黄鳝鱼骨多肽制备及其抗氧化活性

贾韶千,李艳霞

(江苏食品药品职业技术学院食品与营养工程学院,江苏 淮安 223003)

摘 要:以黄鳝鱼骨为原料,选用不同蛋白酶对其进行酶解,以1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基清除率为指标,得到了具有较高抗氧化活性的黄鳝鱼骨多肽。通过单因素试验和响应面分析优化得到酶解黄鳝鱼骨制备多肽的最佳工艺条件为:选用木瓜蛋白酶,底物质量浓度40 mg/mL、酶添加量8 000 U/g、酶解温度59.2 ℃、pH 5.8、酶解时间4.1 h,在此条件下得到的黄鳝鱼骨多肽DPPH自由基清除率为90.85%。通过不同的体外抗氧化指标对黄鳝鱼骨多肽的抗氧化活性进行测定,结果发现黄鳝鱼骨多肽具有良好的抗氧化活性,随着多肽质量浓度的升高,其抗氧化活性不断增强,表现出良好的量效关系。

关键词:黄鳝鱼骨;多肽;抗氧化活性

黄鳝(Monopterus albus),隶属硬骨鱼纲辐鳍亚纲、合鳃目合鳃科黄鳝属温热带淡水鱼类,俗称鳝鱼、田鳝或田鳗,亦名长鱼、血鱼、罗鱼、无鳞公子等 [1-2]。黄鳝肉嫩味鲜,营养价值较高。黄鳝作为众多菜品的主要原料,其肉、血、皮、骨也有一定的药用价值,是典型的药食同源食品。

胶原多肽是胶原蛋白经过蛋白酶水解得到的具有特殊生理活性的生物活性肽,分子质量约3~20 ku [3]。近年来,已有学者对不同鱼种进行研究,通过不同的方法提取得到鱼骨胶原蛋白,经过进一步加工处理,开发制备出多种具有生理功能的活性多肽,主要有抗氧化活性肽、降压肽、抗菌肽、抗肿瘤活性肽以及免疫调节肽等 [4-7]。Nagai等 [8]利用0.5 mol/L的醋酸从金枪鱼、海鲈鱼的鱼骨及鱼翅中提取得到了胶原蛋白,并对其性质进行了分析。Duan等 [9]以鲤鱼鱼骨和鳞为原料,采用酸法提取得到了胶原蛋白,并进一步对其变性温度、氨基酸组成等进行了分析研究。杨露等 [10]采用现代生物酶解技术及响应面设计方法,优化马面鱼骨胶原多肽的制取工艺,并分析其理化特性及抗氧化功能性。结果发现胶原多肽酶解液的抗氧化效果在质量浓度为60 mg/mL时和同质量浓度谷胱甘肽的抗氧化活性相当,在25 mg/mL质量浓度下的马面鱼骨胶原多肽液的羟自由基(·OH)和1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基的清除率分别高达95.98%和97.36%,具有良好的抗氧化性。赵玲等 [11]以鳕鱼骨为原料,采用热水提取法提取胶原蛋白,并采用中性蛋白酶、复合蛋白酶、酸性蛋白酶和胃蛋白酶分别进行酶解制备鳕鱼骨胶原蛋白肽。研究结果表明4 种蛋白酶制备的鳕鱼骨胶原蛋白肽对DPPH自由基、超氧阴离子自由基(O 2 ·)和·OH 3 种自由基均具有较好的清除能力,其中对·OH的清除能力最强且有较好的量效关系。由于蛋白肽螯合钙稳定性好、吸收率高。许多学者以鱼骨为原料水解制取多肽,再与钙盐反应制得多肽螯合钙 [12-14]

黄鳝是我国重要的烹饪食材,淮扬名菜“软兜长鱼”就是以黄鳝为主要制作原料,作为江苏省淡水养殖的主要品种之一,黄鳝每年的消费量巨大。据统计,江苏省每年黄鳝的消费量超过万吨,所产生的黄鳝鱼骨就有上千吨。这些黄鳝鱼骨通常作为废弃物直接扔掉,或以非常低廉的价格处理给养殖场或饲料厂,造成严重的资源浪费。因此,通过对黄鳝鱼骨进行系统的开发研究,生产出具有广阔市场前景的产品,可以有效减少黄鳝资源的浪费,显著增加黄鳝的附加值。本实验通过现代生物技术对黄鳝鱼骨进行酶解,得到具有较高抗氧化活性的黄鳝鱼骨多肽,为进一步开发黄鳝鱼骨功能产品提供理论基础。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

黄鳝鱼骨,购于江苏省淮安市城南农贸市场。

碱性蛋白酶(酶活力为98.62 U/mg) 北京东华强盛生物技术有限公司;胰蛋白酶(酶活力为243.67 U/mg)、胃蛋白酶(酶活力为2 863.75 U/mg)、木瓜蛋白酶(酶活力为57.26 U/mg)、风味蛋白酶(酶活力为2 462.13 U/mg)北京索莱宝科技有限公司。

石油醚、三氯乙酸(trichloroacetic acid,TCA)、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、三氯高铁、铁氰化钾、硫氰酸铵、硫酸亚铁、邻苯三酚、30%过氧化氢溶液 南京化学试剂有限公司;DPPH 日本WAKO公司;亚油酸德国Sigma公司;还原型谷胱甘肽、硫代巴比妥酸(thiobarbituric acid,TBA)、水杨酸、氯化亚铁、菲洛嗪 国药集团化学试剂有限公司。

1.2 仪器与设备

LGJ-25冷冻干燥机 北京四环科学仪器厂;BS-210S电子天平、PP-20-P11型pH计 赛多利斯科学仪器有限公司;FW100型高速万能粉碎机 天津市泰斯特仪器有限公司;DK2-2型、DK-S26型电热恒温水浴锅上海精宏实验设备有限公司;TU-1800PC型紫外-可见分光光度计 北京普析通用仪器有限责任公司;TGL-IGC高速台式离心机 上海安亭科学仪器厂;2-16K型冷冻高速离心机 德国Sigma公司;XW-80A微型漩涡混合仪 上海沪西分析仪器厂;电热鼓风干燥箱 南京盈鑫实验仪器有限公司;GRP-9270型隔水式恒温培养箱上海森信实验仪器有限公司。

1.3 方法

1.3.1 黄鳝鱼骨粉的制备

将黄鳝鱼骨剪成3 cm左右的小段,去除油脂,置于真空冷冻干燥机中进行干燥;然后通过万能粉碎机对黄鳝鱼骨进行粉碎,过40 目筛,制备得到黄鳝鱼骨粉。

1.3.2 蛋白酶的筛选

配制质量浓度为20 mg/mL的黄鳝鱼骨粉悬浮液,分别加入碱性蛋白酶、胰蛋白酶、胃蛋白酶、木瓜蛋白酶和风味蛋白酶,酶添加量为6 000 U/g,混匀后分别在每种蛋白酶的最适宜温度和pH值条件下振荡酶解5 h,95 ℃灭酶10 min,3 000 r/ min离心15 min,取上清液测定酶解液的DPPH自由基清除率,选择出最合适的蛋白酶。

1.3.3 酶解工艺优化

通过上述单酶实验,筛选出最适蛋白酶进行酶解试验,选择酶添加量、pH值、酶解温度和酶解时间4 个因素,以DPPH自由基清除率为指标,采用单因素和响应面试验对酶解工艺进行优化。

1.3.3.1 单因素试验

在酶种类确定的情况下,影响蛋白质水解的因素有底物质量分数、酶添加量、pH值、酶解温度、酶解时间等 [15]。其他试验条件固定,分别考察底物质量浓度(10、20、30、40、50、60 mg/mL)、蛋白酶添加量(4 000、5 000、6 000、7 000、8 000、9 000 U/g)、pH值(5.0、5.5、6.0、6.5、7.0、7.5)、酶解温度(40、45、50、55、60、65 ℃)和酶解时间(1、2、3、4、5、6 h)对酶解效果的影响,做3 次平行实验,实验结果取平均值。

1.3.3.2 响应面试验

在单因素试验的基础上,选择酶添加量、pH值、酶解温度和酶解时间4 个因素进行响应面试验。

1.3.4 抗氧化活性研究

1.3.4.1 DPPH自由基清除能力的测定

配制0.1 mmol/L的DPPH溶液(以95%的乙醇溶解DPPH)。称取一定量的黄鳝鱼骨酶解产物(干粉),用去离子水配成不同浓度的样品溶液。取黄鳝鱼骨酶解产物样品溶液2.0 mL,加入DPPH溶液2.0 mL,混合均匀后,在常温下避光反应30 min,高速离心机10 000 r/min离心10 min,在517 nm波长处测吸光度(A 1),空白组为2.0 mL 95%的乙醇溶液代替DPPH溶液加入2.0 mL去离子水,在517 nm波长处测定其吸光度(A 2),对照组为2.0 mL DPPH溶液加上2.0 mL去离子水代替样品,在517 nm波长处测定其吸光度(A 3),并以等体积去离子水和95%乙醇混合液空白调零 [16-17]。按以下公式计算DPPH自由基清除率。

1.3.4.2 金属离子螯合能力的测定

分别称取适量黄鳝鱼骨酶解物溶解于蒸馏水中,配成一定浓度的样品溶液。取0.5 mL的黄鳝鱼骨酶解液,加入1 mL 20 μmol/L FeCl 2,混合均匀,然后加入1 mL 0.5 mmol/L菲洛嗪溶液,振荡均匀,在室温下静置10 min,在562 nm波长处测定吸光度(A 样品),以等体积去离子水代替样品溶液作为参照测定吸光度(A 参照[18-19]。金属离子螯合率按下式计算。

1.3.4.3 还原能力的测定

吸取黄鳝鱼骨酶解液2 mL,加入2 mL磷酸盐缓冲液(0.2 mol/L,pH 6.6),然后加入质量分数为1%的K 3FeCN 6溶液2 mL,混合均匀后置于50 ℃水浴下保持20 min,然后加入10%的TCA溶液2 mL,混合均匀,置于离心机中3 000 r/min离心10 min。取上清液2 mL,加入2 mL去离子水和0.4 mL 0.1%的FeCl 3溶液,振荡混匀后置于50 ℃水浴下保持10 min,体系溶液由黄色变为蓝色,在700 nm波长处测定吸光度。以去离子水作为空白,吸光度越大,说明抗氧化能力越强 [20]

1.3.5 酶活力的测定

采用Folin-酚法对蛋白酶的活力进行测定 [21]

1.3.6 水解度的测定

采用甲醛滴定法进行水解度的测定 [22]

1.4 数据分析

采用Design Expert 8.0对响应面试验结果进行分析。

2 结果与分析

2.1 蛋白酶的筛选

由于蛋白酶具有底物特异性、作用位点专一性的特点 [23],因此不同蛋白酶对黄鳝鱼骨的水解程度不同,且酶解产物的功能性质也有所不同。本实验选用碱性蛋白酶、胰蛋白酶、胃蛋白酶、木瓜蛋白酶和风味蛋白酶5 种蛋白酶进行酶解实验,在各种酶的推荐温度和pH值下进行酶解,记录每种蛋白酶酶解的进程曲线,并以酶解产物清除DPPH自由基的能力进行评价。

图1 不同蛋白酶酶解效果
Fig.1 Hydrolysis efficiency of Monopterus albus bone by different proteases

由图1可知,随着酶解时间的增加,DPPH自由基清除率呈现上升趋势,当酶解时间在4 h左右时,DPPH自由基清除率最高。由酶解进程曲线可以看出,木瓜蛋白酶的DPPH自由基清除能力最强,在酶解4 h左右达到最高。风味蛋白酶和碱性蛋白酶次之,胰蛋白酶最差。因此选择木瓜蛋白酶进行酶解试验。

2.2 单因素试验

2.2.1 底物质量浓度对酶解效果的影响

图2 底物质量浓度对黄鳝鱼骨多肽酶解效果的影响
Fig.2 Effect of substrate concentration on hydrolysis efficiency of Monopterus albus bone by papain

如图2所示,随着底物质量浓度的增加,黄鳝鱼骨酶解产物对DPPH自由基的清除能力增强,当底物质量浓度为40 mg/mL时,酶解产物对DPPH自由基的清除能力达到最大值,底物质量浓度继续增大时,酶解产物对DPPH自由基的清除能力开始出现下降趋势。这是因为底物质量浓度较低时,只有一部分酶与底物结合生成中间产物,随着底物质量浓度增加,中间产物增多。而底物质量浓度较大时,酶分子都已与底物结合生成中间产物,底物质量浓度虽然再增加,但已无有利的酶与之结合。因此,最适底物质量浓度为40 mg/mL左右。

2.2.2 酶添加量对酶解效果的影响

如图3所示,随着酶添加量的增加,酶解产物对DPPH自由基的清除能力增强,这是因为酶添加量增加,底物反应越彻底,在酶添加量达到7 000 U/g时,对DPPH自由基的清除能力最强。当酶添加量继续增加时,底物已经充分酶解,酶解产物对DPPH自由基的清除能力不再随着酶添加量的增多而增强,反而下降,这可能是因为生成的多肽被再次酶解导致的。因而选择酶添加量在7 000 U/g左右进行响应面试验。

图3 酶添加量对黄鳝鱼骨多肽酶解效果的影响
Fig.3 Effect of enzyme dosage on hydrolysis efficiency of Monopterus albus bone by papain

2.2.3 pH值对酶解效果的影响

图4 pH值对黄鳝鱼骨多肽酶解效果的影响
Fig.4 Effect of initial pH on hydrolysis efficiency of Monopterus albus bone by papain

如图4所示,当pH值为6.0时,酶解产物对DPPH自由基的清除能力达到最大。在pH 5.0~6.0的范围内,随着pH值的升高,酶解产物对DPPH自由基的清除能力逐渐升高;pH值超过6.0后,随着pH值的升高,酶的活性逐渐降低,酶解产物对DPPH自由基的清除能力也逐渐降低。因此,最佳pH值为6.0。

2.2.4 酶解温度对酶解效果的影响

图5 酶解温度对黄鳝鱼骨多肽酶解效果的影响
Fig.5 Effect of temperature on hydrolysis efficiency of Monopterus albus bone by papain

如图5所示,随着温度的升高,酶解效果越好,酶解产物对DPPH自由基的清除能力越高。当酶解温度超过60 ℃时,酶解产物对DPPH自由基的清除能力下降,这是因为温度过高会使酶失活、产物形成方向发生改变 [24],从而导致酶解效果降低。因此,最佳酶解温度为60 ℃。

2.2.5 酶解时间对酶解效果的影响

图6 酶解时间对黄鳝鱼骨多肽酶解效果的影响
Fig.6 Effect of hydrolysis time on hydrolysis efficiency of Monopterus albus bone by papain

如图6所示,随着酶解时间的延长,酶解产物对DPPH自由基的清除能力越来越高,酶解效果越好。当酶解时间达到4 h时,对DPPH自由基的清除能力达到最大,随后缓慢降低。这可能是因为酶解时间延长,酶解反应中一些肽段被再次酶解,导致酶解效果降低。综合考虑,选择酶解时间为4 h左右。

2.3 响应面试验

表2 响应面试验设计与结果
Table 2 Experimental design and results for response surface analysis

试验号X 1酶添加量/Y DPPH自由基清除率/% 16 0006.560468.103 27 0006.060482.662 38 0006.560461.341 47 0006.565456.235 58 0006.065474.934 68 0006.055477.763 77 0006.065353.475 86 0005.560464.239 97 0006.060483.352 106 0006.055468.724 116 0006.060574.796 128 0006.060383.904 137 0006.055370.794 147 0006.555456.994 158 0006.060586.664 167 0005.555467.827 178 0005.560486.457 187 0005.560366.309 197 0006.065563.342 207 0006.060480.972 217 0006.055567.206 227 0006.560568.034 236 0006.065459.271 247 0005.560572.381 257 0006.560361.893 266 0006.060370.449 277 0005.565449.818(U/g)X 2pHX 3酶解温度/℃X 4酶解时间/h

在单因素试验基础上,选用木瓜蛋白酶,以酶添加量、pH值、酶解温度、酶解时间4 个因素,分别筛选3 个水平进行响应面优化试验,以黄鳝鱼骨多肽对DPPH自由基的清除率为评价指标,分析黄鳝鱼骨酶解最优工艺参数。响应面试验设计与结果见表2。通过Design Expert 8.0软件分析,得出二次多项回归方程为:Y=82.329+ 5.457X 1-2.869X 2-4.353X 3+2.133X 4-7.245X 1X 2+ 1.656X 1X 3-0.397X 1X 4+4.313X 2X 3+0.017X 2X 4+3.364X 3X 4+ 0.460 -11.667 -13.323 -4.125

通过F检验来判定回归方程中各变量对响应值影响的显著性,当P值越小时,相应变量的显著性越高。由表3可知,通过对回归方程的显著性分析得出,X 1、X 2、X 3、X 4、X 1X 2、X 2X 3、X 3X 4项的F检验呈显著性,模型的P值小于0.000 1,说明模型显著,且失拟项不显著(P=0.161 2)。试验因子对响应值不是简单的线性关系,二次项和交互项与响应值都有很大的关系,说明方程的拟合是充分的,回归方程也是高度显著的,相关系数R 2=0.968 0,说明预测值与实测值之间具有较高的相关性; =0.930 8,说明该模型能解释93.08%的响应值的变化,仅有总变异的6.92%不能用此模型来解释,所以此模型能够描述木瓜蛋白酶对黄鳝鱼骨粉的酶解变化规律,用该模型能较好地优化试验方案。

表3 回归方程显著性检验
Table 3 Significance test for each term in the fitted regression model

项目平方和自由度均方F值P值模型2 630.326 814187.880 525.967 7<0.000 1 X 1357.313 41357.313 449.385 8<0.000 1 X 298.791 1198.791 113.654 30.003 1 X 3227.357 21227.357 231.424 00.000 1 X 454.609 1154.609 17.547 70.017 7 X 1X 2209.960 11209.960 129.019 40.000 2 X 2X 374.390 6174.390 610.281 80.007 5 X 2X 40.001 210.001 20.000 20.990 0 X 3X 445.259 3145.259 36.255 50.027 9 X1 1.128 111.128 10.155 90.699 9 X2 2725.946 71725.946 7100.336 1<0.000 1 2 X3 2946.655 41946.655 4130.841 1<0.000 1 294.745 7194.745 713.095 20.003 5残差86.821 8127.235 2失拟83.823 0108.382 35.590 30.161 2误差2.998 921.499 4总和2 717.148 626 X4 R 2=0.968 0R 2 adj=0.930 8

图7 pH值与酶解温度对黄鳝鱼骨多肽酶解效果的交互影响
Fig.7 Response surface plot showing the interactive effects of initial pH and temperature on hydrolysis efficiency of Monopterus albus bone

由图7可知,pH值与酶解温度的交互作用显著。pH值在5.5~6.5范围内,随着酶解温度的增加,黄鳝鱼骨多肽的DPPH自由基清除率呈先升后降的趋势。当pH值为5.9左右,酶解温度为58 ℃左右时,黄鳝鱼骨多肽的DPPH自由基清除率达到最高水平。

图8 pH值与酶解时间对黄鳝鱼骨多肽酶解效果的交互影响
Fig.8 Response surface plot showing the interactive effects of initial pH and hydrolysis duration on hydrolysis efficiency of Monopterus albus bone

由图8可知,pH值与酶解时间的交互作用也较为显著。当pH值固定不变时,随着酶解时间延长,黄鳝鱼骨多肽的DPPH自由基清除率先上升后下降,但变化不够显著;当酶解时间固定不变时,随着pH值的升高,黄鳝鱼骨多肽的DPPH自由基清除率变化呈现先上升后下降的趋势,且变化十分显著。在pH值在5.9左右,酶解时间在4 h左右时,黄鳝鱼骨多肽的DPPH自由基清除率达到最高。由此可以看出,pH值对黄鳝鱼骨多肽的DPPH自由基清除率的影响大于酶解时间。

采用Design Expert 8.0软件对试验结果进行分析,得到木瓜蛋白酶酶解黄鳝鱼骨的最佳工艺参数为:酶添加量为8 000 U/g、酶解温度为59.2 ℃、pH值为5.8、酶解时间为4.1 h,此时黄鳝鱼骨多肽的DPPH自由基清除率理论值可达到91%。按照此条件进行验证性实验,重复3 次并计算平均值,DPPH自由基清除率为90.85%,说明该模型可以较好地模拟和预测黄鳝鱼骨多肽的DPPH自由基清除率。

2.4 黄鳝鱼骨多肽抗氧化活性研究

2.4.1 DPPH自由基清除能力

图9 黄鳝鱼骨多肽对DPPH自由基的清除能力
Fig.9 DPPH radical clearance rate of Monopterus albus bone peptides

由图9可知,黄鳝鱼骨多肽和谷胱甘肽对DPPH自由基的清除能力均随其质量浓度上升呈现增强趋势。在低质量浓度范围内,随着质量浓度的增加,DPPH自由基的清除率升高明显,当质量浓度达到4.0 mg/mL时,对DPPH自由基的清除率增幅减慢。当黄鳝鱼骨多肽质量浓度为6.0 mg/mL时,对DPPH自由基的清除率可以达到90.5%,说明在实验考察的质量浓度范围内,黄鳝鱼骨多肽质量浓度和DPPH自由基的清除能力具有一定的量效关系,并且有良好的清除作用。

2.4.2 金属离子螯合能力

图10 黄鳝鱼骨多肽螯合FFee 22+的能力
Fig.10 Fe 2+-chelating capacity of Monopterus albus bone peptides

由图10可知,黄鳝鱼骨多肽和还原型谷胱甘肽对Fe 2+的螯合率随着其质量浓度的升高而增大,在实验考察的质量浓度范围内呈现一定的量效关系。当黄鳝鱼骨多肽质量浓度达到0.8 mg/mL时,螯合Fe 2+的能力增幅减慢。当质量浓度达到1.2 mg/mL时,对Fe 2+的螯合率接近62.9%左右,显示出较强的螯合Fe 2+的能力。

2.4.3 还原能力

图11 黄鳝鱼骨多肽的还原能力
Fig.11 Reducing power of Monopterus albus bone peptides

由图11可知,黄鳝鱼骨多肽和还原型谷胱甘肽的还原能力随着质量浓度的升高而增大,且增幅明显。黄鳝鱼骨多肽的质量浓度从3.0 mg/mL增加到6.0 mg/mL时,A 700 nm值由0.799增加到1.164。超过了质量浓度为3.0 mg/mL的谷胱甘肽的吸光度,显示出较强的还原能力。

3 3 结 论

通过单因素试验确定木瓜蛋白酶为酶解黄鳝鱼骨的最适蛋白酶,确定最佳底物质量浓度为40 mg/mL,选取酶添加量、酶解温度、pH值和酶解时间4 个因素进行响应面试验设计,最终得到酶解黄鳝鱼骨制备多肽的最佳工艺条件为:酶添加量8 000 U/g、酶解温度59.2 ℃、pH 5.8、酶解时间4.1 h;在此条件下得到的黄鳝鱼骨多肽DPPH自由基清除率为90.85%。通过DPPH自由基清除率、螯合金属离子能力和还原能力等体外抗氧化指标对黄鳝鱼骨多肽的抗氧化活性进行测定,黄鳝鱼骨多肽表现出良好的抗氧化活性,随着多肽质量浓度的升高,其抗氧化活性不断增强,表现出良好的量效关系。在本实验研究结果的基础上,可进一步开发黄鳝鱼骨多肽钙粉等功能性产品,为增加黄鳝产品附加值,提高黄鳝资源的利用率提供了理论依据。

参考文献:

[1] 王博文, 任天瑞, 董亚明, 等. 黄鳝血清转铁蛋白的提取及表征[J].过程工程学报, 2012, 12(1): 125-130.

[2] 郑慈英. 珠江动物志[M]. 北京: 科学出版社, 1989: 301-302.

[3] TAKAHASHI M, MORIGUCHI S, IKENO M, et al, Studies on the ileum-contracting mechanisms and identification as a complement C3a receptor agonist of oryzatensin, a bioactive peptide derived from rice albumin[J]. Peptides, 1996, 17(1): 5-12. DOI:10.1016/0196-9781(95)02059-4.

[4] 宋茹, 冯婷立, 谢超. 海产小杂鱼抗氧化肽制备工艺[J]. 食品科学, 2011, 32(12): 29-33.

[5] ZHANG M X, WANG X C, LIU Y, et al. Isolation and identifi cation of fl avour peptides from Puffer fi sh (Takifugu obscurus) muscle using an electronic tongue and MALDI-TOF/TOF MS/MS[J]. Food Chemistry, 2012, 135(3): 1463-1470. DOI:10.1016/j.foodchem.2012.06.026.

[6] 杨立, 邹波, 李玓瓅, 等. 鱼鳞抗氧化肽的酶法制备工艺及特性[J].食品科学, 2011, 32(12): 115-119.

[7] 夏光华, 申铉日, 蔡锦红, 等. 三酶法制备罗非鱼鱼皮胶原蛋白抗氧化肽及活性研究[J]. 食品科学, 2012, 33(23): 175-179.

[8] NAGAI T, SUZUKI N. Isolation of collagen from fi sh waste materialskin, bone and fins[J]. Food Chemistry, 2000, 68(3): 277-281. DOI:10.1016/S0308-8146(99)00188-0.

[9] DUAN R, ZHANG J J, DU X Q, et al. Properties of collagen from skin, scale and bone of carp (Cyprinus carpio)[J]. Food Chemistry, 2009, 112(3): 702-706. DOI:10.1016/S0308-8146(99)00188-0.

[10] 杨露, 黄毅园, 丁利君, 等. 响应面法优化马面鱼骨多肽液酶解工艺分析及其性能研究[J]. 中国食品添加剂, 2012(增刊1): 118-124. DOI:10.3969/j.issn.1006-2513.2012.z1.025.

[11] 赵玲, 李亚, 刘淇. 鳕鱼骨胶原蛋白肽的抗氧化活性[J]. 食品与生物技术学报, 2013, 32(4): 425-429. DOI:10.3969/ j.issn.1673-1689.2013.04.015.

[12] 洪惠, 罗永康, 吕元萌, 等. 酶法制备鱼骨胶原多肽螯合钙的研究[J].中国农业大学学报, 2012, 17(1): 149-155.

[13] 吴燕燕, 李来好, 林洪, 等. 罗非鱼骨制备CMC活性钙的工艺及生物利用的研究[J]. 食品科学, 2005, 26(2): 114-117.

[14] 陆剑锋, 孟昌伟, 李进, 等. 斑点叉尾鱼骨胶原多肽螯合钙的制备及其特征[J]. 水产学报, 2012, 36(2): 314-320. DOI:10.3724/ SP.J.1231.2012.27739.

[15] 史军, 王金水, 蔡凤英, 等. 花生蛋白酶解条件及活性肽抗氧化特性研究[J]. 河南工业大学学报(自然科学版), 2006, 27(6): 29-33. DOI:10.3969/j.issn.1673-2383.2006.06.007.

[16] 李艳红. 鹰嘴豆蛋白酶解物的制备及其抗抗氧化肽的研究[D]. 无锡: 江南大学, 2008.

[17] 任娇艳. 草鱼蛋白源抗疲劳生物活性肽的制备分离及鉴定技术研究[D]. 广州: 华南理工大学, 2008.

[18] 张君慧. 大米蛋白抗氧化肽的制备、分离纯化和结构鉴定[D]. 无锡: 江南大学, 2009.

[19] 贾韶千. 银杏抗氧化肽的制备、结构鉴定及活性研究[D]. 南京: 南京林业大学, 2011.

[20] UDENIGWE C C, LU Y L, HAN C H. Flaxseed proteinderived peptide fractions: antioxidant properties and inhibition of lipopolysaccharide-induced nitric oxide production in murine macrophages[J]. Food Chemistry, 2009, 116(1): 277-284. DOI:10.1016/j.foodchem.2009.02.046.

[21] 许凤, 王长远. 响应面法优化物理辅助碱法提取米糠蛋白工艺[J]. 食品科学, 2014, 35(20): 11-16. DOI:10.7506/spkx1002-6630-201420003.

[22] 赵妍嫣, 邹利, 姜绍通. 响应面法优化猪骨粉酶解工艺[J]. 食品科学, 2014, 34(16): 77-81. DOI:10.7506/spkx1002-6630-201316016.

[23] 谢正军. 苜蓿叶蛋白和酶解物制备及其抗氧化肽的研究[D]. 无锡:江南大学, 2009.

[24] 麻成金, 黄伟, 黄群, 等. 复合酶法提取仿栗籽蛋白的工艺优化[J].食品科学, 2012, 33(20): 7-32.

Preparation and Antioxidant Activity of Monopterus albus Bone Peptides

JIA Shaoqian, LI Yanxia
(Institute of Food and Nutritional Engineering, Jiangsu Food and Pharmaceutical Science College, Huai’an 223003, China)

Abstract:In the present study, the preparation of DPPH radical scavenging peptides derived from enzymatic hydrolysates of Monopterus albus bone by different proteases was optimized using combination of single factor method and response surface methodology. The optimal hydrolysis conditions for Monopterus albus bone peptides were determined as follows: papain was the most suitable enzyme for the hydrolysis of Monopterus albus bone; the hydrolysis was allowed to proceed at 59.2 ℃ for 4.1 h at an initial pH of 5.8 with a substrate concentration of 40 mg/mL at an enzyme dosage of 8 000 U/g. The DPPH radical clearance rate of the resulting hydrolysate was 90.85%. In vitro antioxidant assays showed that Monopterus albus bone peptides had excellent concentration-dependent antioxidant activity.

Key words:Monopterus albus bone; peptides; antioxidant activity

DOI:10.7506/spkx1002-6630-201601024

中图分类号:TS254.1

文献标志码:A

文章编号:1002-6630(2016)01-0133-06

引文格式:

贾韶千, 李艳霞. 黄鳝鱼骨多肽制备及其抗氧化活性[J]. 食品科学, 2016, 37(1): 133-138. DOI:10.7506/spkx1002-6630-201601024. http://www.spkx.net.cn

JIA Shaoqian, LI Yanxia. Preparation and antioxidant activity of Monopterus albus bone peptides[J]. Food Science, 2016, 37(1): 133-138. (in Chinese with English abstract) DOI:10.7506/spkx1002-6630-201601024. http://www.spkx.net.cn

收稿日期:2015-02-21

基金项目:江苏淮安市科技平台项目(HAP201209);江苏省青蓝工程资助项目(苏教师[2014]23号)

作者简介:贾韶千(1983—),男,讲师,博士,主要从事食品活性物质分离与纯化研究。E-mail:qian12358@163.com