杨玉娈，袁美兰，陈丽丽，白春清，赵 利*，石 岭，苏 伟
（江西科技师范大学生命科学学院，国家淡水鱼加工技术研发分中心（南昌），江西 南昌 330013）
摘 要：研究超声波辅助法提取河蚬水溶性蛋白的工艺。以水溶蛋白的提取率为考察指标，以料液比、提取时间、提取温度和超声功率为考察因素，采用响应面法对河蚬水溶性蛋白提取工艺条件进行优化设计，并对其进行抗氧化研究。结果表明：最佳河蚬水溶性蛋白提取工艺条件为料液比1∶20、提取时间23 min、提取温度48 ℃、超声功率920 W，此条件下河蚬水溶性蛋白提取率达到最大值，为67.70%。其中，提 取时间和超声功率对河蚬水溶蛋白提取率的影响显著。超声波的空化和振动作用可以促进细胞的破碎，使目标产物与溶剂充分混合，增大提取率，缩短提取时间，对河蚬中水溶性蛋白的提取具有很大意义。河蚬提取液具有较强的清除1′1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基、超氧阴离子自由基的能力和较强的铁离子还原能力，而清除羟自由基的能力较弱。
关键词：河蚬；水溶性蛋白；超声波；提取；抗氧化
河蚬（Corbicula fluminea），俗称沙蜊和蜊潦，属于瓣腮纲、真瓣鳃目、异齿亚目、蚬科、蚬属，是双壳类软体动物 [1]。它生长速度快、繁殖能力强、养殖产量大、资源丰富，分布于淡水或咸淡水的江河、湖泊及入海口，原产于我国，现广泛存在于世界各地水域。
河蚬营养丰富，味道鲜美，具有很高的食用价值和保健作用，作为中药材，具有开胃、通乳、明目、利尿、去湿毒、治疗肝病、麻疹、退热、止咳化痰和解酒等功效 [2]。近年来，人们研究还发现河蚬含有很多具有生物活性的糖蛋白，这是一类由糖类和蛋白质或多肽以共价键连接而形成的结合蛋白 [3]，具有抗肿瘤、免疫活性、抗氧化、抗炎和抗血栓等生物活性 [4-5]。祝雯等 [6]从河蚬水溶性蛋白中分离纯化获得碱性糖蛋白CFp-a，发现其对体外培养人肝癌细胞BEL7404生长具有抑制作用。Huang Yingtang等 [7]发现河蚬的乙酸乙酯抽提物对HL-60、u937和HePGZ细胞有抑制作用，并能引起HL-60的细胞凋亡。庄平等 [8]发现河蚬中含有丰富的多不饱和脂肪酸，具有预防心脑血管疾病、增强记忆力和抗癌等多种特殊生理功能。邱乒乒等 [9]研究发现，河蚬的甲醇或乙酸乙酯萃取物对肝癌细胞株的抑制作用。河蚬是一种滤食性的动物，对高浓度的有机物污染物 [10]、重金属等淡水中常见污染物反应灵敏，并对于中、低浓度的污染具有相当高的蓄积能力，因此河蚬可以作为水环境中的污染物尤其是重金属污染物的监测指示生物。河蚬对有毒物质的吸收和降解机制主要依赖于体内存在的金属硫蛋白，同时体内的相关蛋白和缩氨酸也能对重金属产生抑制作用 [11-14]。
超声波是物质介质中的一种弹性机械波，具有波长较短和能量集中的特点。超声振动引起的与媒质的相互作用主要有热作用、机械作用和空化作用。热作用可使组织内部的温度瞬间升高，加速有效成分的溶出，并且不改变成分的性质。机械作用可在液体中形成有效地搅动与流动，破坏介质的结构，粉碎液体中的颗粒，能达到普通低频机械搅动达不到的效果。空化作用可导致细胞在溶剂中随瞬时产生的空化泡崩馈而破裂，以便溶剂渗透到细胞内部，而使细胞中的化学成分溶于溶剂之中。超声波技术已广泛应用于黄酮类 [15]、多糖 [16]、生物碱 [17]、鸟苷 [18-20]、蛋白质 [21]和油脂 [22]等的提取。
河蚬蛋白和多糖具有一定的清除自由基功能，自由基是人体在生命活动过程中发生生物化学反应的中间产物，在正常情况下，自由基的产生和清除处于动态平衡，但是当处于氧应激状态产生自由基的量超出清除系统的能力时，过量的自由基会给机体造成不可逆转的氧化损伤，从而加快衰老，诱发心血管疾病、癌症和糖尿病等诸多疾病 [23]。因此，如何清除自由基，防止氧化对生物体细胞和组织的损伤受到了普遍关注。适当的补充外源性抗氧化剂可以提高机体抗氧化水平，维持生物体的氧化还原平衡，抵御自由基的损害，帮助机体抵御疾病。本实验利用超声波技术辅助提取河蚬中水溶性蛋白并研究了其抗氧化活性，有助于提高农产品资源的精深加工水平和增值转化效率，既有较高的理论价值也有较大的社会经济效益，具有广阔的生产应用前景。
1.1 材料、试剂与仪器
新鲜河蚬，壳长1.5～2.5 cm采于鄱阳湖水域。
1′1-二苯基-2-三硝基苯肼（1′1-diphenyl-2-picrylhydrazyl radical，DPPH）、三吡啶吖嗪 美国Sigma公司；邻菲 罗啉 国药集团化学试剂有限公司。
HF-2B超声循环提取机 北京弘祥隆生物技术股份有限公司；JJ-2高速组织捣碎机 上海标本模型厂；TDL-5A离心机 上海菲恰尔分析仪器有限公司；JML60胶体磨 温州市七星乳品设备厂。
1.2 方法
1.2.1 原料处理
鲜活河蚬吐砂2 d后，热烫剥壳取肉，组织捣碎机捣碎后用胶体磨匀浆。
1.2.2 河蚬肉成分的测定
水分含量：参照GB 5009.3—2010《食品中水分的测定》；蛋白质含量：参照GB 5009.5—2010《食品中蛋白质的测定》；灰分含量：参照GB 5009.4—2010《食品中灰分的测定》；总糖含量：参照GB/T 9695.31—2008《肉制品：总糖含量的测定》。
1.2.3 河蚬水溶性蛋白的超声提取
1.2.3.1 料液比对河蚬水溶性蛋白提取率的影响
准确称取5 份河蚬匀浆，每份30 g，分别加入300、450、600、750 mL和900 mL蒸馏水，即料液比分别为1∶10、1∶15、1∶20、1∶25和1∶30（g/mL）。设定温度50 ℃、超声波功率400 W、提取20 min，5 000r/min离心20 min，取上清液测定蛋白质含量，每个水平分别重复3 次。
1.2.3.2 提取时间对河蚬水溶性蛋白提取率的影响
准确称取5 份河蚬匀浆，每份30 g，加入750 mL蒸馏水，在温度50 ℃、超声波功率400 W的条件下分别提取10、15、20、25 min和30 min，5 000r/min离心20 min，取上清液测定蛋白质含量，每个水平分别重复3 次。
1.2.3.3 提取温度对河蚬水溶性蛋白提取率的影响
准确称取5 份河蚬匀浆，每份30 g，加入750 mL蒸馏水，设定超声波功率400 W，温度分别为30、40、50、60 ℃和70 ℃，提取25 min，5 000r/min离心20 min，取上清液测定蛋白质含量，每个水平分别重复3 次。
1.2.3.4 超声功率对河蚬水溶性蛋白提取率的影响
准确称取5 份河蚬匀浆，每份30 g，加入750 mL蒸馏水，设定温度50 ℃，超声波功率分别为200、400、600、800 W和1 000 W，提取25 min，5 000r/min离心20 min，取上清液测定蛋白质含量，每个水平分别重复3 次。
1.2.4 响应面试验设计
应用Box-Behnken试验设计原理，在单因素试验确定的最佳试验因素水平的基础上进行响应面试验，采用Design Expert v7.1.6软件对试验结果进行优化以及分析。
1.2.5 河蚬水溶性蛋白提取率的测定
提取液经旋转蒸发浓缩测定其总糖和总蛋白含量，方法同1.2.2节，按式（1）计算河蚬水溶性蛋白提取率。
式中：c 1为离心前提取液中蛋白质含量；c 2为离心后上清液中蛋白质含量。
1.2.6 提取液抗氧化性的测定
1.2.6.1 DPPH自由基清除率的测定
DPPH在有机溶剂中是一种稳定的自由基，其乙醇溶液呈深紫色，在可见光区最大吸收峰为517 nm [24]，当DPPH溶液中加入自由基清除剂时，孤对电子被配对，吸收消失或减弱。其原理是通过分子中1 个稳定的DPPH自由基与抗氧化剂提供的1 个电子配对结合，使DPPH的特征紫色消失 [25-26]。DPPH自由基清除活性的测定参照Yuan [27]、Li Xiaolan [28]等的方法并稍作修改。取经旋转蒸发浓缩的河蚬提取液2 mL于试管中加入2 mL的DPPH溶液（0.1 mmol/L 0.004%），轻轻振荡，使充分混匀，在避光环境下反应30 min，用分光光度计于517nm波长处测定吸光度。空白组为以水代替河蚬提取液，为了使实验更精确避免试剂对样品的干扰，设置样品干扰实验组以无水乙醇代替DPPH溶液。按式（2）计算DPPH自由基清除率。
式中：A 1为样品的吸光度；A 0为空白实验组的吸光度；A 2为样品干扰实验组的吸光度。
1.2.6.2 羟自由基（·OH）清除率的测定
·OH的反应时间短，半衰期为10 —9s左右，是进攻性最强的化学物质之一，·OH的清除其实是抗氧化物有效抑制了经Fenton反应后·OH的产生 [29]。其反应原理是用邻二氮菲-Fe 2＋氧化法检测，H 2O 2与二价铁离子发生Fenton反应生成·OH，·OH可把体系中邻二氮菲-Fe 2＋氧化成邻二氮菲-Fe 3＋，使在536 nm波长处的最大吸收峰减弱 [30-31]，通过紫外-可见分光光度计测定加入抗氧化剂前后吸光度变化计算自由基清除率。·OH清除率的计算如式（3）所示：
式中：A 1为样品的吸光度；A 0为空白对照，用双蒸水代替样品的吸光度；A 2为干扰实验，用双蒸水代替除样品以外的物质的吸光度。
1.2.6.3 铁离子还原力（ferric reducing antioxidant power，FRAP）的测定
制作FeSO 4标准曲线：将醋酸盐缓冲液（0.3 mol/L、pH 3.7）、氯化铁溶液（0.02 mol/L）和三吡啶吖嗪溶液（0.0l mol/L），用0.04 mol/L的盐酸溶液配制，以10∶1∶1的体积比混匀，获FRAP试剂。取0.00、0.05、0.10、0.15、0.20、0.25、0.30mL FeSO 4溶液 （1.0 mmol/L）于7 支试管中，分别加水至1.0mL，再分别加入5.0 mL FRAP试剂。混匀反应体系，37 ℃水浴10 min，用分光光度计在593 nm波长处测吸光度 [32]。以FeSO 4的物质的量为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制FeSO 4标准曲线。
样品的测定：取1 mL样品于试管中，再加入5 mL的FRAP试剂，振荡混匀并在37 ℃条件下水浴10 min，用分光光度计测定593 nm波长处的吸光度。以蒸馏水代替样品做空白调零；以蒸馏水代替氯化铁溶液做干扰实验吸光度记做A 2；样品的吸光度为A 1；样品抗氧化能力的（FRAP值）是以每毫克样品达到相同吸光度（A 1—A 2）所需FeSO 4的物质的量表示。
1.2.6.4 超氧阴离子自由基（O 2 —·）清除率的测定
采用邻苯三酚自氧化法测定O 2 —·清除活性。取超声提取后的上清液分别稀释到相应的质量分数（分别按1∶10、1∶20、1∶30、1∶40、1∶50、1∶60稀释）得到样品溶液，取2.6 mL Tris-HCl缓冲溶液（pH 8.20，0.05 mol/L，用2 mmol/L乙二胺四乙酸配制）与0.2 mL样品溶液混合，振荡混匀并于25 ℃保温10 min，最后加入25 ℃预热过的邻苯三酚溶液0.2 mL（3 mmol/L，用10 mmol/L HCl溶液配制）迅速摇匀后倒入比色皿中，用分光光度计在321 nm波长处测定一次吸光度，每隔30 s测定一次3 min后停止，计算邻苯三酚的自氧化速率 [33-34]，根据邻苯三酚的自氧化速率计算抑制率，用式（4）计算清除O 2 —·清除率：
式中：V 0为对照管吸光度随时间的变化率；V S为样品管吸光度随时间的变化率。
2.1 河蚬肉基础成分
经测定，河蚬肉中蛋白质含量为6.87%，总糖含量为3.37%，水分含量为89.02%，灰分含量3.37%。去除水分含量以干质量计河蚬肉中的蛋白质为62.57%，总糖含量为30.69%。所以河蚬肉中有丰富的蛋白质和糖。
2.2 超声波辅助提取河蚬水溶蛋白的单因 素试验结果
2.2.1 料液比对河蚬水溶性蛋白提取率的影响
图1 料液比对河蚬水溶性蛋白提取率的影响
Fig.1 Effects of solid to liquid ratio on the extraction yield of watersoluble proteins from Corbicula fl uminea
由图1可以看出，水溶性蛋白提取率随着提取液用量的增加逐渐增大，当料液比为1∶25（g/mL）时，达到最大值；与料液比为1∶20之后的试验结果无显著性差异，即料液比为1∶20以后，随着提取液用量的增加，蛋白质提取率的变化不显著。这是因为提取液用量增大，河蚬匀浆与水的接触面积增大，提高了蛋白质扩散速度，使蛋白提取率提高。而当料液比超过1∶20，蛋白质分子之间的吸附作用、蛋白质分子与水之间的扩散作用趋于平衡，导致蛋白溶出率无显著变化。因此，在本试验条件下，适宜料液比为1∶20。
2.2.2 提取时间对河蚬水溶性蛋白提取率的影响
图2 提取时间对河蚬水溶性蛋白提取率的影响
Fig.2 Effects of extraction time on the extraction yield of water-soluble proteins from Corbicula fl uminea
由图2可以看出，随着超声时间的延长，河蚬水溶性蛋白的提取率在10～20 min之间显著增大，超过20 min增大缓慢，当超声时间为20 min时，提取率达到最大值，之后延长时间提取率的增加不明显。这是因为在超声时间低于20 min时，随着超声波处理时间的延长，超声波空化作用增强，使细胞破碎程度增大，加速了细胞内部水溶性蛋白的溶出速度，蛋白提取率增大；当超声时间超过20 min以后，可能是由于细胞破碎到一定程度，水溶性的蛋白质的提取率也达到平衡。所以，考虑到节约资源和成本选择适宜超声时间为20 min。
2.2.3 提取温度对河蚬水溶性蛋白提取率的影响
图3 提取温度对河蚬水溶性蛋白提取率的影响
Fig.3 Effects of extraction temperature on the extraction yield of water-soluble proteins from Corbicula fl uminea
由图3可以看出，在温度30～50 ℃范围内，随着温度升高，水溶性蛋白提取率增大显著，当温度为50 ℃时，蛋白提取率达到最大值，超过50 ℃蛋白质的提取率略微下降，这是因为随着温度的升高，蛋白质分子的运动速度加快，有利于蛋白质分子分离出来，而温度超过50 ℃，蛋白质可能部分发生凝胶作用而沉淀，使提取率下降。所以选择适宜提取温度为50 ℃。
2.2.4 超声功率对河蚬水溶性蛋白提取率的影响
图4 超声功率对河蚬水溶性蛋白提取率的影响
Fig.4 Effects of ultrasound power on the extraction yield of watersoluble proteins from Corbicula fl uminea
由图4可以看出，在超声功率小于800 W时，水溶性蛋白的提取率呈现显著的升高趋势，当超声功率为800 W时，蛋白质的提取率达到最大值。这是因为随着超声波功率的增大，空化作用和机械作用越强烈，分子扩散速度也就越大 [32]，蛋白质分子渗出越快，蛋白溶出量增大；而当超声功率达到1 000 W时，蛋白质的提取率无显著变化，并且在高功率提取时对仪器的损耗较大。因此，选择800 W为最佳提取功率。
2.3 超声波提取河蚬水溶性蛋白响应面试验结果
根据单因素试验结果，选择对蛋白质提取率影响较大的3 个因素：提取温度、提取时间和超声功率为考察对象，以蛋白质的提取率为指标，采用Design Expert v7.1.6软件进行响应面试验。试验设计及结果如表1所示。
表1 超声波提取河蚬水溶蛋白响应面试验设计及结果
Table1 Experimental design and results for response surface analysis
试验号A提取温度/℃B提取时间/minC超声功率/WY蛋白质提取率/% 1—1（40）—1（15）0（800）56.49 21（60）—1060.20 3—11（25）061.66 4 1 1 0 62.22—10（20）—1（600）52.71 6 1 0—158.46 5 7—101（1 000）65.87 8 1 0 1 58.53 90（50）—1—153.13 1001—1163.49 110—1165.04 1201166.50 1300067.49 1400066.35 1500066.24 1600066.35 1700066.34
表2 响应面二次模型方差分析
Table2 Analysis of variance for the developed regression model
注：**.影响极显著（P＜0.01）；*.影响显著（P＜0.05）。
方差来源平方和自由度方差F值P值显著性模型357.12939.6928.820.000 1** A提取温度0.910.90.650.446 0 B提取时间45.17145.1732.80.000 7** C超声功率99.05199.0571.92＜0.000 1** AB2.4812.481.80.221 5 AC42.84142.8431.100.000 8** BC19.8119.814.380.006 8** A 292.2192.266.95＜0.000 1** B 29.8819.887.180.031 6* C 232.59132.5923.660.001 8**残差9.6471.38失拟项7.3332.444.230.098 8纯误差2.3140.58总和366.8516
由表2方差分析结果表明，温度、时间和功率3 个因素方差分析显示，时间和功率均对提取率具有极显著的影响，温度影响不显著，3 个因素影响大小排序为功率＞时间＞温度；交互相中，提取温度与超声功率交互项和提取时间与超声功率交互项对提取率影响极显著。二次项中，温度和功率项均影响极显著。说明响应值Y的变化相当复杂，各个具体的试验因素对响应值提取率的影响不是简单的线性关系，而是二次关系。利用Design Expert软件对该模型进行分析建立二次响应面回归模型为：Y=—261.71＋6.34A＋5.50B＋0.26C—0.016AB—0.001 6AC—0.002 2BC—0.047A 2—
0.061 B
2—6.95×10
—5C
2，该模型回归项P值小于0.01，失拟项P值大于0.05，说明回归效果高度显著，失拟项不显著，表明该方程拟合3 个参数与提取率之间的关系是可行的；且该模型R
2=97.37%，
=93.99%，说明该模型与实验拟合良好，自变量与响应值之间线性关系显著，可用于该反应的理论推测。
图5为固定超声功率为800 W的情况下，不同反应温度和反应时间条件下河蚬水溶性蛋白提取率的变化情况。在超声时间15～25 min时变化步长为2 min；超声温度40～60 ℃时变化步长为5 ℃的等高线图可以看到，提取时间不变，河蚬水溶性蛋白的提取率随着提取温度升高呈现先增后减的趋势。以25 min为例，提取温度在40～50 ℃之间，河蚬水溶性蛋白的提取率逐渐增大；反应温度升高至50 ℃左右，河蚬水溶性蛋白提取率达到较大值；但当反应温度再升高，河蚬水溶性蛋白提取率反而下降；提取温度不变时，随着反应时间的延长，河蚬水溶性蛋白的提取率逐渐增大。
图5 温度和时间对河蚬蛋白提取率影响的响应曲面和等高线图
Fig.5 Response surface and contour plots showing the effects of extraction temperature and time on the extraction yield of Corbicula fl uminea proteins
图6 超声功率和温度对河蚬蛋白提取率影响的响应曲面和等高线图
Fig.6 Response surface and contour plots showing the effects of extraction temperature and ultrasound power on the extraction yield of Corbicula fl uminea proteins
图6为固定超声时间为20 min的情况下，不同反应温度和超声功率下河蚬水溶性蛋白提取率的变化情况。在超声功率600～1 000 W，变化步长为80 W；超声温度为40～60 ℃，变化步长为5 ℃的等高线图中可以看到，提取时间不变，河蚬水溶性蛋白的提取率随着提取温度升高呈现先增后减的趋势。以超声功率为800 W为例，温度在40～50 ℃之间，河蚬水溶性蛋白的提取率逐渐增大；反应温度增大至50 ℃左右，河蚬水溶性蛋白提取率达到较大值；但当提取温度再升高，河蚬蛋白提取率反而下降；提取温度保持不变，随着超声功率的增大，河蚬水溶性蛋白的提取率逐渐增大。
图7 超声功率和时间对河蚬水溶性蛋白提取率影响的响应曲面和等高线图
Fig.7 Response surface and contour plots showing the effects of extraction time and ultrasonic power on the extraction yield of Corbicula fl uminea proteins
图7 为固定温度为50 ℃的情况下，不同反应时间和超声功率下河蚬水溶性蛋白提取率的变化情况。在超声功率为600～1 000 W，变化步长为80 W；超声时间为15～25 min，变化步长为2 min的等高线图中可以看到，河蚬水溶性蛋白的提取率和超声功率以及超声时间呈正相关。
综合考虑各种因素的相互作用，通过软件分析，得出最优提取条件为：时间23 min、温度48 ℃、超声功率920 W，在此条件下河蚬水溶性蛋白的提取率为67.83%。经实验验证，此最优条件下河蚬水溶性蛋白的提取率67.70%，预测值与实验值的相对偏差在0.19%左右，证明在实践中应用该模型进行预测是可行的。
2.4 河蚬水溶性蛋白提取液抗氧化活性
以上最佳提取工艺所得提取液经5 000 r/min离心20 min，取上清液经旋转蒸发浓缩，测定其浓缩液中总蛋白含量为0.52%，总糖含量为0.57%。经冷冻干燥得河蚬干粉测其总蛋白含量为37.52%，总糖含量为41.22%。
2.4.1 DPPH自由基清除率
图8 不同质量分数提取液对DPPH自由基的清除作用
Fig.8 DPPH free radical scavenging capacity of Corbicula fl uminea extract
如图8所示，随着提取物质量分数的增大，对DPPH自由基的清除能力逐渐增大，在提取物质量分数为0.054%～0.09%范围内，对DPPH自由基的清除率显著增大。当提取物质量分数大于0.09%之后，提取液对 DPPH自由基的清除能力增加缓慢，对实验结果进行方差分析表明，各质量分数之间清除DPPH自由基能力的差异均显著，在一定质量分数范围内清除能力与质量分数呈正相关。
2.4.2 ·OH清除率
图9 不同质量分数提取液对·OH的清除作用
Fig.9 Hydroxyl radical scavenging capacity of Corbicula fl uminea extract
如图9所示，随着提取物质量分数的增大，对·OH的清除率先增大后减小，河蚬提取物清除·OH的能力并不表现出剂量（质量分数）-效应关系。提取物质量分数小于0.034%时，随着质量分数的增大，对·OH的清除作用逐渐增大，当提取物质量分数为0.034%时，河蚬提取液清除·OH的能力达到最大值（26.33%），之后·OH清除能力随着质量分数的增加而减弱。对实验结果进行方差分析表明，质量分数为0.023%和0.045%时无显著差异。
2.4.3 铁离子还原力
根据FeSO 4的标准曲线获得的线性方程为y= 0.003 7x＋0.008 3（R=0.999 5）。提取物质量分数对铁离子的还原力如图10所示，在593 nm波长处吸光度越高表明河蚬提取物的还原能力越强，随着质量分数的增大，吸光度明显增大，说明河蚬提取物对铁离子还原力的大小与其质量分数存在明显的依赖关系。
图10 不同质量分数提取液的还原力
Fig.10 Reducing power of Corbicula fl uminea extract
2.4.4
·清除率
图11 不同质量分数提取液对
·的清除作用
Fig.11 Superoxide anion radical scavenging activity of Corbicula fl uminea extract
如图11所示，河蚬提取物对
·的清除能力随质量分数的增大呈先增后减趋势。当质量分数为0.034%时清除率达到最大值为68.44%，质量分数继续增大，
·的清除率则呈下降趋势。统计分析表明，质量分数为0.034%时，河蚬提取物的
·的清除率显著高于其他质量分数。
以蛋白质提取率为指标，通过单因素试验确定超声提取河蚬水溶蛋白的料液比、温度、时间、超声功率的最适范围。通过Box-Behnken试验得到提取率与温度（A）、时间（B）、功率（C）关系的回归模型，回归方程为：提取率=—261.71＋6.34A＋5.50B＋0.26C—0.016AB—0.0016AC—0.0022BC—0.047A
2—0.061B
2—6.95×10
—5C
2。超声提取河蚬水溶蛋白的最佳提取工艺为：料液比1∶20、提取时间23 min、提取温度48 ℃、超声功率920 W，在此条件下提取率达到最大值为67.70%。河蚬提取液具有较强的清除DPPH自由基、
·的能力和较强的铁离子还原能力，而清除·OH的能力较弱。
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Water-Soluble Proteins from Corbicula fl uminea Optimization of Ultrasound-Assisted Extraction Process by Response Surface Analysis and Antioxidant Potential
YANG Yuluan YUAN Meilan CHEN Lili BAI Chunqing ZHAO Li*′SHI Ling SU Wei
(National R&D Branch Center for Freshwater Fish Processing College of Life Science Jiangxi Science and Technology Normal University Nanchang 330013′China)
Abstract：Ultrasound-assisted extraction was adopted to extract water-soluble proteins (WSP from Corbicula fl uminea The optimization of four extraction parameters including solid to liquid ratio extraction time extraction temperature and ultrasound power for the enhanced yield of water-soluble proteins was carried out using Box-Behnken design (BBD and response surface methodology (RSM). Moreover the antioxidant pot ential of WSPs from Corbicula fl uminea was investigated The optimal extraction conditions that provided maximum WSP yield (67.70%) were determined as follows solid to liquid ratio′1:20; extraction time′23 min extraction temperature′48 ℃; and ultrasonic power′920 W The analysis of variance (ANOVA showed that the effects of extraction time and ultrasound power on WSP yield were significant The cells were broken more significantly by ultrasonic cavitation and vibration to fully expose the target product to the solvent accordingly increasing the extraction efficiency and shortening the extraction time Thus the application of ultrasonic is of great significance for water-soluble protein extraction The scavenging activity against 1′1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH and superoxide anion radicals and ferric ion reducing power of the extracts were strong but the hydroxyl radical scavenging activity was weak.
Key words：Corbicula fl uminea proteins ultrasound extraction antioxidant activity
中图分类号：TS254.4
文献标志码：A
文章编号：1002-6630（2015）06-0096-07
doi：10.7506/spkx1002-6630-201506018
收稿日期：2014-07-09
基金项目：南昌市农业科技支撑计划项目（洪财企[2012]80号）；江西省教育厅科技重点项目（GJJ12582）
作者简介：杨玉娈（1989—），女，硕士研究生，研究方向为食品化学。E-mail：yangyuluan1@126.com
*通信作者：赵利（1967—），女，教授，博士，研究方向为食品化学。E-mail：lizhao618@hotmail.com