTS ・清除能力

在1.25~40 μmol/L范围内,Trolox的ABTS ・清除能力与其浓度呈线性相关(决定系数R 2为0.995 2,校正后决定系数R A 2 dj为0.994 2),标准曲线为y=1.578x—0.508。由此计算出厚朴多糖的ABTS ・清除能力为(0.57 ±0.04) μmol Trolox/mg。

Gómez-Ordó☒ez等 [25]依次采用冷水、热水、0.1 mol/L HCl溶液和2 mol/L KOH溶液提取,从食用红藻(Mastocarpus stellatus)中得到4 种多糖,测量4 种多糖的ABTS ・清除能力,得到最高的为热水提取组分,为20 μmol Trolox/g。所以,厚朴多糖的ABTS +・清除能力要高于食用红藻中的4 种多糖。

2.3.4 亚铁离子(Fe 2+)螯合力

一些过渡金属如Fe 2+、Cu 2+、Pb 2+、Co 2+等能促使ROS的产生,其中Fe 2+是最强的促氧化剂,能导致脂质过氧化体的产生 [26];菲咯嗪能与Fe 2+形成在562 nm波长处有吸收峰的Fe 2+-菲咯嗪复合物,当加入抗氧化剂后,该吸收值减弱,并在一定范围内呈线性关系,可以反映样品的亚铁离子(Fe 2+)螯合力 [27]

在一定浓度范围内(7.8、15.6、31.3、62.5、125、250 μmol/L),EDTA的Fe 2+螯合率与浓度呈线性关系(y = 0.378+9.633x,决定系数R 2为0.971 9,校正后决定系数 为0.966 3),由该方程可求出厚朴多糖的Fe 2+螯合力为(0.38±0.02) μmol EDTA/mg。

Zheng Yi等 [28]采用超声辅助方法从东方栓菌(Trametes orientalis)中提取了粗多糖并经DEAE cellulose-52色谱柱纯化得到主成分PTOP,当质量浓度为2.0、5.0 g/L时,Fe 2+螯合力分别为(47.49±2)%和(90.84±3)%。Castro等 [29]从真菌Caripia montagnei中得到了富含多糖的提取物,当多糖质量浓度为4 000 mg/mL时,多糖Fe 2+螯合率达到95%。

关于多糖螯合Fe 2+的机理至今未见系统阐述,但Kazazica等 [30]研究表明山萘酚螯合Cu 2+和Fe 2+是通过羰基(C=O)功能团完成的;也有研究者证实如某物质含2 个或2 个以上如下基团:—OH、—SH、—COOH、—PO 3H 2、C=O、—NR 2、—S—和—O—,并能进行有效地配置,就会具有金属螯合能力 [31];对槲皮素螯合金属的机理也证明这一点 [32]。因此,推测多糖螯合Fe 2+的机理也是由于具有某些上述功能团,但具体的作用原理还需进一步研究。

2.3.5 铁离子FRAP

FRAP常用作检测样品的还原力。以Trolox为标准品,测定浓度分别为5、10、20、40、80、160 μmol/L的FRAP值,计算线性回归方程,得到的方程为y=0.001 5x—0.001(决定系数R 2为0.994 1,校正后决定系数 为0.993 0)。而厚朴多糖的FRAP为(2.19±0.31)μmol Trolox/mg。

多糖具有较强的还原力,其中一个原因是因为能提供电子,另一个原因是具有大量重复的—OH,能阻止Fe 3+转化为Fe 2+[19]。Mateos-Aparicio等 [33]依次用0.05 mol/L NaOH、1 mol/L溶液和4 mol/L KOH溶液从豆渣的乙醇不溶物中提取出3 种多糖0.05MSF、1MSF、4MSF,对其还原力进行评价,3 种多糖的FRAP值分别为(25.72±2.5)、(11.38±0.24)、(10.71±0.18) μmol Trolox/g,由此可知厚朴多糖的FRAP值大于豆渣中提取的多糖。

3 结 论

本研究采用单因素试验和Box-Behnken试验对厚朴多糖的提取工艺进行了优化,得到的最佳工艺是pH 7.3、液固比32∶1(mL/g)、提取温度78 ℃、提取时间139 min,厚朴多糖的提取率最高,达3.47%;并对工艺进行了验证,提取率达3.35%~3.52%,与理论值3.47%相符。说明该工艺对生产实践具有很好的指导作用。

体外抗氧化活性结果表明,厚朴多糖具有较强的超氧阴离子自由基、DPPH自由基和ABTS ・清除能力,较高的Fe 2+螯合力以及FRAP值,以标准品为参照,5 项指标分别为(18.72±2.12) μmol VC/mg、(0.59±0.05) μmol Trolox/mg、(0.57±0.04) μmol Trolox/mg、(0.38±0.02) μmol EDTA/mg和(2.19±0.31) μmol Trolox/mg。因此,厚朴多糖具有很好的抗氧化药物或食品的开发前景。

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Extraction and Antioxidant Activities of Polysaccharides from Magnolia offi cinalis Rehd et Wils Barks

JIANG Ning 1′LIU Xiaopeng 1′2′*′CHEN Fang 1′YU Changfa 1′LE Dongliang 3′DING Zhenguo 3′WU Hao 2
(1. School of Biological Science and Technology Hubei Institute for Nationalities Enshi 445000′China; 2. Postdoctoral Research Station Nanjing University of Chinese Medicine Nanjing 210023′China; 3. Nanjing Tongrentang Hongze Chinese Herbal Science and Technology Co Ltd.′Hongze 223200′China)

Abstract:In this study we investigated the optimization of polysaccharides extraction from the dried barks of Magnolia offi cinalis Rehd et Wils by response surface methodology (RSM based on Box-Behnken design and measured the antioxidant activities of the extracted polysaccharides by superoxide anion radical scavenging′1′1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH・) scavenging′2′2’-azino-bis(3-ethylbenzthiazoline-6-sulfonic acid (ABTS +・) radical scavenging Fe 2+chelating activity as well as Ferric reducing antioxidant power (FRAP assays The results indicated that the optimal extraction conditions for polysaccharides from Magnolia offi cinalis Rehd et Wils were obtained as follows pH′7.3; liquid-to-solid ratio′32:1 (mL/g); temperature′78 ℃; and extraction time′139 min Under these conditions the yield of polysaccharides was 3.35%-3.52%. The extracted polysaccharides exhibited powerful antioxidant activities The radical scavenging activities against superoxide anion DPPH and ABTS +・ radicals Fe 2+chelating activity and FRAP value were (18.72 ± 2.12) μmol ascorbic acid equivalent (AAE)/mg′(0.59 ± 0.05) μmol Trolox equivalent (TE)/mg′(0.57 ± 0.04) μmol TE/mg′(0.38 ± 0.02) μmol EDTA-2Na equivalent (EE)/mg and (2.19 ± 0.31) μmol TE/mg respectively.

Key words:Magnolia officinalis Rehd et Wils.; polysaccharides extraction response surface methodology antioxidant activity

中图分类号:TS201.1

文献标志码:A

文章编号:1002-6630(2015)06-0012-06

doi:10.7506/spkx1002-6630-201506003

收稿日期:2014-07-03

基金项目:国家自然科学基金地区科学基金项目(81460573);“十二五”国家科技支撑计划项目(2011BAI04B04);江苏省“企业博士后集聚计划”项目(2011033);2013年湖北省战略性新兴(支柱)产业人才培养(生物工程)项目

作者简介:姜宁(1968—),女,副教授,硕士,研究方向为天然产物。E-mail:jiangn888@163.com

*通信作者:刘晓鹏(1971—),男,副教授,博士,研究方向为天然产物。E-mail:18913386031@189.cn