PCR-DGGE分析东北传统发酵酸菜中乳酸菌多样性

丛 敏,李欣蔚,武俊瑞,岳喜庆 *

(沈阳农业大学食品学院,辽宁 沈阳 110161)

摘 要:以传统自然发酵的酸菜为研究对象,采用聚合酶链式反应-变性梯度凝胶电泳(polymerase chain reactiondenatured gradient gel electrophoresis,PCR-DGGE)技术监测酸菜发酵过程中细菌的动态变化,计算不同发酵时间细菌的多样性指数,并对图谱特异性条带进行克隆、测序、构建系统发育树。结果表明:酸菜发酵第40天多样性指数达最高值,说明此时细菌种群多样性最高;发酵过程中含丰富的乳酸菌,主要的优势菌群为乳杆菌属,包括植物乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、短乳杆菌、干酪乳杆菌、棒状乳杆菌、戊糖乳杆菌、唾液乳杆菌以及Iwatensis乳杆菌。其中发酵前期的优势菌群为乳酸乳球菌和戊糖乳杆菌,而植物乳杆菌为发酵中后期的优势菌种。

关键词:酸菜;变性梯度凝胶电泳;多样性指数;乳酸菌;系统发育树

酸菜作为我国东北地区一种独特的传统乳酸蔬菜发酵制品,具有悠久的历史,其以营养丰富、酸鲜脆嫩、解腻开胃等特点深受广大群众的喜爱。酸菜自然发酵汁液中富含乳酸菌活菌,近年来由于乳酸菌特殊的生理活性和营养功能,日益受到人们的重视 [1-2]。很多研究学者对乳酸菌进行分离鉴定,但研究方法现在仍多沿用形态特征、生理生化反应等传统方法,该方法不仅实验周期长,而且不能对分离物种精确的鉴定、不能反映分离物间的系统发育关系、更不能获得微生物多样性的真正概貌,缺乏全面性、准确性及可靠性 [3-5]。自1993年Muyzer等 [6]首次将聚合酶链式反应-变性梯度凝胶电泳(polymerase chain reaction-denatured gradient gel electrophoresis,PCR-DGGE)引入微生物生态学领域以来,该技术已成为研究微生物遗传多样性和种群结构及其菌群差异的一种先进手段。现已广泛应用于食品领域,如监测食品微生物在时间及空间上的动态变化 [7-9]、鉴定功能微生物和病原菌 [10-12]、评价和控制食品质量 [13-14]等。本实验采用PCR-DGGE分子生物学技术,结合16S rDNA同源性分析及生物信息学手段,对传统自然发酵酸菜中乳酸菌进行全面系统研究,揭示不同时期的乳酸菌菌落结构的真实状态,挖掘丰富的微生物资源并确定不同发酵阶段的优势菌群,旨在为进一步深入研究和开发分离自然发酵酸菜中有益乳酸菌提供依据。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

大白菜、食盐 沈阳农业大学农贸市场。

Marker 宝生物工程(大连)有限公司;DNA提取试剂盒 美国Mo-Bio公司;PCR引物以及所用酶试剂北京宝杰罗生物科技有限公司;PMD19-T载体 日本TaKaRa公司。

1.2 仪器与设备

5804R高速冷冻离心机 德国Eppendorf公司;DYY-8C型稳流稳压电泳仪 上海越磁电子科技有限公司;PCR扩增仪、变性梯度凝胶电泳仪、凝胶成像分析系统、Dcode TM的基因突变检测系统 美国Bio-Rad公司。

1.3 方法

1.3.1 实验前处理

酸菜腌制过程:大白菜(去除黄叶、腐烂叶)→晾晒→开水漂烫(3~5 min)→入缸、压实→加入质量分数3%的淡盐水在室温条件下进行自然发酵,发酵时间为60 d。根据酸菜的传统发酵工艺进行自然发酵,分别采集酸菜第3、6、9、12、15、18、21、25、30、35、40、50、60天的发酵液(每组取3 个平行)作为研究对象,将采集的样品用无菌纱布过滤以去除发酵液中的杂质,并保存于-20 ℃,备用。

1.3.2 样品中总DNA的提取

将酸菜发酵液在-4 ℃,12 000 r/min条件下离心5 min,弃上清取沉淀,用DNA提取试剂盒提取样品中总DNA。

1.3.3 PCR扩增

以提取的总DNA为模板,采用16S rDNA V3区通用引物:338F:5′-ACTCCTACGGGAGGCAGCAG-3′;GC-534R:5′-CGCCCGCCGCGCGCGGCGGGCGG GGCGGGGGCACGGGGGG(ATTACCGCG GCT GCTGG)-3′,进行16S rDNA的PCR扩增,扩增产物片段长约250 bp。采用50 μL扩增体系,包括:10hPCR Buffer 5 μL、dNTP Mixture(各2.5 mmol/L)4 μL、引物338F(20 μmol/L)1 μL、引物534R(20 μmol/L)1 μL、模板DNA2.5 ng、TaKaRa rTaq酶(5 U/μL)0.25 μL、ddH 2O补至50 μL。反应参数:94 ℃预变性10 min,94 ℃变性1 min,55 ℃退火1 min(每个循环降低0.1 ℃),72 ℃延伸90 s,最终72 ℃延伸10 min,共30 个循环。PCR反应的产物用1.0%琼脂糖凝胶电泳检测 [15]

1.3.4 DGGE与条带测序

采用Bio-Rad公司Dcode TM的基因突变检测系统对样品DNA的PCR反应产物进行变性梯度凝胶电泳。采用的凝胶质量分数为8%,变性范围为30%~60%,电泳条件为150 V,420 min [16]。电泳结束后采用银染进行染色,将银染好的凝胶用扫描仪成像,得到PCR-DGGE图谱,并对特征性条带进行切胶,条带回收,回收的条带进行一次无GC-夹板的PCR扩增,扩增子与PMD19-T载体连接进行克隆,每个条带随机挑取3 个阳性克隆进行测序分析,将其菌液送北京宝杰罗生物科技有限公司测序。

1.4 数据分析与处理

将酸菜发酵液微生物群落DNA的PCR-DGGE图谱用Gel-Pro Analyzer 4.5软件进行处理,通过分析样品电泳条带的数目和亮度,来计算样品中微生物多样性指数和菌种相对数量的多少。根据各样品在DGGE图谱中的信息对其相似性进行聚类分析。其公式如下 [17]

式中:H为香农指数;D为丰富度指数;N i为样品DGGE图谱中第i条条带强度;N为该样品条带总强度;E H为均匀度指数;S为某个样品中所有条带数目的总和。

测得的序列登录美国国立生物技术信息中心(National Center for Biotechnology Information,NCBI)数据库进行BLAST同源性对比分析(http://www.ncbi.nlm. nih.gov/BLAST/)。采用Mega 4.1软件进行分析,构建系统进化树,分析亲缘关系及相似性。

2 结果与分析

2.1 细菌16S rDNA 的V3区PCR扩增

细菌16S rDNA 的V3区的PCR扩增产物经1.0%琼脂糖凝胶电泳后得到的电泳图见图1。以338F和534R为引物的扩增产物大小在250 bp左右位置,判断其为目的片段。

图1 酸菜样品16S rDNA的V3区的PCR扩增结果
Fig.1 PCR amplification results of 16S rDNA from sauerkraut samples

2.2 PCR扩增产物DGGE图谱分析

图2 酸菜样品细菌总DNA的DGGE图谱
Fig.2 DGGE profile of PCR-amplified 16S rDNA (V3) fragments from bacteria in sauerkraut samples

DGGE电泳条带的多少可以直观地反映样品中细菌菌落的遗传多样性,而条带的亮度则在一定程度上反映该种细菌数量的多少 [18]。从整个图谱(图2)结果来看,不同时期的发酵液具有较丰富的细菌多样性。发酵前期条带数量较少,而发酵中后期条带数量有所增加,说明随着发酵时间的延长,微生物数量与种类也发生了一定的变化。如泳道1在所有泳道中条带数量最少,且条带亮度较弱,表明酸菜在发酵第3天时细菌种类较少。随着发酵时间变化,图谱条带数目、各条带的强度和迁移率均存在一定程度的差异,表明不同发酵时期的优势菌群各不相同。如条带1强度最高,且在泳道3至泳道14中均发现条带1,表明该条带所对应的菌为酸菜发酵中后期的优势菌群,在发酵过程中起主导作用。

2.3 细菌种群多样性指数分析

根据电泳图谱中每条条带的信息,对各样品中的细菌多样性指数、丰富度指数和均匀度指数指标进行了综合分析。由表1可知,不同时期样品中细菌种群的香农多样性指数、丰富度指数都有较大的差异。第3、6天样品的多样性指数和丰富度指数较高可能是由于发酵前期原料引入的杂菌较多所致,之后随着乳酸菌数量的增加抑制了某些杂菌的生长,使其数值保持相对稳定,而第40天时达到最高值,分别为3.457和6.077,表明此时细菌种群多样性最高。这个结果与DGGE图谱的直观观测结果相符。

表1 不同样品细菌种群的多样性指数、均匀度指数及丰度指数
Table 1 Bacterial diversity indexes of sauerkraut samples

样品编号 香农指数 均匀度指数 丰富度指数1 3.410f0.056 1.121 0f0.011 0 5.807f0.661 2 3.114f0.002 0.937 8f0.011 3 5.150f0.410 3 2.778f0.016 0.765 8f0.002 5 4.434f0.576 4 2.739f0.054 0.773 4f0.004 9 4.222f0.401 5 2.937f0.075 0.820 1f0.001 3 4.889f0.737 6 3.110f0.035 0.974 4f0.003 6 4.914f0.293 7 2.836f0.038 0.852 1f0.001 5 4.222f0.630 8 2.992f0.116 0.866 6f0.004 6 4.914f0.535 9 3.296f0.122 1.039 0f0.003 0 5.627f0.338 10 2.962f0.173 0.878 6f0.007 4 4.667f0.315 11 3.068f0.084 0.860 2f0.001 2 5.347f0.605 12 3.457f0.071 1.132 0f0.007 0 6.077f0.487 13 3.035f0.073 0.990 9f0.000 9 4.467f0.442 14 3.060f0.050 0.969 5f0.007 1 4.678f0.293

2.4 DGGE指纹图谱聚类分析

图3 酸菜发酵液中细菌的DGGE指纹图谱聚类分析
Fig.3 Cluster analysis of DGGE profiles for bacteria communities of sauerkraut

在DGGE指纹图谱中,不同样品共有条带数目的多少可以反映不同样品之间细菌群落相似性,通过计算群落相似性系数得到细菌群落之间差异的信息。聚类分析类群的划分显示出不同酸菜样品中细菌组成之间的相似性和亲缘关系。由图3可知,图中横轴代表差异率,该值越小表明细菌种群结构的相似性越高。总体上看,所有样品之间的差异率较低,表明各样品细菌的种群结构均有较高的相似性。酸菜发酵前9 d(编号1~3)的差异率约为0.023,即其同源性为97.7%;发酵第12~35天(编号4~11)的同源性约为98.1%;而发酵第40~60天(编号12~14)的同源性约为96.6%。由此可以看出酸菜在每个发酵阶段具有极为相似细菌种群结构。

2.5 酸菜样品中乳酸菌PCR-DGGE条带测序结果分析

切取酸菜样品细菌16S rDNA的PCR-DGGE图谱中18 个优势条带,对其编号、切割、回收重新扩增、克隆后测序。并登录NCBI数据库进行BLAST同源性对比分析,比对结果如表2。采用邻接法(Neighbor-Joining)构建系统进化树,自展数(Boot Strap)为1 000(图4)。

表2 酸菜样品中乳酸菌PCR-DGGE条带测序结果
Table 2 Sequencing results for lactic acid bacterial PCR-DGGE bands

注:条带 4、5、9、11、13、14、16、18为非乳酸菌类细菌。

条带编号 克隆子编号 比例 NCBI比对结果 相似性 序列号1 1-2 2/3 植物乳杆菌 100 KP284304.1 2-1 1/3 鼠李糖乳杆菌 100 KR066434.1 2-2 1/3 短乳杆菌 100 KP773479.1 2-3 1/3 植物乳杆菌 99 AB618811.1 3 3-1 2/3 棒状乳杆菌 99 KP221642.1 3-2 1/3 植物乳杆菌 100 KP284304.1 7 7-1 2/3 唾液乳杆菌 100 AB911469.1 8 8-1 1/3 乳酸乳球菌 100 KJ781895.1 10 10-3 1/3 乳酸乳杆菌 99 KJ781895.1 12 12-1 3/3 戊糖乳杆菌 99 KR149355.1 15 15-1 1/3 红纤维乳杆菌 99 NR_114365.1 15-2 2/3 干酪乳杆菌 100 KR107062.1 17 17-2 1/3 戊糖乳杆菌 100 KP189214.1 2

所有序列与数据库中16S rDNA序列的相似性在99%~100%之间,根据NCBI比对结果,从自然发酵酸菜液中分离的乳酸菌属于乳杆菌属、乳球菌属,其中乳杆菌属为主要优势菌属,包括植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)、鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)、乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)、短乳杆菌(Lactobacillus brevis)、干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)、棒状乳杆菌(Lactobacillus coryniformis)、戊糖乳杆菌(Lactobacillus pentosus)、唾液乳杆菌(Lactobacillus salivarius)以及Iwatensis乳杆菌。发酵前期的优势菌群为L. lactis和L. pentosus,而L. plantarum为发酵中后期的优势菌种。自20世纪90年代开始,许多研究学者们开始对酸菜发酵过程中微生物进行研究 [19]。通过传统分离培养与形态学鉴定相结合方法已从发酵体系中检出分离到的常见乳酸菌包括L. plantarum、L. brevis、稍小乳杆菌(Lactobacillus minor)、发酵乳杆菌(Lactobacillus fermentum)、L. rhamnosus、耐酸乳杆菌(Lactobacillus acetotolerans)、L. casei和L. harbinensis等 [20-22]。通过传统分离与分子生态学技术鉴定相结合的方法研究发现,所分离的乳酸菌由乳杆菌属、片球菌属、明串珠菌属和魏斯氏菌属构成 [23]。所鉴定的乳杆菌属包括L. plantarum、L. brevis、罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri)和清酒乳杆菌(Lactobacillus sakei)、弯曲乳杆菌(Lactobacillus curvatus)、肠膜明串珠菌属(Leuconostoc mesenteroides)、L. fermentum等 [24-25]。本研究中发现的L. coryniformis、L. salivarius、L. pentosus、L. iwatensis在自然发酵酸菜中利用传统方法和分子生态学方法均并未分离到。

图4 酸菜中乳酸菌的系统发育树
Fig.4 Phylogenetic tree of lactic acid bacteria in sauerkraut

由图4可知,条带2-2与L. brevis具有较高的亲缘关系,序列相似性达98%;条带15-2与L. casei有较高的亲缘关系,序列相似性为100%;条带10-3、8-1与L. lactis有较高的亲缘关系,序列相似性为100%;条带1-2、17-2、3-2、12-1与L. plantarum和L. pentosus属于一类群,3-1、2-1、15-1、7-1与L. iwatensis、L. rhamnosus、L. coryniformis、L. salivarius属于一类群。

3 结 论

本实验采用16S rDNA结合PCR-DGGE技术对自然发酵酸菜发酵液中乳酸菌进行了多样性研究,结果表明,在酸菜发酵第40天时细菌多样性指数以及丰富度指数达最大值,分别为3.457和6.077,表明此时细菌种群多样性最高;所测序列与乳酸菌已知16S rDNA V3区序列的相似性高达99%~100%;同时酸菜发酵过程中含有丰富乳酸菌,主要的优势菌群为乳杆菌属,其中发酵前期的优势菌群为L. lactis和L. pentosus,L. plantarum为发酵中后期的优势菌种。本研究中发现的L. coryniformis、L. salivarius、L. pentosus、L. iwatensis在自然发酵酸菜中利用传统方法和分子生态学方法均并未分离到。这些结果直观展现出传统自然发酵酸菜中乳酸菌的多样性,为发掘优良乳酸菌发酵剂以及实现发酵酸菜产业的规模化、标准化提供了理论支持。

参考文献:

[1] 尼海峰, 邓冕, 冯月玲. 东北酸菜产业现状与发展对策[J]. 中国调味品, 2011, 36(6): 10-12. DOI:10.3969/j.issn.1000-9973.2011.06.003.

[2] 张杨, 孟祥晨. 自然发酵酸菜中乳杆菌的分离鉴定与多态性分析[J]. 中国乳品工业, 2009, 37(2): 19-22. DOI:10.3969/ j.issn.1001-2230.2009.02.004.

[3] 新乐, 朱扬玲, 蒋予箭, 等. PCR-DGGE法研究泡菜中微生物群落结构的多样性[J]. 中国食品学报, 2008, 8(3): 133-137. DOI:10.3969/ j.issn.1009-7848.2008.03.024.

[4] 岑璐伽, 唐善虎, 郝小倩, 等. DGGE技术及其在食品微生物研究中应用[J]. 粮食与油脂, 2012, 25(1): 9-12. DOI:10.3969/ j.issn.1008-9578.2012.01.004.

[5] 姚来斌, 孔保华, 李沛军, 等. PCR-DGGE技术及其在食品菌相分析中的应用[J]. 食品工业科技, 2013, 34(9): 377-381. DOI:10.13386/ j.issn1002-0306.2013.09.077.

[6] MUYZER G, de WAAL E C, UITTERLINDEN A G. Profiling of complex microbial populations by denaturing gradient gel electrophoresis analysis of polymerase chain reaction-amplified genes coding for 16S rRNA[J]. Applied and Environmental Microbiology, 1993, 59(3): 695-700.

[7] ZOI P, NICHOLAS C, GWEN F, et al. Comparison of the bacterial species diversity of spontaneous cocoa bean fermentations carried out at selected farms in Ivory Coast and Brazil[J]. Food Microbiology, 2011, 28(5): 964-973. DOI:10.1016/j.fm.2011.01.010.

[8] GONZÁLEZ-ARENZANA L, LÓPEZ R, SANTAMARÍA P, et al. Dynamics of lactic acid bacteria populations in Rioja wines by PCRDGGE, comparison with culture-dependent methods[J]. Applied Microbiology and Biotechnology, 2013, 97(15): 6931-6941. DOI:10.1007/s00253-013-4974-y.

[9] 袁雪林, 杨洁, 胡敏, 等. 新疆喀什地区传统发酵酸乳中乳酸菌多样性的初步分析[J]. 食品工业科技, 2015, 36(10): 202-204; 219. DOI:10.13386/j.issn1002-0306.2015.10.033.

[10] NIKOLIC M, TERZIC-VIDOJEVIC A, JOVCIC B, et al. Characterization of lactic acid bacteria isolated from Bukuljac, a homemade goat’s milk cheese[J]. International Journal of Food Microbiology, 2008, 122(1/2): 162-170. DOI:10.1016/ j.ijfoodmicro.2007.11.075.

[11] 毕水莲, 陈妙瑞, 张志刚, 等. Fla-DGGE法对食品中空肠弯曲菌和结肠弯曲菌的检测和分型[J]. 现代食品科技, 2010, 26(10): 1148-1152. DOI:10.3969/j.issn.1673-9078.2010.10.030.

[12] 徐晓东, 张孝卫, 杜雪, 等. 应用PCR-DGGE技术快速检测病原微生物的研究[J]. 中国卫生检验杂志, 2011, 21(5): 1058-1060.

[13] RANDAZZO C L, VAUGHAN E E, CAGGIA C. Artisanal and experimental Pecorino Siciliano cheese: microbial dynamics during manufacture assessed by culturing and PCR-DGGE analyses[J]. International Journal of Food Microbiology, 2006, 109(1/2): 1-8. DOI:10.1016/j.ijfoodmicro.2005.11.002.

[14] RANDAZZO C L, RIBBERA A, PITINO I, et al. Diversity of bacterial population of table olives assessed by PCR-DGGE analysis[J]. Food Microbiology, 2012, 32(1): 87-96. DOI:10.1016/j.fm.2012.04.013.

[15] 丁衬衬, 周艳红, 林凡云, 等. 转基因小麦田土壤细菌16S rDNA V3片段的DGGE分析[J]. 江苏农业学报, 2011, 27(1): 66-70. DOI:10.3969/j.issn.1000-4440.2011.01.012.

[16] 包秋华. 甘肃和四川省牦牛奶制品中乳酸菌的多样性研究[D]. 呼和浩特: 内蒙古农业大学, 2012: 20-25.

[17] 吴昊. 不同类型群落物种多样性指数的比较研究[J]. 中南林业科技大学学报, 2015, 35(5): 84-89. DOI:10.14067/j.cnki.1673-923x.2015.05.015.

[18] 张先琴. PCR-DGGE技术分析传统发酵蔬菜中微生物群落结构[D].雅安: 四川农业大学, 2012: 22-30.

[19] 杨洪岩, 李超, 刘通, 等. 传统东北酸菜发酵过程中的细菌动态及多样性[J]. 食品工业科技, 2015, 36(1): 154-159; 165. DOI:10.13386/ j.issn1002-0306.2015.01.024.

[20] 张晓春, 刘艳姿, 高大威, 等. 自然发酵酸菜汁中乳酸菌的分离鉴定及抑菌活性的分析[J]. 黑龙江畜牧兽医, 2010, 17: 132-134. DOI:10.13881/j.cnki.hljxmsy.2010.17.007.

[21] 栗永乐, 李秀丽, 李传娟, 等. 内蒙古东部地区农家酸菜中乳酸菌的分离与初步鉴定[J]. 食品工业, 2012, 33(11): 132-134.

[22] MARI M, YASUYUKI S, DONG H H, et al. Lactobacillus harbinensis sp. nov., consisted of strains isolated from traditional fermented vegetables ‘Suan cai’ in Harbin, Northeastern China and Lactobacillus perolens DSM 12745[J]. Systematic and Applied Microbiology, 2005, 28(8): 688-694. DOI:10.1016/j.syapm.2005.04.001.

[23] 燕平梅, 柴政, 薛文通, 等. 培养和非培养方法分析发酵白菜卤乳酸菌的多样性[J]. 微生物学报, 2009, 49(3): 383-388. DOI:10.3321/ j.issn:0001-6209.2009.03.016.

[24] 张鲁冀, 孟祥晨. 自然发酵东北酸菜中乳杆菌的分离与鉴定[J].东北农业大学学报, 2010, 41(11): 125-131. DOI:10.3969/ j.issn.1005-9369.2010.11.023.

[25] 武俊瑞, 李欣, 张苗, 等. 自然发酵酸菜汁中乳杆菌的分离鉴定[J].食品科学, 2012, 33(15): 191-194.

PCR-DGGE Analysis of Lactic Acid Bacteria Diversity of Chinese Traditional Sauerkraut in Northeast China

CONG Min, LI Xinwei, WU Junrui, YUE Xiqing *
(College of Food Science, Shenyang Agricultural University, Shenyang 110161, China)

Abstract:The traditional Chinese sauerkraut obtained by natural fermentation was analyzed by polymerase chain reactiondenatured gradient gel electrophoresis (PCR-DGGE) to monitor the dynamic change of lactic acid bacteria during the fermentation process. Meanwhile, the bacterial diversity index was calculated, and the representative bands were cloned and selected to be sequenced for the construction of a phylogenetic tree based on their sequences. The results indicated that the highest bacterial species diversity was found on the 40 thday of fermentation. Lactic acid bacteria was abundant during the fermentation process, and lactobacillus was the dominant population, including Lactobacillus plantarum, Lactobacillus rhamnosus, Lactobacillus brevis, Lactobacillus casei, Lactobacillus coryniformis, Lactobacillus pentosus, Lactobacillus salivarius, and Lactobacillus iwatensis. Lactococcus lactis and Lactobacillus pentosus were the predominant lactic acid bacteria in the early stage of fermentation, while Lactobacillus plantarum was the predominant strain in the middle and late stages.

Key words:Chinese sauerkraut; denatured gradient gel electrophoresis (DGGE); diversity index; lactic acid bacteria; phylogenetic tree

DOI:10.7506/spkx1002-6630-201607015

中图分类号:TS201.3

文献标志码:A

文章编号:1002-6630(2016)07-0078-05

引文格式:

丛敏, 李欣蔚, 武俊瑞, 等. PCR-DGGE分析东北传统发酵酸菜中乳酸菌多样性[J]. 食品科学, 2016, 37(7): 78-82. DOI:10.7506/spkx1002-6630-201607015. http://www.spkx.net.cn

CONG Min, LI Xinwei, WU Junrui, et al. PCR-DGGE analysis of lactic acid bacteria diversity of Chinese traditional sauerkraut in northeast China[J]. Food Science, 2016, 37(7): 78-82. (in Chinese with English abstract) DOI:10.7506/ spkx1002-6630-201607015. http://www.spkx.net.cn

收稿日期:2015-07-01

基金项目:国家自然科学基金面上项目(31370502);国家高技术研究发展计划(863计划)项目(2011AA100902)

作者简介:丛敏(1991—),女,硕士研究生,研究方向为动物性食品加工。E-mail:731716246@qq.com

*通信作者:岳喜庆(1966—),男,教授,博士,研究方向为动物性食品加工。E-mail:yxqsyau@126.com