±s。
华雨薇
1,2，李春阳
1,*，王 帆
1，刘晓林
3
（1.江苏省农业科学院农产品加工研究所，江苏 南京 210014；2.南京农业大学食品科技学院，江苏 南京 210095；3.徐州林泉绿色食品饮料厂，江苏 徐州 221711）
摘 要：目的：通过给小鼠灌胃不同剂量的蓝莓叶多酚，研究蓝莓叶多酚对小鼠血脂及肝脏组织的影响。方法：60 只健康昆明小鼠随机分为6 组，基础组、高脂模型组、蓝莓叶多酚低剂量组（50 mg/（kg·d））、蓝莓叶多酚中剂量组（150 mg/（kg·d））、蓝莓叶多酚高剂量组（300 mg/（kg·d））、立普妥阳性对照组（3 mg/（kg·d）），连续灌胃30 d，眼球取血，取出肝脏，测定血脂及肝脏指标。结果：灌胃50 mg/（kg·d）的蓝莓叶多酚，小鼠血清总胆固醇（total cholesterol，TC）、低密度脂蛋白胆固醇（low density lipoprotein cholesterol，LDL-C）水平较高脂模型组显著降低（P＜0.05），且肝脏中谷草转氨酶（glutamic oxalacetic transaminase，AST）活力较高脂模型组的（329.57±15.06） U/g pro下降了26.7%；当蓝莓叶多酚的剂量增加至150 mg/（kg·d）时，小鼠血清总胆固醇、甘油三酯（triglyceride，TG）、LDL-C水平显著低于高脂模型组（P＜0.05），高密度脂蛋白胆固醇水平（high density lipoprotein cholesterol，HDL-C）显著高于高脂模型组（P＜0.05），且肝脏中谷草转氨酶的含量较高脂模型组显著降低（P＜0.05）；当蓝莓叶多酚的剂量增加至300 mg/（kg·d）时，小鼠血清总胆固醇、甘油三酯及低密度脂蛋白胆固醇水平较高脂模型组显著降低（P＜0.05），高密度脂蛋白胆固醇水平较高脂模型组显著升高（P＜0.05），且肝脏指数由高脂模型组的（4.98±0.33）%降至（4.19±0.14）%，肝脏中的谷草转氨酶及谷丙转氨酶（alanine transaminase，ALT）的活力分别比高脂模型组的（329.57±15.06）、（354.31±23.31） U/g pro下降了32.15%和22.96%。结论：实验结果表明蓝莓叶多酚具有调节血脂及保护肝脏的功效。
关键词：蓝莓叶多酚；血脂；肝脏
目前，高血脂、脂肪肝的发病率逐年上升，根据社区慢性疾病调查发现高血脂、冠心病的发病率分别为33.1%和10.7% [1]；根据全国健康普查结果发现，大城市的脂肪肝的发病率高达15%，在全球3.5亿乙肝患者中我国约占1亿。用于降脂保肝的药物已有很多，但其存在潜在的副作用，因此从天然产物中获取安全的活性成分用于降脂保肝成为关注的焦点。植物多酚作为植物的次生代谢产物，属于天然的有机化合物，安全无毒。研究表明植物多酚具有预防心血管疾病 [2]、抗癌 [3-5]、降血脂 [6]、降血糖 [7]等功效。李建新等 [8]通过给小鼠连续灌胃35 d的苹果多酚发现总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白水平显著降低，高密度脂蛋白水平显著升高，且剂量越高，效果越显著。连冠等 [9]发现750 mg/（kg·d）的葡萄籽多酚可以显著降低总胆固醇（total cholesterol，TC）和甘油三酯（triglyceride，TG）水平，并且可以使小鼠主动脉全长斑块减少37%，有效预防动脉粥样硬化。
蓝莓又称越橘果，属杜鹃花科越橘属落叶或常绿灌木，多年生的浆果类果树，最早产于北美 [10]。我国对于蓝莓的研究起步相对较晚，始于20世纪80年代初 [11]。蓝莓中含有大量多酚类物质，有研究证明蓝莓多酚具有减肥降脂 [12-13]、防止心肌细胞死亡等功效 [14]，其可以干预HepG2细胞脂肪的积累，降低HepG2细胞的甘油三酯水平，对脂肪肝有防治作用 [15]。蓝莓叶作为蓝莓副产物，含有大量多酚类物质。李春阳等 [16]通过体外抗氧化实验发现蓝莓叶多酚具有较强的抗氧化活性，且抗氧化能力高于蓝莓果渣，但有关蓝莓叶多酚的降脂保肝作用的报道还比较少，因此该研究以小鼠为对象，通过建立高脂模型小鼠，研究蓝莓叶多酚对小鼠血脂及肝脏组织的影响，为开发天然降脂保肝保健品提供实验依据。
1.1 材料与试剂
蓝莓叶多酚（40%） 陕西森弗生物技术有限公司。
普通饲料、高脂饲料（基础饲料＋10%猪油＋1%胆固醇） 南京圣民科研动物养殖场；总胆固醇试剂盒、甘油三酯试剂盒、低密度脂蛋白胆固醇（low density lipoprotein-cholesterol，LDL-C）试剂盒、高密度脂蛋白胆固醇（high density lipoprotein-cholesterol，HDL-C）试剂盒、谷草转氨酶（glutamic oxalacetic transaminase，AST）试剂盒、谷丙转氨酶（alanine transaminase，ALT）试剂盒 南京建成生物有限公司。
1.2 实验动物
60 只清洁级（specific pathogen free，SPF）昆明小鼠，7 周龄，雌性，体质量20 g左右，购自南京圣民科研动物养殖场。
1.3 仪器与设备
Berthold LB941微孔板式多功能分析仪 德国Berthold Technologies公司；GTR16-2高速冷冻离心机北京时代北利离心机有限公司。
1.4 方法
60 只SPF级昆明小鼠（雌性、体质量20 g左右），控制室温25 ℃，相对湿度60%，自由饮食（基础饲料）饮水，每2 d换1 次垫料，饲养1周称质量后，随机分为6 组，分别为基础组、高脂模型组、蓝莓叶多酚低剂量组、蓝莓叶多酚中剂量组、蓝莓叶多酚高剂量组、立普妥阳性对照组。除基础组喂食普通饲料，其他各组均喂食高脂饲料。各组通过灌胃的方式给药，蓝莓叶多酚低、中、高各组剂量分别为50、150、300 mg/（kg·d），立普妥的剂量为3 mg/（kg·d） [17]。基础组和高脂模型组灌胃生理盐水。每天灌胃1 次，每次1 mL，每周称质量。连续灌胃30 d后，称质量，禁食不禁水24 h后称质量，眼球取血，处死小鼠，取出肝脏组织，称质量，制备10 g/100 mL匀浆液，按各试剂盒说明测定谷草转氨酶、谷丙转氨酶的含量。同时血液以3 000 r/min、4 ℃离心10 min，取上清液按试剂盒说明测定TC、TG、LDL-C及HDL-C水平。
1.5 数据统计及分析
采用SPSS 17.0统计软件进行数据统计分析。数据表示为
±s。
2.1 蓝莓叶多酚对小鼠体质量的影响
表1 蓝莓叶多酚对小鼠体质量的影响（
±s，n==1100）
Table 1 Effect of blueberry leaf polyphenols on body mass in mice (
± ss,, n = 1100))
注：同列小写字母不同表示差异显著（P＜0.05）。下同。
组别初始体质量/g最终体质量/g体质量增长率/%基础组23.53±0.38 a30.34±0.60 a29.34±3.85 a高脂模型组23.14±0.62 a33.25±1.36 b43.68±4.50 b蓝莓叶多酚低剂量组22.78±0.41 a31.12±0.96 ab36.71±3.88 ab蓝莓叶多酚中剂量组23.83±0.73 a30.57±1.01 ab28.53±3.84 a蓝莓叶多酚高剂量组24.16±0.52 a30.83±1.29 ab27.27±2.80 a立普妥阳性对照组22.76±0.67 a30.64±1.13 ab34.69±3.52 ab
由表1可知，连续灌胃30 d后，高脂模型组小鼠的体质量明显高于各组小鼠的体质量，其增长的比例显著高于基础组，这是由于高脂饲料在基础饲料的基础上添加了10%的猪油和1%的胆固醇，因此高脂模型组体质量增加速率较基础组快。蓝莓叶多酚中、高剂量组的体质量增长率显著低于高脂模型组（P＜0.05），说明蓝莓叶多酚可以有效地控制体质量的增长。
2.2 蓝莓叶多酚对小鼠血脂水平的影响
表2 蓝莓叶多酚对小鼠血脂水平的影响（x±s，n==1100）
Table 2 Effect of blueberry leaf polyphenols on serum lipids in mice (
± ss,, n = 1100))
mmol/L
组别TCTGLDL-CHDL-C基础组1.47±0.02 ab1.05±0.12 bc0.85±0.15 a1.20±0.11 bc高脂模型组2.30±0.09 e2.52±0.23 a2.80±0.27 b0.71±0.11 a蓝莓叶多酚低剂量组1.96±0.13 d2.35±0.25 a0.79±0.20 a0.96±0.13 ab蓝莓叶多酚中剂量组1.82±0.10 cd1.71±0.23 b1.42±0.24 a1.16±0.25 bc蓝莓叶多酚高剂量组1.59±0.09 ac1.18±0.05 bc1.03±0.18 a1.23±0.07 bc立普妥阳性对照组1.22±0.12 b0.79±0.08 c1.36±0.28 a1.51±0.10 c
由表2可知，高脂饲料喂养的小鼠血清TC、TG、LDL-C水平较基础组均显著升高（P＜0.05），HDL-C水平显著低于基础组（P＜0.05），说明高脂模型小鼠诱导成功。
从TC水平看，与高脂模型组相比，蓝莓叶多酚3 个剂量组的TC水平都显著降低（P＜0.05），蓝莓叶多酚高剂量组与低剂量组差异显著（P＜0.05），说明蓝莓叶多酚剂量越高，降低TC水平效果越好；与阳性对照组相比，蓝莓叶多酚3 个剂量组TC水平显著高于阳性对照组，说明低、中、高剂量的蓝莓叶多酚虽可以降低小鼠血清TC水平，但未能与药物达到同等效果。
从TG水平看，与高脂模型组相比，蓝莓叶多酚3个剂量组的TG水平都显著降低（P＜0.05），并且中、高剂量组的TG水平显著低于低剂量组（P＜0.05）；与阳性对照组相比，蓝莓叶多酚高剂量组的TG水平与阳性对照组差异不显著（P＞0.05），说明高剂量的蓝莓叶多酚与药物在降低TG水平方面达到同等效果。
从LDL-C水平看，与高脂模型组相比，蓝莓叶多酚各个剂量组的LDL-C水平显著降低（P＜0.05），且各个剂量组的LDL-C水平与阳性对照组没有显著性差异（P＞0.05），说明蓝莓叶多酚各个剂量组在降低LDL-C水平方面与药物无差异。
从HDL-C水平看，蓝莓叶多酚中、高剂量组的HDL-C水平显著高于高脂模型组（P＜0.05），说明蓝莓叶多酚能升高小鼠HDL-C水平；与阳性对照组相比，差异不显著（P＞0.05），说明与药物达到同等效果。
2.3 蓝莓叶多酚对小鼠肝脏指标的影响
表3 蓝莓叶多酚对小鼠肝脏指标的影响（x =10）
Table 3 Effect of blueberry leaf polyphenols on liver parameters in mice (x ± s, = 10)
组别肝脏指数/%AST活力/（U/g pro）ALT活力/（U/g pro）基础组3.80±0.20 a265.44±20.27 b261.84±25.03 bc高脂模型组4.98±0.33 c329.57±15.06 a354.31±23.31 a蓝莓叶多酚低剂量组4.53±0.25 bc241.53±20.19 b308.46±14.31 ac蓝莓叶多酚中剂量组4.45±0.17 ac257.92±11.59 b288.25±14.94 abc蓝莓叶多酚高剂量组4.19±0.14 ab223.61±15.66 b272.97±35.07 bc立普妥阳性对照组3.97±0.26 ab146.81±9.14 c270.10±28.51 c
由表3可知，蓝莓叶多酚高剂量组与阳性对照组的肝脏指数、AST以及ALT活力较高脂模型组都显著下降（P＜0.05），且低、中剂量组的AST活力也显著低于高脂模型组（P＜0.05），说明蓝莓叶多酚对小鼠肝脏有一定的保护作用；蓝莓叶多酚高剂量组的肝脏指数与ALT活力与阳性对照组相比差异不显著（P＜0.05），说明高剂量蓝莓叶多酚对小鼠的肝保护作用能达到药物同等效果。
高脂血症是动脉粥样硬化和冠心病等心血管疾病重要危险因素，因此降低血脂水平对心血管疾病有着重要意义。本研究结果显示，给小鼠灌胃蓝莓叶多酚可显著降低血清TC、TG、LDL-C水平，显著升高HDL-C水平，说明蓝莓叶多酚有显著的降脂作用。这一结果与熊何健等 [18]研究的给高脂膳食小鼠添加葡萄籽多酚，其TC、TG水平较不添加葡萄籽多酚的高脂膳食的小鼠低，葡萄籽多酚能显著降低血脂水平一致。郭苗等 [19]研究表明给高脂小鼠灌胃200～800 mg/（kg·d）的酒花多酚，其TC、TG、LDL-C水平显著降低，HDL-C水平显著升高，本研究结果与其一致。蓝莓叶多酚与葡萄籽多酚、酒花多酚等都是植物多酚，该研究结果也证实了植物多酚具有降脂的功效。
有报道称绿原酸可以增加脂联素的分泌，抑制羟甲基戊二酰辅酶A还原酶和酰基辅酶A-胆固醇酰基转移酶等胆固醇合成的关键酶的活性 [20-21]，从而降低总胆固醇水平；黄康 [22]通过给大鼠灌胃绿原酸发现绿原酸可以激活和脂肪酸氧化相关的基因PPARα mRNA表达，促进脂肪分解代谢，进一步说明绿原酸可以调节血脂水平；原花青素可以下调脂肪合成相关基因Fasn和Srebfl，从而引起甘油三酯积聚的减少，并且原花青素可以积聚在小肠腔内，抑制小肠对胆固醇的吸收 [23]，从而降低总胆固醇和甘油三酯水平。本研究结果显示蓝莓叶多酚能降低血清TC、TG、LDL-C水平，升高HDL-C水平，这可能是由于蓝莓叶多酚中含有绿原酸、原花青素等有效成分，本课题组已有研究表明，蓝莓叶多酚中含有原花青素、绿原酸及其衍生物、槲皮素及其衍生物 [24]。
谷草转氨酶和谷丙转氨酶是存在肝线粒体和细胞浆中的转氨酶，是判断肝脏功能的重要指标。当谷草转氨酶和谷丙转氨酶的含量增高，说明肝功能出现异常，本研究结果显示蓝莓叶多酚可以有效降低谷草转氨酶和谷丙转氨酶的含量，说明蓝莓叶多酚对肝脏有保护作用。已有研究证实绿茶多酚能显著降低谷草转氨酶和谷丙转氨酶的含量，保护肝脏 [25]。蓝莓叶多酚与茶多酚属于植物多酚，其结构中含有多酚类羟基，具有较强的抗氧化活性，可以清除自由基，减少肝细胞膜氧化损伤，从而达到保护肝脏的作用。但关于蓝莓叶多酚对肝脏保护作用的确切机理还需要进一步研究。
上述实验说明蓝莓叶多酚可以有效调节小鼠血脂，保护小鼠肝脏，有进一步研究的价值。蓝莓叶多酚可以降低血清总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇水平，升高高密度脂蛋白胆固醇水平，降低肝脏谷草转氨酶和谷丙转氨酶含量，能达到与药物同等水平。因此，蓝莓叶多酚可以作为降脂保肝成分应用到保健品的开发。
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Effect of Blueberry Leaf Polyphenols on Blood Lipids and Liver Parameters in Hyperlipidemic Mice
HUA Yuwei
1,2, LI Chunyang
1,*, WANG Fan
1, LIU Xiaolin
3
(1. Institute of Agricultural Products Processing, Jiangsu Academy of Agricultural Science, Nanjing 210014, China; 2. College of Food Science and Technology, Nanjing Agricultural University, Nanjing 210095, China; 3. Xuzhou Linquan Green Food Beverage Factory, Xuzhou 221711, China)
Abstract：Purpose: To explore the effect of blueberry leaf polyphenols (BLP) at different doses on blood lipids and liver parameters in mice. Methods: Totally 60 healthy mice were randomly divided into 6 groups, including basic group, hyperlipidemic model group, BLP low, middle and high dose groups (at 50, 150 and 300 mg/(kg·d), respectively), and positive control group (lipitor at 3 mg/(kg·d)). The administration lasted for 30 days, and then blood samples were harvested from the eyeballs, and the mice were sacrifi ced for the collection of liver tissues. The serum lipids and liver indexes were determined. Results: The mice administered with BLP at 50 mg/(kg·d) revealed signifi cant decreases in serum TC and LDL-C levels compared with the model mice (P < 0.05); meanwhile, the activity of glutamic oxalacetic transaminase (AST) in liver was lower by 26.7% than that ((329.57 ± 15.06) U/g pro) of the model mice. When the dose was increased to 150 mg/(kg·d), the levels of TC, TG and LDL-C in serum as well as AST activity in liver were signifi cantly decreased when compared with those in the model group (P < 0.05); in contrast, HDL-C was signifi cantly higher than that in the model group (P < 0.05). When the dose was further increased to 300 mg/(kg·d), serum TC, TG and LDL-C were reduced signifi cantly (P < 0.05), but serum HDL-C was increased in comparison with the model group (P < 0.05); the liver index was (4.19 ± 0.14)%, lower than that ((4.98 ± 0.33)%) of the model group, and the activities of AST and alanine transaminase (ALT) in live declined by 32.15% and 22.96% when compared with those in the model group, which were (329.57 ± 15.06) U/g pro and(354.31 ± 23.31) U/g pro), respectively. Conclusion: Blueberry leaf polyphenols have the potential for regulating blood lipids and protecting the liver.
Key words：blueberry leaf polyphenols; blood lipid; liver
DOI：10.7506/spkx1002-6630-201611039
中图分类号：TS201.4
文献标志码：A
文章编号：1002-6630（2016）11-0222-04
引文格式：
华雨薇, 李春阳, 王帆, 等. 蓝莓叶多酚对高脂小鼠血脂及肝脏组织的影响[J]. 食品科学, 2016, 37(11): 222-225. DOI:10.7506/spkx1002-6630-201611039. http://www.spkx.net.cn
HUA Yuwei, LI Chunyang, WANG Fan, et al. Effect of blueberry leaf polyphenols on blood lipids and liver parameters in hyperlipidemic mice[J]. Food Science, 2016, 37(11): 222-225. (in Chinese with English abstract) DOI:10.7506/spkx1002-6630-201611039. http://www.spkx.net.cn
收稿日期：2015-09-07
基金项目：2014年江苏省自然科学基金面上项目（BK20141386）；2014年苏北科技专项资金（富民强县）面上培育项目（BN2014088）
作者简介：华雨薇（1992—），女，硕士，研究方向为食品加工与安全。E-mail：709605606@qq.com
*通信作者：李春阳（1966—），男，研究员，博士，研究方向为营养与活性物质、农产品精深加工。E-mail：709605606@qq.com